Transfectar células RAW264.7 con un gen informador de luciferasa

El objetivo general de este procedimiento es transfectar los constructos de los informes de luciferasa en 2 6 4 0,7 células brutas sin activar las células. Esto se logra cosechando primero 2 6 4 0,7 células crudas de una placa de almacenamiento mediante un pipeteo suave y la siembra de células en una placa tratada con cultivo de tejido de 24 pocillos. El segundo paso es transfectar el informe de luciferasa Firefly del plásmido y el plásmido de luciferasa de control se introdujo en las células.

Estos plásmidos deben estar libres de endotoxinas. A continuación, las células se estimulan con los tratamientos deseados, seguidos de lisis celular y se transfieren a una placa blanca de 96 pocillos con un fondo transparente. El paso final es analizar la actividad de la luciferasa de luciérnaga y luego ejecutar la actividad de la luciferasa para calcular la relación entre luciérnagas y luciérnagas.