Imagen Ca Local 2 + Las señales en las células de mamífero en cultivo

El objetivo general de este procedimiento es demostrar la adquisición, detección y análisis de señales de calcio mediadas por IP tres locales en células intactas de mamíferos mediante imágenes basadas en cámaras. Esto se logra cultivando primero las células en los platos de cubierta con fondo de vidrio y cargándolas con las formas permeables a la membrana celular del indicador de calcio fluorescente. CAL cinco 20 y enjaulada IP tres.

El segundo paso consiste en colocar el cubreobjetos en la platina de un microscopio invertido e iluminar la muestra con una luz de 488 nanómetros para excitar el colorante fluorescente sensible al calcio Cal five 20. A continuación, las señales locales de calcio se inducen mediante la exposición de las células a un breve pulso de luz ultravioleta. Esta foto libera IP tres de un precursor enjaulado, de modo que ahora puede unirse al receptor de acetol trifosfato y mediar la liberación de calcio del retículo endoplásmico.