Un método para infligir Cerrado Jefe lesión cerebral traumática en Drosophila

El objetivo general de este procedimiento es infligir una lesión cerebral traumática cerrada en la cabeza. En moscas. Esto se logra colocando primero las moscas en un vial a una pulgada del fondo.

El segundo paso es conectar el vial al dispositivo HIIT. A continuación, el resorte se desvía a un ángulo particular y el vial se libera y se deja reposar por completo. En última instancia, se puede utilizar una variedad de ensayos morfológicos y moleculares conductuales para caracterizar las consecuencias de la lesión cerebral traumática resultante.

La principal ventaja de este método sobre los métodos existentes, como el método de caída de peso de roedores, es que muchos animales pueden ser estudiados en un corto período de tiempo. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las lesiones cerebrales traumáticas, como por qué las consecuencias de las lesiones cerebrales traumáticas varían en diferentes individuos. Para comenzar, reúna los materiales brutos enumerados en la tabla uno del protocolo de texto adjunto.

Doble las abrazaderas con un par de alicates para que queden bien ajustadas sobre el resorte. A continuación, centre las abrazaderas en relación con el ancho de la tabla y péguelas entre sí con la abrazadera exterior al ras del borde de la tabla. Ajuste el resorte para que quede paralelo a la longitud de la tabla y luego fije las abrazaderas sobre el resorte y en la tabla con cuatro tornillos.

A continuación, envuelve una tira de cinta adhesiva de velcro. Una vez alrededor del extremo libre del resorte, el borde exterior del velcro debe estar al ras con el extremo del resorte. Coloque la tapa de la cubitera boca abajo, centrada y apretada contra la tabla de madera.

Oriente la región elevada de la cubierta de la cubitera de modo que el borde largo quede paralelo a la anchura de la tabla. Deslice todo el dispositivo contra un objeto fijo, como una pared, de modo que la cubierta de la cubeta de hielo quede encajada entre la tabla y el objeto y no se mueva. A continuación, pegue con cinta adhesiva el transportador de papel a la parte inferior de una bandeja de cartón y colóquela de borde contra la longitud de la tabla para que la marca de 90 grados quede alineada con el resorte.

Cuando se vuelva a colocar en una posición perfectamente vertical, coloque entre una y 60 moscas anestesiadas con dióxido de carbono en un vial vacío y tape el frasco con una bola de algodón ajustada. Luego dibuje una línea en el frasco a una pulgada de su base, derribe las moscas de los lados del frasco y empuje la bola de algodón hasta que coincida con una línea recién dibujada. Espera cinco minutos para que las moscas recuperen la movilidad del dióxido de carbono.

A continuación, inserte el extremo del resorte en el vial hasta que el borde interior del velcro quede al ras con la parte superior del vial. Esto asegura el vial al resorte creando un accesorio de compresión apretado con el resorte plano. Asegúrese de que una pulgada del vial se superponga a la región elevada de la cubierta del cubo de hielo en este momento.

Colóquelo en protección auditiva porque el impacto del vial contra la tapa de la cubitera produce un ruido fuerte. A continuación, sostenga el vial en la región del Velcro con el pulgar y el índice de la mano izquierda con la mano derecha, sostenga la tabla firmemente contra la mesa de trabajo. A continuación, tire del resorte perfectamente recto hacia atrás hasta el ángulo deseado y luego suelte el resorte.

Espere a que el resorte se detenga por completo y luego retire el vial del resorte. Coloque el frasco en la mesa de trabajo y deje que las moscas se recuperen durante al menos cinco minutos. Durante este tiempo, las moscas recuperarán lentamente su movimiento normal.

A continuación, transfiera las moscas a un vial con comida para moscas para su posterior análisis o someta las moscas a otro golpe, los viales se pueden reutilizar muchas veces. El objetivo del experimento fue determinar el efecto de la gravedad de la lesión sobre el índice de mortalidad a las 24 horas. La gravedad del traumatismo se determinó por el ángulo de deflexión del resorte de cero a 90 grados antes de la liberación.

El experimento se realizó en moscas de dos edades diferentes, moscas de cero a siete días de edad y moscas de 20 a 27 días de edad. Los resultados muestran que las lesiones más graves causan un mayor índice de mortalidad. Las moscas más viejas tuvieron un mayor índice de mortalidad en comparación con las moscas más jóvenes cuando la deflexión del resorte fue de 50 grados o más.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo infligir una lesión cerebral traumática con moscas.