Name: Tridimensional Modelo Co-cultura para la interacción tumor estromal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Aprende a establecer un modelo tridimensional de co-cultivo para investigar la interacción entre células de cáncer de pulmón y fibroblastos asociados a tumores en matrices de colágeno.

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Este trabajo fue apoyado por Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 y 25460137).

NOTA: Este estudio fue aprobado por los Comités de Ética apropiados. 1. cultivo primario de fibroblastos humanos de pulmón <ol><li> Colección de tejido pulmonar: <ol><li> Obtener muestras de tejido de pulmón humano de la sala de operaciones quirúrgicas directamente. Recoger aproximadamente 1 cm 3 cuadras del tejido pulmonar canceroso y no canceroso, con la muestra no cancerosa recogido tan lejos de tumor posible. </li><li> Suspender las muestras en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 100 unidades / ml de penicilina, 100 mg / ml de estreptomicina y 0,25 mg / ml de anfotericina B (medio libre de suero). Mantener las muestras en suspensión en 50 ml tubos estériles y traslado al laboratorio. NOTA: Los fibroblastos son altamente migratoria y proliferativa en comparación con otros tipos de células, tales como células epiteliales, endoteliales y células musculares lisas. El método de derivación se aprovecha de estas características de los fibroblastos, y outgrolas células del ala de las secciones de tejido son abundantes en los fibroblastos. Después de varios pases celulares, otros tipos de células no sobreviven y propagar en DMEM con suero bovino fetal al 10% (FBS), resultando en cultivos celulares de fibroblastos purificados. Las células podrían utilizarse 3-7 pasajes siguientes cultivo primario. </li></ol></li><li> Cultura explante y acondicionamiento de crecimiento externo celular: <ol><li> Realizar cultivo primario de fibroblastos utilizando un protocolo informó anteriormente con modificaciones 5. </li><li> En el laboratorio, colocar la muestra de tejido en una placa de 10 cm de cultivo de tejidos sin medio de cultivo y se corta en pequeñas secciones ~ 2-3 mm de tamaño usando pinzas estériles y un bisturí. Durante este proceso, evitar hacer la sección seca, de lo contrario la eficiencia del crecimiento de la célula está alterada. </li></ol></li><li> La separación de la capa de células epiteliales y del tejido conectivo: <ol><li> Remoje las secciones de tejido cortado en medio de cultivo que contiene 2.000 UF / ml dispasa I y cultura durante 16 horas a 4 ° C. &lt;/ Li&gt; <li> Transferencia de las secciones de tejido a un plato, y separar la capa de células epiteliales del tejido conectivo adyacente. Procesar las secciones en un banco limpio para evitar la contaminación de microorganismos. NOTA: Si se necesita un cultivo primario de células epiteliales, realice el paso 1.3. Si sólo fibroblastos deben ser aislados, omita el paso 1.3 porque la cultura explante y celulares pasajes posteriores son desfavorables para las células epiteliales, que producen poblaciones de fibroblastos purificados. </li></ol></li><li> La unión de las secciones de tejido: <ol><li> Picar los tejidos en piezas de 1 mm utilizando dos escalpelos. Si las piezas no son lo suficientemente pequeños, se desprenden más fácilmente del plato, y las células no podrán superar en la superficie del plato. </li><li> Coloque pequeñas secciones de tejido de pulmón separados unos de otros para mantener un área vacía rodea a cada pieza. Hacer arañazos en la superficie de la placa de cultivo de tejidos utilizando una hoja de bisturí para facilitar la unión de secciones de tejido. NOTA: Rascarsetambién parece facilitar la derivación de células, proporcionando pistas a lo largo de la cual las células pueden migrar. <ol><li> Como alternativa, coloque trozos de tejido picado individualmente en cada pocillo de una placa de 6 pocillos y cubrirlos con un cubreobjetos. Coloque la hoja de la cubierta a la superficie de la placa con grasa de silicona. </li><li> Coloque grasa de silicona en dos puntos 1.5 cm de separación, en cada pocillo utilizando un pasador estéril. Cobertura de las piezas de tejido mejora la eficacia del crecimiento de las células y la propagación de células después de varios pasajes. </li></ol></li></ol></li><li> Cultura explante subsiguiente: <ol><li> Añadir suavemente medio de cultivo para el plato antes de las secciones de tejido se secan, como consecuencia de células eficiente se pierde en su mayor parte si las muestras se sequen. No vierta el medio con demasiada rapidez como las secciones de tejido se separe. </li><li> Células de cultivo en DMEM con 10% de FBS. Utilice medio suficiente para cubrir sólo el tejido, pero no demasiado, que permite flotante, como la flotabilidad adicional promueve la separación de laplato. </li></ol></li><li> Pasaje de la célula: <ol><li> Maneje el medio de cultivo con cuidado en todo momento como movimientos repetidos de la placa de cultivo puede dar lugar al desprendimiento de las secciones de tejido. </li><li> Coloque las placas de cultivo en una incubadora a 37 ° C durante 5-7 días. Actualizar el medio cada dos días, y manejar las placas de cultivo mínimamente durante los cambios de medio. Los fibroblastos superan desde el borde de las secciones de tejido en las próximas semanas. NOTA: Después de ~ 2-3 semanas, los fibroblastos outgrowing casi alcanzan la confluencia, dependiendo de la cantidad de área de superficie. </li><li> Lavar las células con PBS 1x, y añadir 1 ml de tripsina I de la placa. </li><li> Después de tripsinización, separar las células usando 9 ml de DMEM suplementado con 10% FBS. Recoger las células suspendidas en el medio en un tubo de 10 ml, junto con las secciones de tejido. Después de la centrifugación para formar sedimentos celulares, resuspender los sedimentos resultantes en el nuevo medio. </li><li> Sembrar las células y las secciones de tejido en un nuevo callejónplato tura, momento en el que los tejidos fallan para insertarse en el plato, mientras que las células se adhieran y crezcan. Al día siguiente, retire los trozos de tejido que flotan por aspiración, y cambiar el medio. Fibroblastos adjuntos se propagan con culturas posteriores. </li></ol></li></ol> 2. tridimensional Co-cultivo de fibroblastos humanos de pulmón y células cancerosas <ol><li> Preparación de las células y reactivos: <ol><li> Utilizar Aproximadamente 2 x 10 5 células epiteliales y 2,5 x 10 5 fibroblastos por pocillo. Preparar el colágeno de tipo IA (3 mg / ml, pH 3), FBS (100%), tampón de reconstitución (NaOH 50 mM, 260 mM NaHCO 3, mM HEPES 200), 5x DMEM, DMEM suplementado con 10% FBS para cultivo de fibroblastos, y un medio de co-cultivo 3D (una mezcla 1: 1 de medio de cultivo de fibroblastos y medio de cultivo para las células cancerosas). </li><li> A549 Cultura células de adenocarcinoma de pulmón, los fibroblastos y el co-cultivo 3D A549 en DMEM suplementado con 10% FBS. </li></ol></li><li> El colágeno gel formación: <ol><li> Lave fibroblastos cultivados en placa de 10 cm con 1x PBS, y añadir 1 ml de tripsina I de la placa. Después de tripsinización durante ~ 5 min a 37 ° C, separar las células usando 9 ml de DMEM suplementado con 10% FBS. Recoger las células suspendidas en el medio en un tubo de 10 ml y centrifugar ellos a 200-300 xg para formar sedimentos celulares. </li><li> Resuspender los sedimentos resultantes en 100% de FBS a una densidad de 5 x 10 5 / ml. </li><li> Preparar el gel de colágeno en el hielo. Enfriar los reactivos, pipetas y tubos en un refrigerador antes de la siguiente procedimiento. Incluso en el hielo, la mezcla solidifica en cierto grado, y el volumen total es menor que la suma de todos los componentes. </li><li> En cada pocillo, preparar el gel de colágeno mediante la mezcla de 0,5 ml de la suspensión de fibroblastos (2,5 x 10 5 células) en FBS, 2,3 ml de colágeno de tipo IA, 670 l 5x DMEM, y 330 l tampón de reconstitución. Permitir que los geles para ajustar fácilmente a temperatura ambiente. <ol><li> Vigorosamente pipeta para asegurarse a mi homogéneaxture. Evitar la creación de burbujas durante el proceso de pipeteado. </li></ol></li><li> Añadir la mezcla (3 ml) a cada pocillo de una placa de 6 pocillos y se deja gelatinizar en la incubadora a 37 ° C sin perturbaciones durante 30-60 min. </li></ol></li><li> Cultivo de células de cáncer en el gel de colágeno: <ol><li> Realizar co-cultivo tridimensional usando un protocolo informó anteriormente con modificaciones 6. </li><li> Resuspender las células cancerosas en el medio de co-cultivo 3D (o en DMEM con 10% FBS en el caso de las células A549) a una densidad de 1 x 10 5 / ml. </li><li> Verter 2 ml de la solución de células resuspendido (2 x 10 5 células) sobre la superficie de cada gel. Modificar el número de células de las células cancerosas o fibroblastos en co-cultivo dependiendo de las condiciones experimentales. </li></ol></li><li> Gel contracción: <ol><li> Incubar geles durante la noche a 37 ° C de modo que las células cancerosas pueden adherirse a la gel de colágeno. Separe cada gel, y generar una &quot;cultura flotante&quot; en cada pozo of la placa de 6 pocillos. NOTA: Mediante el uso de una cultura flotante, diversos cambios en el tamaño de gel son inducidas por la tensión mecánica y la degradación de colágeno, que están mediadas por la interacción celular entre co-cultivaron células cancerosas y fibroblastos. </li><li> Utilice un ángulo 21 G aguja o pequeña espátula para separar cada gel desde el borde del pozo. Cada 2-3 días, refrescan los pocillos con 2 ml de medio de cultivo conjunto 3D. Medir el tamaño de cada gel cada día durante 5 días. </li></ol></li><li> Análisis de geles de colágeno: <ol><li> Mida el contenido de colágeno de cada gel utilizando métodos de cuantificación de colágeno, tales como el ensayo Sircol. Realizar análisis transcriptómica o RT-PCR cuantitativa después de recoger el ARN de los geles 5. </li></ol></li></ol> 3. Aire líquido Interfaz cultura y la invasión de ensayo <ol><li> Después de cultivar los geles de colágeno a 37 ° C durante 5 días, exponga los geles contratados a la atmósfera que los coloca en una malla (70 micras de tamaño de poro) en el nuevo 6-placas de pocillos. Hacer la malla de los tamices de células disponibles comercialmente utilizados para citometría de flujo. </li><li> Llenar suavemente cada pocillo con 11 ml de medio de co-cultivo 3D. </li><li> Coloque los geles sobre la malla con una cuchara estéril y retire cualquier medio restante de los geles. En esta condición, se sumergen geles en el medio mientras exponer la superficie superior del gel al aire. Definir esta condición cultura como interfase aire-líquido. NOTA: Después de 5-7 días de mantenimiento de la cultura interfase aire-líquido a 37 ° C en la incubadora, las células cancerosas invasivas migrar en el gel. Dependiendo del tipo de célula y como resultado de interacciones celulares, grados variables de cambio morfológico celular en las células cancerosas son inducidas por la cultura interfase aire-líquido. </li><li> Para la evaluación histológica, fijar el gel en solución de formalina durante la noche a temperatura ambiente y embeber en parafina. Teñir secciones verticales (4 m) con hematoxilina y eosina (H &amp; E). Realizar análisis inmunohistoquímico on las secciones 4. </li></ol>

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<li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histamine+induces+human+lung+fibroblast-mediated+collagen+gel+contraction+via+histamine+H1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor.</a> Exp. Lung Res. 40 (5), 222-236 (2014).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

CAF forman un componente importante de la ECM que rodea las células del cáncer y no sólo proporcionan un andamio para el tumor, pero también participan activamente en el desarrollo del tumor 7. La acumulación de pruebas revela el impacto de la CAF o sus moléculas relacionadas en el eventual pronóstico, destacando el papel fundamental de la progresión tumoral mediada por CAF 8. En el estudio anterior, hemos empleado el método consecuencia de aislar CAF pulmón 4.</su...

El tejido canceroso puede percibirse como un tipo de órgano, que evoluciona a través de interacciones cercanas entre el cáncer y el microambiente del estroma tumoral, compuesto por fibroblastos asociados al cáncer (CAF), células inmunitarias, vasos tumorales y la matriz extracelular (MEC). Los CAF son la principal fuente de factores solubles (citocinas, factores de crecimiento y quimiocinas) que ejercen efectos mitogénicos, pro-migratorios y pro-invasivos sobre las células cancerosas. También estimulan la formación de vasos tumorales y reclutan células precursoras, como las células derivadas de la médula ósea (BMDC). Los CAF activados están implicados en la producción y remodelación de la MEC, promoviendo así el crecimiento y la diseminación de las célulascancerosas 1. Los CAF también proporcionan un nicho que facilita la colonización y metástasis de las células tumorales y son capaces de conferir fenotipos de células madre a las células cancerosas vecinas. Las observaciones patológicas sugieren que las reacciones estromales o los cambios fibróticos en los tejidos cancerosos son indicativos de un mal pronóstico. Estudios recientes también han demostrado que las características del estroma tumoral, como la firma genética, pueden predecir el pronóstico del paciente. Además, los factores derivados de la CAF pueden modular la sensibilidad a la quimioterapia, lo que pone de manifiesto el papel de las CAF en la determinación de la sensibilidad y la resistencia a los fármacos2.
Dado que los CAF desempeñan un papel multifacético en la promoción de la progresión tumoral a través de vías de señalización que median las interacciones entre los CAF y diferentes tipos de células dentro del microambiente tumoral, han atraído cada vez más atención como nuevos objetivos para las terapias contra el cáncer. La heterogeneidad de las poblaciones celulares dentro del microambiente del cáncer presenta un obstáculo para dirigirse a los CAF. Se han propuesto varios marcadores para los CAF, como la actina del músculo liso α (α-SMA), la proteína de activación de fibroblastos (FAP) y el proten-1 específico de fibroblastos (FSP-1: también llamado S100A4); sin embargo, estos marcadores moleculares no son específicos para distinguir los CAFs de otras células presentes en tejidos no cancerosos3. Por lo tanto, se necesitan más estudios para obtener más conocimiento sobre las propiedades específicas de los CAF. Con este fin, es informativo caracterizar los CAF primarios cultivados en comparación con los fibroblastos normales emparejados por el paciente.
Recientemente, se han reportado análisis sobre CAFs derivados de pacientes en varios tipos de cáncer, revelando patrones de expresión génica y comportamientos celulares únicos en comparación con fibroblastos derivados de tejidos no cancerosos. Utilizando CAFs aislados de tejidos de cáncer de pulmón humano, desarrollamos un método de cocultivo tridimensional, lo que nos permitió evaluar las propiedades de los CAFs de pulmón. En este modelo, investigamos los efectos de los CAFs sobre la invasión de células de cáncer de pulmón, la proliferación y la contracción del gel de colágeno, lo que recapituló experimentalmente las funciones promotoras de tumores de los CAFs de pulmón4.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO</td><td>10437</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo IA</td><td>Nitta gelatina Inc.</td><td>Tampón de reconstitución CELL-1A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nitta gelatin Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cubreobjetos</td><td>NUNC</td><td>174934</td><td></td></tr><tr><td>Grasa de silicona</td><td>Dow Corning Toray</td><td>Grasa</td><td></td>de alto vacío</tr><tr><td>Dispasa I</td><td>WAKO</td><td>386-02271</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos</td><td>BD Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Colador de células (70 &mu; m)</td><td>BD Halcón</td><td>352350</td><td></td></tr></tbody></table>

tridimensional modelo co-cultura para la interacción tumor estromal

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

La progresión del cáncer (iniciación, crecimiento, invasión y metástasis) se produce a través de interacciones entre las células malignas y las células del estroma tumoral circundante. El microambiente tumoral está compuesto por una variedad de tipos de células, como fibroblastos, células inmunitarias, células endoteliales vasculares, pericitos y células derivadas de la médula ósea, incrustadas en la matriz extracelular (MEC). Los fibroblastos asociados al cáncer (CAF) tienen un papel protumorigénico a través de la secreción de factores solubles, la angiogénesis y la remodelación de la MEC. Los modelos experimentales para la supervivencia, proliferación, migración e invasión de células cancerosas se han basado principalmente en cultivos de tejidos monocelulares y monocapa bidimensionales o ensayos de cámara de Boyden. Sin embargo, estos experimentos no reflejan con precisión las condiciones fisiológicas o patológicas de un órgano enfermo. Para comprender mejor las interacciones entre el estroma tumoral o la matriz tumoral, los cultivos multicelulares y tridimensionales proporcionan herramientas más potentes para investigar la comunicación intercelular y la modulación del comportamiento de las células cancerosas dependiente de la MEC. Como plataforma para este tipo de estudio, presentamos un modelo experimental en el que las células cancerosas se cultivan en geles de colágeno embebidos con cultivos primarios de CAFs.

Este método de co-cultivo, imitando el microambiente tumoral, es una herramienta útil para investigar las interacciones entre las células cancerosas y los fibroblastos embebidos en geles de colágeno. En el estudio anterior, tres parámetros fueron evaluados en este modelo experimental: la contracción de gel de colágeno, la invasión de células de cáncer y el cambio morfológico. Proliferación de las células del cáncer se estimó utilizando también Ki67 inmunoticción 4. Muestras de tejido pulmonar se recogieron a ...

Aquí presentamos un protocolo para el cocultivo en tres dimensiones, que es útil para investigar las interacciones multicelulares y la modulación dependiente de la matriz extracelular del comportamiento de las células cancerosas. En este modelo experimental, las células cancerosas se cultivan en geles de colágeno incrustados con fibroblastos asociados al cáncer humano.

Tridimensional Modelo Co-cultura para la interacción tumor estromal

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

El objetivo general de este procedimiento es investigar las interacciones celulares entre células de cáncer de pulmón y fibroblastos asociados al cáncer mediante un método de co-cultivo tridimensional. Esto se logra mediante el cultivo primario de fibroblastos asociados al cáncer de pulmón humano a partir de tejido pulmonar recolectado que se pica en trozos de un milímetro de tamaño. El segundo paso consiste en preparar geles de colágeno embebidos con fibroblastos mezclando una solución de colágeno utilizando las células oculares de tripsina, y transfiriéndola a una placa de seis pocillos para su gelatinización.A continuación, se siembran células de adenocarcinoma pulmonar sobre la superficie de cada gel para preparar un cultivo co-cultivo tridimensional de células cancerosas y fibroblastos, y se separa el gel del borde del pocillo para generar un cultivo flotante. El paso final consiste en realizar el cultivo en interfase aire-líquido y el ensayo de invasión mediante la exposición de los geles contraídos al aire, colocándolos sobre una malla situada en una placa de seis pocillos. Finalmente, se utilizan exámenes histológicos para evaluar la invasión de las células cancerosas y los

three-dimensional-co-culture-model-for-tumor-stromal-interaction

Research

Investigación

JoVE Journal

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Medicina

Se describen las metodologías para el establecimiento...

Heterotípicos tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario

Este video muestra un método para establecer un cocultivo tridimensional de esferoide tumoral y células T. Se prepara un molde de agarosa con micropocillos que contienen esferoides tumorales, seguido de la adición de células T. Después de la incubación, esta configuración permite estudiar la interacción de las células T con los esferoides tumorales en un entorno tridimensional controlado.

Un modelo de cocultivo tridimensional de células T infiltrantes en esferoides tumorales

El cocultivo de cortes de cerebro organotípicos con células de carcinoma permite visualizar cambios morfológicos por fluorescencia, así como de campo brillante (vídeo) microscopía durante el proceso de la invasión de células de carcinoma de tejido cerebral. Este sistema modelo también permite enfoques de cambio de células y de reposición y ofrece una amplia variedad de manipulaciones y análisis.

Sistema Coculture con un cerebro rebanada organotípicos y 3D esferoide de células de carcinoma

Cultivo tridimensional de células epiteliales mamarias sobre una membrana basal reconstituida es un método útil para recapitular la arquitectura in vivo de la benigna de la mama, y para diferenciar el fenotipo maligno de la fenotipo benigna de la mama. Es importante destacar que este sistema se puede aplicar para estudiar los carcinomas invasivos en otros tejidos.

Tres Culturas dimensionales: una herramienta para estudiar normal Acinar Arquitectura vs transformación maligna de las células de la mama

Demostramos un método para generar sustitutos de cáncer de mama en 3D, que se pueden cultivar utilizando un sistema de biorreactor de perfusión para suministrar oxígeno y nutrientes. Después del crecimiento, los sustitutos se fijan y se procesan en parafina para la evaluación de los parámetros de interés. Se explica la evaluación de uno de estos parámetros, la densidad de celdas.

Preparación y análisis de<em&gt; In Vitro</em&gt; Tres de mama Carcinoma de dimensiones Surrogates

Las células cancerosas se incrustan en un gel de colágeno y luego se intercalan en un gel de fibrina acelular para generar un sistema de cultivo 3D en el que se puede monitorear la invasividad y la formación de tumores satélite.

Tridimensional Ensayo de Cultivo para explorar invasividad de las células del cáncer y la formación de tumores satélite

Se desarrolló un sistema modelo in vitro para capturar los cambios arquitectónicos del tejido durante la progresión del carcinoma escamoso pulmonar (LUSC) en un cocultivo tridimensional (3D) con fibroblastos asociados al cáncer (CAC). Este sistema organoide proporciona una plataforma única para investigar las funciones de diversos cambios tumorales-intrínsecos y extrínsecos que modulan el fenotipo tumoral.

Sistema de cocultura multidimensional para modelar la progresión del carcinoma escamoso pulmonar

Se establece un novedoso modelo de esferoides tridimensional basado en la interacción heterotípica de células tumorales y fibroblastos estromales. Aquí, presentamos cocultivo de células tumorales y fibroblastos estromales, imágenes de lapso de tiempo y microscopía confocal para visualizar la formación de esferoides. Este modelo tridimensional ofrece una plataforma pertinente para estudiar las interacciones tumor-stroma y probar las terapias contra el cáncer.

Un novedoso modelo de esferoides de tumor 3D modulado por fibroblastos para el estudio de la interacción tumor-Stroma y el descubrimiento de fármacos

El enfoque presentado evalúa simultáneamente la invasión de células cancerosas en ensayos esferoides 3D y citotoxicidad de células T. Los esferoides se generan en un molde multimicropopo sin andamios. El cocultivo y la incrustación en la matriz de colágeno tipo I se realizan dentro del mismo dispositivo que permite monitorear la invasión de células cancerosas y la citotoxicidad mediada de las células T.

Monitoreo de la invasión de células cancerosas y la citotoxicidad de células T en el cultivo 3D

Faltan modelos integrales in vitro que recapitulen fielmente la enfermedad humana relevante. El presente estudio presenta la creación y cultivo de esferoides tumorales tridimensionales (3D), una herramienta in vitro fiable para estudiar la interacción tumor-estroma en el carcinoma hepatocelular humano.

Un modelo esferoide tridimensional para investigar la interacción tumor-estroma en el carcinoma hepatocelular

Existe una necesidad crítica de modelos de cáncer en 3D que capturen la diafonía heterocelular para estudiar la metástasis del cáncer. Nuestro estudio presenta la generación de estromas-epiteliales heteromulticelulares en un entorno de andamios y libres de andamios que pueden ser utilizados para estudiar la invasión y las distribuciones espaciales celulares.

Células estromales heteromulticelulares en cultivos 3D sin andamios de células de cáncer epitelial para impulsar la invasión

Aprende a establecer un modelo tridimensional de co-cultivo para investigar la interacción entre células de cáncer de pulmón y fibroblastos asociados a tumores en matrices de colágeno.

Tridimensional Modelo Co-cultura para la interacción tumor estromal

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