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Aislamiento de macrófagos peritoneales murinos para llevar a cabo análisis de expresión génica Al...
Aislamiento de macrófagos peritoneales murinos para llevar a cabo análisis de expresión génica Al...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Aislamiento de macrófagos peritoneales murinos para llevar a cabo análisis de expresión génica Al Toll-like Receptores Estimulación

Full Text
38,144 Views
08:21 min
April 29, 2015

DOI: 10.3791/52749-v

Antonio Layoun1, Macha Samba1, Manuela M. Santos1,2

1Centre de recherche du Centre hospitalier de l'Université de Montréal,Institut du cancer de Montréal, 2Département de Médecine,Université de Montréal

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Describimos aquí un protocolo sencillo para aislar macrófagos peritoneales murinos. A este procedimiento le sigue la extracción de ARN para llevar a cabo el análisis de la expresión génica tras la estimulación de los receptores tipo Toll.

El objetivo general de este procedimiento es aislar macrófagos peritoneales murn y realizar análisis de expresión génica mediante la estimulación de receptores tipo toll. Esto se logra inyectando primero. 3,8% de medio glicoglicoencefálico en la cavidad peritoneal del ratón para aumentar la migración de monocitos al peritoneo y, por lo tanto, aumentar el rendimiento de macrófagos después de tres días, eutanasiar al ratón e inyectar solución salina tampón de fosfato ECCO frío en la cavidad peritoneal para recolectar las células.

Después de un suave masaje en la cavidad peritoneal, el líquido peritoneal se aspira cuidadosamente. A continuación, se cultivan las células obtenidas y se caracterizan los macrófagos peritoneales provocados mediante citometría de flujo. El paso final es estimular estos macrófagos con diferentes receptores tipo Toll o ligandos TLR y aislar el ARN de las muestras.

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