Un "paciente-Like" ortotópico Singénico modelo de ratón de carcinoma hepatocelular Metástasis

La diseminación metastásica del cáncer es la principal causa de muerte por cáncer. Proporcionamos una descripción en profundidad de nuestra metodología de la cirugía de supervivencia para el establecimiento de un sistema de modelo de ratón singénico "-paciente como" ortotópico para el estudio de los mecanismos de la metástasis en tumores de órganos sólidos.

El objetivo general de este procedimiento es establecer un sistema de modelo de ratón singénico ortotópico similar al de un paciente para estudiar los mecanismos de metástasis en el carcinoma hepatocelular. Esto se logra preparando primero las células de carcinoma hepatocelular de ratón para la implantación. En el segundo paso, se abre el abdomen de un animal receptor singénico y las células se inyectan cuidadosamente en el lóbulo derecho del hígado.

En última instancia, el éxito y la reproducibilidad de esta metodología recomiendan su uso generalizado para dilucidar los mecanismos biológicos de la metástasis del carcinoma hepatocelular. La principal ventaja de esta técnica sobre las técnicas existentes como los modelos tumorales de xenoinjertos de ratón, es que nuestro sistema de modelos tumorales singenéticos permite investigar el papel de la respuesta inmune en la metástasis tumoral. Para demostrar este procedimiento conmigo, Michelle Nadu, una estudiante de pregrado de nuestro laboratorio. Para preparar las células para la implantación, comience lavando un cultivo confluente de 60 a 70% de células de carcinoma hepatocelular dos veces con cinco mililitros de PBS.

Incubar el cultivo celular con dos mililitros de tripsina a 37 grados centígrados. Después de cinco minutos, cuente las células y dilúyalas a cinco veces 10 a la quinta célula por mililitro de PBS. A continuación, transfiera 100 alícuotas de microlitros de las células a un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitros por ratón y coloque las células en hielo.

Antes de comenzar el procedimiento quirúrgico, confirme el nivel adecuado de anestesia con los dedos del pie. Pellizque, aplique ungüento en los ojos de un ratón adulto sano de 16 a 20 gramos y afeite en un área de aproximadamente una pulgada alrededor de la línea media del abdomen del animal. A continuación, apueste por un par de guantes de látex y lave la piel expuesta varias veces con un exfoliante desinfectante jabonoso, seguido de un enjuague estéril de PBS durante aproximadamente cinco minutos.

Cuando la piel esté preparada, deseche los guantes y póngase el equipo de protección personal adecuado. Proporcione una fuente de calor externa para evitar la hipotermia anestésica durante el procedimiento, y luego coloque cinta quirúrgica en las extremidades y la cola del animal para fijar al ratón en posición supina. A continuación, haga una incisión recta inmediatamente inferior al esternón xiphos y utilice un retractor quirúrgico estéril y autorretenedor para abrir el abdomen.

Cuando el hígado sea visible, aspire una alícuota de células en una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 20 e inyecte lenta y cuidadosamente los 100 microlitros de células de carcinoma hepatocelular en el lóbulo derecho del hígado. Después de retirar la aguja, aplique un hisopo de algodón estéril durante al menos un minuto para detener el sangrado. A continuación, utilice una sutura reabsorbible para cerrar el tejido subcutáneo, seguido del cierre de la piel.

Con pinzas quirúrgicas, limpiar la herida con otro exfoliante desinfectante y por vía subcutánea, administrar 100 microlitros de suero fisiológico normal. Luego, inmediatamente después de la cirugía, transfiera al ratón a una jaula limpia sin acompañantes y con ropa de cama de papel durante al menos 24 horas. A estos hígados de ratón BSY se les implantó cinco veces 10 frente a los seis una EM. Células de carcinoma hepatocelular de ratón como se acaba de demostrar.

La evidencia clínica del desarrollo de carcinoma hepatocelular fue observable 63 días después, como lo indica la flecha en un ratón. Se observó un tumor superficial en la superficie del hígado con alguna adherencia a la pared abdominal. Los pulmones de este ratón exhibieron una morfología anormal, así como áreas de necrosis hemorrágica visible.

En un segundo ratón, el hígado parecía macroscópicamente anormal, con una anormalidad muy parecida a un tumor superficial, como se esperaba en el control. Los ratones que no fueron implantados no desarrollaron tumores ni en el hígado ni en los pulmones. Una vez dominado, este modelo de ratón singenético ortotópico puede proporcionar una buena plataforma para dilucidar los mecanismos biológicos de la metástasis y el carcinoma hepatocelular.