Un accidente cerebrovascular trombótico Basado En transitoria cerebral por hipoxia-isquemia Modelo

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo sencillo de accidente cerebrovascular trombótico con una infusión cerebral estable y evaluar los efectos protectores de la terapia con activador tisular del plasminógeno, o TPA. Primero, se demuestra la inducción de hipoxia-isquemia cerebral transitoria o THI mediante la doble ligadura de la arteria carótida común derecha o RCCA y la exposición del animal ligado a condiciones hipóxicas para inducir la trombosis. Después de 30 minutos de condición hipóxica, se sueltan los dos nudos en la arteria carótida.

En el paso final, se muestra la administración y evaluación de los efectos de la terapia con TPA. Alternativamente, se puede investigar el registro en tiempo real del flujo sanguíneo cerebral, la formación del trombo y el grado de obstrucción del vaso. Este modelo puede inducir un accidente cerebrovascular trombót游戏副本 y recuperarse utilizando su propio sistema de coagulación en ratones adultos.

Deseamos utilizar este modelo para estudiar cómo el cerebro regula su propio flujo sanguíneo bajo condiciones de isquemia hipóxica. También lo utilizamos para investigar cómo podemos mejorar la terapia trombolítica. La demostración visual de este método es fundamental, ya que puede ser difícil mantener la temperatura corporal adecuada y una respiración estable durante la infección cerebral.

Pasos de inducción Al menos 15 minutos antes de comenzar el procedimiento. Coloque la camilla quirúrgica sobre una almohadilla térmica, ajústela a 37 grados Celsius y coloque un rodillo cervical hecho con el cilindro de una jeringa de tres mililitros sobre la camilla. Configure el sistema de hipoxia para suministrar 2% de isoflurano en 7,5% de oxígeno equilibrado con 92,5% de nitrógeno, y ajuste los controladores de temperatura.

Coloque un ratón macho C57 black six de 10 a 13 semanas de edad y de 22 a 30 gramos sobre la camilla quirúrgica. Tras confirmar la anestesia mediante el pellizco en la pata, aplique pomada en los ojos del animal. Extienda las cuatro extremidades a lo largo del cuello, enróllelas y sujételas con cinta médica.

Luego, utilizando una crema depilatoria, elimine el vello del cuello del animal y limpie el sitio quirúrgico. A continuación, coloque la camilla quirúrgica bajo un microscopio de disección y realice una incisión cervical derecha de 0,5 centímetros en la piel a lo largo de la línea media. Con un par de pinzas finas, separe la tráquea y el músculo para exponer la arteria carótida común derecha y coloque dos suturas de seda número 5 previamente cortadas debajo de la arteria.

Tenga cuidado de separar la arteria carótida del nervio vago en vivo, no dos ligaduras de seda 5-0 previamente cortadas y sueltas en la ACCD. Luego use suturas de nylon monofilamento 4-0 para cerrar la piel y transfiera rápidamente al ratón al sistema de hipoxia. Coloque la mascarilla facial sobre la nariz y la boca del animal y una sonda rectal para mantener una temperatura corporal de 37,5 grados Celsius durante toda la administración de hipoxia.

Ajuste las lámparas de calor después de 30 minutos. Devuelva el ratón a la camilla quirúrgica y suelte los dos puntos de sutura. A continuación, cierre la herida con adhesivo tisular y devuelva el ratón a su jaula, vigilando al animal hasta que se recupere completamente.

Alternativamente, la imagen de contraste de moteado láser puede utilizarse para examinar el flujo sanguíneo cerebral durante y después de la hipoxia isquémica. Coloque al animal en posición prona. A continuación, abra el cuero cabelludo con una incisión media de un centímetro de longitud para exponer, pero no abrir, el cráneo.

Luego, transfiera inmediatamente el animal al dispositivo de imagen de flujo sanguíneo e inicie el registro del flujo sanguíneo cerebral. Visualice las imágenes del flujo sanguíneo cerebral según las instrucciones del fabricante utilizando el software FLPI para analizar las regiones seleccionadas en tiempo real. Para evaluar los efectos de la terapia con TPA, inyecte a los animales por vía intravenosa en la vena de la cola en el momento adecuado, tras la oclusión carotídea unilateral transitoria y la hipoxia.

Luego, cuantifique el volumen del infarto mediante TTC in vivo 24 horas después de la isquemia hipóxica cerebral transitoria. Al día siguiente, utilice un vibromicrotomo para obtener secciones de un milímetro de grosor. Finalmente, obtenga una serie de cuatro imágenes cerebrales seccionadas mediante microscopía digital y use el software de imagen adecuado para cuantificar el volumen del infarto como la relación entre el área blanca infartada y el área del hemisferio contralateral no dañado.

Lejos de este procedimiento, otros métodos de trombólisis pueden utilizarse para evaluar sus efectos y potencial clínico. Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del accidente cerebrovascular isquémico exploraran la terapia trombolítica en el cerebro.