En vivo de imágenes y Seguimiento de tecnecio-99m Etiquetada células madre mesenquimales de médula ósea en Equinos tendinopatía

El objetivo general de este protocolo es seguir de forma no invasiva la distribución y el destino de las células madre mesenquimales de la médula ósea marcadas después de su inyección mediante gammagrafía. El destino de las células madre tras la inyección no se comprende bien. Las principales ventajas de esta técnica son que permite el seguimiento no invasivo de las células madre en múltiples órganos tras su administración, y que la corta semivida del A osteo garantiza su eliminación en 48 horas.

Aunque esto ha proporcionado información sobre el uso de células madre en la terapia de tendinopatías de origen natural, también podría utilizarse para la investigación de terapias para enfermedades óseas y cardíacas. En general, los desafíos para quienes son nuevos en este método son la coordinación de las células y el instrumental para la etiquetación y la preparación del paciente. Para la aplicación inmediata de las cél游戏副本

Tras la administración del anestésico local, limpie el sitio de implante con una solución antiséptica quirúrgica de clorhexidina durante al menos cinco minutos, seguido de una pasada con gasa empapada en etanol. En primer lugar, póngase un par de guantes cuando el animal haya sido preparado, y peletee una alícuota de células madre mesenquimatosas de médula ósea equivalente a una vez 10 a la séptima en un mililitro del sobrenadante de médula ósea mediante centrifugación. A continuación, aspire el sobrenadante con una jeringa de dos mililitros, equipada con una aguja de calibre 18 o 19, dejando aproximadamente 100 microlitros de solución en el tubo.

Transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga sobre hielo y luego use golpecitos suaves para resuspender las células en los 100 microlitros residuales de sobrenadante. Asegúrese de que las células se resuspendan completamente y de que no haya grumos visibles de tejido. A continuación, deje las células a temperatura ambiente.

Ahora mezcle un mililitro del Protec nutate marcado con tecnecio en un vial de H-M-P-A-O. Después de cinco minutos, utilice una jeringa y aguja de un mililitro para tratar las células madre mesenquimales con la alícuota completa de TECNECIO 99 M-H-M-P-A-O. A continuación, tape el tubo, mezcle las células con golpes suaves e introduzca el tubo a temperatura ambiente detrás de un blindaje de plomo.

Después de 30 minutos, abra el tubo con una pinza y use una jeringa de tubo de un mililitro equipada con una aguja de calibre 21 para agregar un mililitro de PBS a las células. Tape el tubo y mezcle las células. A continuación, centrifugue las células y use la jeringa de dos mililitros para transferir cuidadosamente el sobrenadante a un tubo supuestamente protegido etiquetado como lavado uno.

Luego, lave el sedimento con otro mililitro de PBS tal como se acaba de demostrar. Transfiera el segundo lavado al tubo etiquetado como W2 después del segundo lavado. Resuspenda las células completamente en el PBS residual y en la alícuota de sobrenadante de médula ósea frío con hielo, manteniendo el transductor en paralelo con la aguja.

Introduzca lentamente una aguja de calibre 20 de 1,5 o dos pulgadas en la zona de mayor lesión, en el centro de la lesión, en orientación longitudinal. A continuación, utilizando el blindaje adecuado, aspire las células hacia una jeringa de dos mililitros con sistema de bloqueo y aguja de calibre 20, deseche la aguja teniendo cuidado de no perder ningún líquido. Después de conectar la jeringa a la aguja previamente colocada en el tendón, coloque el transductor de ultrasonido debajo de la aguja de manera que la trayectoria de la aguja en el tejido sea claramente visible e inyecte las células a un ritmo lento pero constante dentro de la lesión.

Confirme que el líquido que se expulsa hacia la lesión sea visible en la imagen de ultrasonido como líquido quístico que contiene microburbujas hiperecogénicas una vez que se hayan administrado todas las células, luego retire la aguja. Utilice las opciones de selección de estudio y estática ósea en el software de procesamiento para adquirir imágenes estáticas durante 60 segundos cada una. A continuación, obtenga imágenes laterales del área de la lesión, desde el carpo hasta la extremidad distal, el área equivalente de la extremidad contralateral, el campo pulmonar izquierdo y la glándula tiroides izquierda en los momentos indicados.

Luego, seleccione las herramientas de región de interés y elipse, y remodelar la máscara de selección sobre el área de la lesión según sea apropiado. Finalmente, elija la opción de agregar dos estadísticas para obtener los conteos en la región de interés. Asegurándose de que se registren regiones de interés de tamaño idéntico para cada animal en los diferentes puntos de tiempo.

Después de la administración intralesional, las células se observarán como una zona focal de señal con una dispersión limitada de las células hacia el tejido tendinoso circundante a lo largo del tiempo. En contraste, cuando las células se administran mediante perfusión regional a través de la vena palmar digital, se observa una reducción gradual de la señal en el sitio de inyección. Con el tiempo, los campos pulmonares suelen ser negativos tras la inyección intralesional, aunque ocasionalmente puede detectarse una señal muy focal en los puntos temporales iniciales, que con el tiempo se vuelve más generalizada.

La tiroides permanece negativa también por esta vía de administración. La perfusión regional también demuestra una señal focal en los pulmones, que con el tiempo se vuelve más difusa, aunque la señal es significativamente más intensa en comparación con la observada mediante la vía intralesional. Con una tiroides que a menudo también presenta una señal focal, el recuento total inicial de radioisótopos de las células en el momento cero previo a la inyección, y los recuentos del primer gammagrama en la región de interés.

En tiempos cero posteriores a la inyección, se puede utilizar este valor para calcular el porcentaje de disminución en las cuentas en cada punto de tiempo posterior a la inyección, con el fin de determinar la descomposición predicha del TC 99 M a partir de las cuentas iniciales. Luego también se puede calcular la persistencia de las células que permanecen en el sitio de inyección en cada momento posterior a la inyección. Siguiendo este procedimiento, se pueden aplicar otras vías de menstruación celular para responder preguntas adicionales sobre la capacidad de homing de las células madre mesenquimales tras su desarrollo.

Esta técnica ha allanado el camino para que los investigadores en el campo de la medicina regional exploren métodos destinados a mejorar la retención celular en lesiones tendinosas. Tras ver este video, usted debería tener una buena comprensión de cómo etiquetar células y registrar su distribución y concentración en diferentes sistemas orgánicos. No olvide que trabajar con radiación ionizante puede ser extremadamente peligroso y que son esenciales precauciones como el equipo de protección personal, los monitores de radiación, el blindaje con plomo y la eliminación adecuada de desechos contaminados durante la realización de este procedimiento.