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DOI: 10.3791/52343-v
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Rigidez mecánica en el microambiente tumoral juega un papel fundamental en el impulso de comportamiento maligno mediante el aumento de la actividad invadopodios y actomyosin contractilidad. Geles de poliacrilamida utilizando (PaaS), ensayos de invadopodios y de la fuerza de tracción se pueden utilizar para estudiar las propiedades invasivas y contráctiles de las células cancerosas en respuesta a la matriz rigidez.
El objetivo general de este procedimiento es crear geles de poliacrilamida que se puedan utilizar en ensayos de fuerza de indominio, podia y tracción para estudiar las propiedades invasivas y contráctiles de las células cancerosas. Esto se logra activando primero los cubreobjetos de 14 milímetros en los mundos de los platos de flores de vidrio para garantizar que los geles de poliacrilamida se unan al vidrio. A continuación, las soluciones de poliacrilamida para ambos ensayos están preparadas para producir geles con diferentes rigideces o propiedades mecánicas.
A continuación, los ensayos de podios invadidos se preparan con una fina capa de matriz extracelular marcada con fluorescencia para detectar la degradación. Finalmente, los ensayos se siembran con células cancerosas para su incubación durante la noche, seguida de la fijación y tinción del invasor, las placas de podios y la obtención de imágenes de células vivas de las placas de fuerza de tracción. En última instancia, la microscopía de fluorescencia se utiliza para obtener imágenes de la degradación de invasores, podios y matrices extracelulares.
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