A largo plazo Monitoreo EEG continua en Modelos pequeño roedor de las enfermedades humanas Uso del Sistema Transmisor inalámbrico Epoch

El objetivo general de este procedimiento es implantar eficazmente el transmisor épico para registrar EEG de alta calidad en roedores, como ratas y ratones. Esto se logra exponiendo y secando primero la superficie del cráneo. El segundo paso es perforar agujeros en el cráneo para insertar el transmisor, los electrodos y los tornillos óseos necesarios.

A continuación, se insertan los tornillos óseos y se alinean los electrodos transmisores. El paso final es insertar los electrodos y asegurar el transmisor al cráneo con adhesivos acrílicos. En última instancia, el video de adquisición de datos y el software de revisión se utilizan para monitorear la actividad del EEG 24 7 para capturar todos los eventos del EEG, como convulsiones y picos interictales.

La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de implantación son difíciles de aprender. El tamaño del cráneo del roedor da como resultado un procedimiento quirúrgico complejo pero entrenable. El objetivo principal de esta presentación es simplificar este procedimiento de implantación y hacerlo fácilmente reproducible.

Tuvimos la idea de este método cuando teníamos dificultades para hacer registros electrográficos a largo plazo a partir de modelos animales de epilepsia. Durante las convulsiones, las grabaciones cableadas son propensas a artefactos eléctricos y a una tensión adversa en la interfaz del cráneo del electrodo. Los sistemas de grabación cableados pueden fallar debido a que el animal mastica la correa y rasca el implante.

Este sistema inalámbrico aborda todos estos problemas al tiempo que proporciona hasta seis meses de registros EEG continuos e ininterrumpidos. En preparación para la cirugía, asegúrese de esterilizar completamente el transmisor, remojarlo en etanol al 70%, enjuagarlo con solución salina estéril y sumergirlo en solución salina estéril. Déjalo allí hasta que lo necesites.

La última preparación es asegurarse de que todo en el sitio quirúrgico esté esterilizado. Rocíe y limpie el área circundante y el equipo con etanol al 70%. Después de anestesiar al animal, asegúrese de confirmar la falta de respuesta a un pellizco en el dedo del pie antes de comenzar con la cirugía mientras el animal está anestesiado.

Hazlo cada 15 minutos. El animal anestesiado debe ser fijado primero en su posición en un marco estereotáxico. Use barras para los oídos, pero no las apriete demasiado ya que la piel de los cachorros jóvenes es muy suave.

Una vez asegurado, aplique un cono de nariz para suministrar un 3% de flúor iso. Para mantener al animal caliente, mantenga una almohadilla térmica debajo a 37 grados centígrados. Para animales adultos: También lubricar los ojos.

Ahora esterilice el sitio de la incisión Primero, limpie el cuero cabelludo con etanol al 70% y luego con Betadine, frote la piel con movimientos circulares. A continuación, cubre al animal. Comience haciendo una incisión muy cautelosa en el cuero cabelludo, ligeramente detrás de las orejas, a lo largo de la línea media.

Extienda la incisión unos dos centímetros. Los cachorros jóvenes tienen el cráneo muy blando. Además, haga esta incisión en un solo corte para que sane más rápido.

Así exponer el cráneo. A continuación, con clips para aneurismas, agarre el cráneo y exponga y seque un área donde se conectará el transmisor. Ten en cuenta que, en los cachorros jóvenes, los huesos del cráneo no están fusionados.

A continuación, seque el cráneo donde se conectará el transmisor Para una fuerte unión adhesiva, utilice una pluma de electrocauterización para detener el sangrado en el cráneo. Ahora, utilizando puntos de referencia anatómicos y un atlas cerebral, identifique la ubicación del cráneo para colocar el agujero de la excavación para el registro. A continuación, con una broca de tipo Dremel y fresa, cree dos agujeros en la posición de grabación que no tengan más de 300 micras de diámetro.

A continuación, sobre el cerebelo y detrás de la lambda, coloque un agujero de fresa. Para el electrodo de referencia, verifique que los cables del transmisor estén alineados con los orificios de la fresa. De lo contrario, verifique el ajuste del transmisor y doble suavemente los electrodos para alinearlos con los orificios con pinzas de punta fina.

Ahora recórtelos con unas tijeras quirúrgicas a la longitud deseada. Deben extenderse por encima de la duramadre para los registros de EEG o penetrar hasta estructuras cerebrales definidas. Ahora, sin recubrir los electrodos, aplique suficiente cianoacrilato al transmisor para cubrirlo por completo.

Simplemente no manche los electrodos con pegamento. Si el transmisor va a tomar grabaciones de superficie, baje el transmisor en los orificios y manténgalo en su lugar durante aproximadamente un minuto con una ligera presión. Si la grabación se va a tomar de estructuras cerebrales profundas, monte el transmisor en un soporte de cánula y colóquelo en un brazo estereotáxico.

Es fundamental colocar los electrodos transmisores en los orificios de la fresa sin contaminación por pegamento. La contaminación dará como resultado una señal degradada. A continuación, agregue más gel de cianoacrilato para fortalecer la fijación del transmisor.

Aplique el pegamento en círculos cubriendo las paredes del transmisor. Asegúrese de no cubrir la antena. A continuación, aplique 100 microlitros de un acelerante químico alrededor de la base del transmisor con una jeringa.

Evite que entre en contacto con los tejidos circundantes. Para eliminar el acelerante, lave a fondo el área con medio mililitro de solución salina estéril. Ahora sutura la piel alrededor del transmisor sin cubrirlo.

La parte superior del transmisor debe estar externalizada. Para una buena transmisión de la señal, utilice Vicryl o sutura de seda. Cuando se trabaja con cachorros delicados, la piel debe estar razonablemente apretada alrededor del transmisor y el pegamento circundante.

Ahora transfiera al animal del marco a una manta tibia Para la recuperación, los detalles de los cuidados postoperatorios se proporcionan en el protocolo de texto. Transfiera un solo animal implantado a una cámara de registro. Solo se puede monitorear a un animal implantado a la vez, pero otros animales no implantados pueden estar con él.

Para configurar la grabadora, conecte la fuente de alimentación a la base del receptor. A continuación, conecte la base a un sistema de adquisición de datos a través de BNC. Ahora coloque la jaula en la base del receptor de señal.

La luz de señal debe iluminarse. Ahora se pueden registrar los datos. Primero, conecte la base del receptor a un convertidor de anuncios y conecte el convertidor a una computadora.

Usando la configuración del software, establezca la frecuencia de muestreo de la grabación en 500 por segundo. El transmisor envía señales de EEG entre 0,1 y 100 hercios con una atenuación de ocho decibelios por VE en cada extremo. Recomendamos 500 muestras por segundo mientras se registran los animales, vigile si hay signos de estrés y deshidratación.

Los cachorros no deben estar en la cámara durante más de dos horas. El transmisor fue diseñado con un factor de forma mínimamente dañino y la grabación de larga duración de la batería se podía realizar de forma continua durante seis meses, dependiendo de la capacidad de la batería. Los ratones de P 12 y mayores toleraron muy bien el transmisor, al igual que las ratas de tan solo P 6.

La fijación del cianoacrilato al cráneo no dificultó el desarrollo, lo que permitió la recopilación continua de datos durante todo el desarrollo del animal hasta la edad adulta. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en cuestión de minutos si se realiza correctamente. Recuerde que es importante mantener los electrodos libres de contaminación de pegamento siguiendo este procedimiento. Se pueden realizar otros métodos, como el análisis cuantitativo de detección de convulsiones, para responder a preguntas adicionales como el tiempo, la evolución y la gravedad del estado epiléptico.

Esta técnica allanará el camino para que los investigadores de la epilepsia estudien las convulsiones neonatales y los modelos de accidentes cerebrovasculares perinatales en roedores.