Name: Humano vasto externo Esquelético biopsia muscular utilizando el Weil-Blakesley Conchotome (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Aprende la técnica de biopsia muscular percutánea del vasto lateral en humanos utilizando el conchotome de Weil-Blakesley. Este método seguro permite obtener tejido suficiente para histoquímica y análisis molecular con mínima incomodidad.

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Deseamos agradecer a los participantes del estudio por hacer posible este trabajo y al personal del Centro de Investigación Biomédica NIHR Southampton y del Centro de Investigación Clínica Wellcome Trust, Hospital Universitario Southampton por ayudar con las mediciones del estudio.
Este trabajo fue apoyado por el Centro de Investigación Biomédica de NIHR Southampton, Nutrición, la Unidad de Epidemiología del Curso de Vida del MRC y la Universidad de Southampton. Este informe es una investigación independiente realizada por el NIHR BRC Funding Scheme. Las opiniones expresadas en esta publicación son las de los autores y no necesariamente las del NHS, el NIHR o el Departamento de Salud. AMB cuenta con el apoyo de una beca de investigación clínica del NIHR, HPP cuenta con el apoyo del Centro de Investigación Biomédica del NIHR Southampton.

Ética declaración: Una descripción del procedimiento de biopsia muscular seguimos dentro de nuestra institución sigue ahora. El procedimiento de la biopsia muscular se utiliza en el Estudio La sarcopenia Hertfordshire que ha sido aprobado por el Comité de Investigación número Hertfordshire 07 / Q0204 / 68. Todos los participantes dieron su consentimiento informado por escrito 20. NOTA: Un solo operario puede realizar el procedimiento, con la ayuda de un asistente que puede involucrar al participante en la conversación con el fin de reducir la ansiedad y asegurarse de que son cómodos en todo momento. La sala de procedimientos debe estar equipado con un lavabo, un sofá regulable en altura, superficies limpias y un carro procedimiento. 1. Preparar el Participante (Figura 2) <ol><li> Pedir al participante para sentar cómodamente, en posición supina sobre un sofá. Exponer el muslo preferido desde el pliegue de la ingle. Extender una lámina absorbente desechable debajo del muslo expuesto. Asegúrese de que la pierna se mantiene recta y relajada durante todo el procedimiento, peroel muslo se tensó momentáneamente para delinear el vasto lateral. </li><li> Marcar el sitio del procedimiento aproximadamente dos tercios hacia abajo una línea imaginaria desde la espina ilíaca superior a la rótula. </li></ol> 2. Preparar la piel (Figura 2) <ol><li> Afeitarse la piel de aproximadamente 4 cm de diámetro que rodea el sitio de la biopsia propuesta con una cuchilla de afeitar estéril y limpiar la piel con un algodón con alcohol. NOTA: Esto es para evitar el atrapamiento de pelo posterior de la herida durante el proceso de curación. Este paso es opcional según la preferencia del operador. </li><li> Infiltrarse en la piel y la fascia que recubre con un anestésico local. Use una aguja 25 G para elevar una ampolla subcutánea de lidocaína al 2% entonces infiltrarse más profundamente en el tejido subcutáneo con una aguja 23 G. Objetivo de penetrar por lo menos a media a una pulgada dependiendo del contenido de tejido subcutáneo en el sitio de la biopsia. Esta profundidad debe ser suficiente para asegurar la FAS suprayacentescia es anestesiado. Permitir 2 - 5 min para que el anestésico de acción. Confirmar la anestesia mediante el sondeo de la piel suavemente con la punta de la pala aguja o bisturí. </li></ol> 3. Preparar un campo estéril (Figura 2) <ol><li> Lávese las manos con jabón y mantener las manos limpias hasta que se lleva puesto un vestido estéril. Cubrir las manos con guantes estériles antes de crear un campo estéril en el carro procedimiento. </li><li> Esterilizar el sitio de la biopsia con una solución de alcohol de clorhexidina / isopropil 2% o un desinfectante de la piel a base de yodo. Aplicar un campo estéril con una abertura de adhesivo para exponer el sitio de la biopsia pero también para mantener un campo estéril. </li></ol> 4. Llevar a cabo el procedimiento (Figura 2) <ol><li> Con un escalpelo tamaño 11, hacer una 5 - mm incisión 10 en la piel y hacia abajo y a través de la fascia suprayacente. Inserte la punta penetrante cerrado de la conchotome través de la incisión en un ángulo recto al eje largo del fémur, a una media profundidad promedio a una pulgada. Si uso requeridola mano libre para sujetar y apoyar el muslo que rodea el sitio de la biopsia, mientras que la punta de la conchotome se abre y cierra dentro del músculo. </li><li> Gire el conchotome a través de 90 - 180 ° para cortar el músculo. Retirar la conchotome y abra la punta sobre una gasa estéril humedecida por la solución salina normal estéril. Repetir el procedimiento dentro del sitio sola herida, si es necesario, para obtener suficiente tejido muscular. La transferencia de la gasa en un recipiente colocado en hielo. Transferir el recipiente a un laboratorio de preparación para procesar el músculo según el protocolo institucional local. </li></ol> 5. Después del procedimiento (Figura 2) <ol><li> Aplique presión directa sobre la herida durante un máximo de 5 minutos. Cerrar la herida con tiras estériles colocándolas paralelas a la herida a diferencia de ángulo recto para evitar potencialmente la eliminación de tejido de la cicatriz y la reapertura de la herida si las tiras estériles se eliminan de forma inadvertida. Coloque un apósito absorbente estéril sobre las tiras estériles y atar una de dos capasVendaje por compresión y seguro con cinta adhesiva. </li><li> Explicar el método de vendaje para heridas al participante, ya que tendrán que realizar un cambio de apósito 3 - 4 días después del procedimiento. Asegúrese de que el participante retira el vendaje de compresión antes de ir a la cama más tarde esa noche. </li></ol> Consejos 6. Publicar Biopsia <ol><li> Informar al participante que es común experimentar cierta rigidez muslo que puede aliviarse mediante el ejercicio suave (por ejemplo., Caminar). El uso de analgésicos simples como el paracetamol. Avisar al participante sobre adormecimiento transitorio alrededor del sitio de la biopsia que puede persistir durante un máximo de dos semanas, así como la posible complicación de infección de la herida. </li></ol> 7. Instrucciones para realizar el procedimiento de publicación Asunto <ol><li> Pedir al participante para evitar la actividad vigorosa durante 72 horas (como escalar, correr, levantar objetos pesados). Pedir al participante para evitar la inmersión en agua durante 48 - 72 h. Sin embargo, dar instrucciones al PARTICIPANt para envolver papel film o similar alrededor del sitio de la biopsia al tener una ducha para mantener el vendaje seco. </li><li> Pídale al participante que cambiar el vendaje después de 3 - 4 días y retirar las tiras estériles después de una semana. NOTA: El participante debe dar instrucciones escritas para el cuidado de la biopsia posterior, aderezos de repuesto y los datos de contacto de emergencia del equipo responsable de la realización del procedimiento. </li></ol>

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</ol>

Ninguno declaró.

Para garantizar la seguridad de los participantes y realizar la biopsia muscular de manera eficiente, es vital prestar atención a los pasos críticos en el protocolo. Los participantes deben ser seleccionados después de considerar cuidadosamente los criterios de exclusión para evitar complicaciones como la hemorragia y cicatrización de las heridas. asepsia estricta durante todo el procedimiento es esencial. Aplicación de la técnica correcta asegurará confort del participante, minimizar el tra...

La obtención de músculo esquelético para el diagnóstico de una miopatía y otras enfermedades degenerativas neuromusculares se basa en métodos seguros y eficientes que son aceptables y no incapacitante para los pacientes 1. Históricamente, los métodos de obtención de tejido muscular para su análisis incluyeron biopsias abiertas realizadas bajo anestesia general o de post mortem. Estas técnicas permiten la visualización directa del músculo y permite un pedazo más grande de músculo para hacer una biopsia. Teniendo en cuenta las desventajas potenciales de estas técnicas tienen al paciente en cuanto a la estancia en el hospital y la recuperación, se introdujeron métodos de biopsia percutánea musculares &#39;semi-abiertas &quot;como alternativas. Esta técnica se realizó primero por Duchenne (1806-1875), que utiliza una aguja auto-construido con un trocar y fue capaz de obtener una muestra de músculo a partir de un sujeto vivo sin anestesia general 2. Desde entonces, varias formas de agujas de biopsia se han utilizado 3,4,5. Sin embargo, la biopsia nEedle desarrollado por Bergstrom en 1962 ha sido la más utilizada en la práctica clínica; tanto en niños como en adultos, así como en la investigación 6,7,8,9,10. Posee un trocar afilado, una cánula de corte y una varilla de empuje para expulsar la biopsia posterior del tejido. Rendimientos musculares obtenidas a partir de este procedimiento se han reportado en un rango de 25 -293 mg después de repetir el muestreo 11,9. Henriksson introdujo el conchotome Weil-Blakesley en 1979 como un método de biopsia de músculo semi-abierto alternativo (Figura 1) 12. El instrumento es una estructura única diferencia de la construcción de Bergstrom y está diseñado como una pinza con una punta afilada morder. El tamaño de la punta puede variar desde 4 mm a 6 mm de ancho. Cuando los dos bordes de la punta penetrante se oponen, se forma un hueco que asegura la captura del músculo. El conchotome se inserta a través de una 5 - mm incisión en la piel 10 y evita la necesidad de un trocar para penetrar en el músculo y la fascia suprayacente como scalpel se puede usar para hacer una pista hasta el músculo. Este método permite controlar la penetración en el tejido con un alto grado de maniobrabilidad 13,14. Es especialmente útil para los sitios donde la presión indebida podría dañar las estructuras óseas subyacentes neurovasculares o por ejemplo., En el sitio de la tibial anterior 15,14. rendimientos musculares utilizando el conchotome pueden ser variables y en nuestra práctica 20 - se han obtenido 200 mg de músculo después del muestreo repetido. Una ventaja potencial de la conchotome sobre la aguja Bergstrom, además del alto grado de maniobrabilidad que ofrece, es que la punta penetrante no necesita ser afilada o reemplazado tan a menudo como el trocar de la construcción de 16 Bergstrom. El objetivo general de la biopsia muscular utilizando el conchotome Weil Blakesley es obtener cantidades suficientes de tejido muscular para permitir la histoquímica y el análisis molecular tanto para diagnóstico y researestudio ch. Es un procedimiento sencillo y seguro que se puede aprender con facilidad. Con esta técnica, el músculo adecuado para biopsia incluye bíceps, tríceps, deltoides, gastrocnemio, tibial anterior, sóleo y los sacrospinals 17,15,7,18,14. La parte más externa del vasto lateral es el sitio más común que se utiliza para realizar una biopsia, ya que evita las principales estructuras neurovasculares en el muslo. Se identifica aproximadamente dos tercios por una línea imaginaria que une la espina ilíaca superior y la rótula. Datos de la morfología del músculo, por ejemplo, el área de miofibrillas, las proporciones de miofibrillas, la densidad capilar derivado de vasto lateral de muestreo están ampliamente disponibles en la literatura que permite la comparación entre los estudios 11,19.

<table><tbody><tr><td>Weil-Blakesley conchotome</td><td>Gebr&uuml; der Zepf Medizintechnik, D&uuml; rbheim, Alemania</td><td>Ninguno</td><td>Punta de mordida de 6 mm</td></tr><tr><td>5 ml 2% lidocaína</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td>Un vial de 5 ml debería ser suficiente para una anestesia adecuada</td></tr><tr><td>Hisopo con alcohol</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 5 ml</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Agujas estériles de 25 G y 23 G</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí estéril tamaño 11</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Cuadrados de gasa estériles</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio 0,9% 10 ml</td><td>Fannin</td><td>1122/002/001</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Drape&trade; Cortina pequeña con abertura adhesiva</td><td>3M</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>ChloraPrep 2% w/v /70% v/v solución cutánea&nbsp;</td><td>CareFusion</td><td>270400</td><td>Two</td></tr><tr><td>Steri-Strip&trade; 1/4 de pulgada x 3 pulgadas Tapones cutáneos adhesivos reforzados</td><td>3M</td><td>R1541</td><td></td></tr><tr><td>Apósito estéril PRIMAPORE 15 cm x 8 cm</td><td>Smith & &nbsp; Sobrino</td><td>66000318</td><td></td></tr><tr><td>Venda de crepé de algodón Hospicrepe 233 7,5 cm x 4,5 m</td><td>Hartmann</td><td>915562</td><td></td></tr><tr><td>Venda cohesiva flexible Co-Plus LF</td><td>BSN Medical</td><td>2904565</td><td></td></tr><tr><td>Lámina absorbente desechable</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de microporos o transpore</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Bata estéril con papel estéril toallas</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr><tr><td>Guantes estériles</td><td>Uso genérico</td><td>Ninguno</td><td></td></tr></tbody></table>

humano<em&gt; vasto externo</em&gt; esquelético biopsia muscular utilizando el weil-blakesley conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

La biopsia muscular percutánea utilizando el conchotome Weil-Blakesley está bien establecida en la práctica clínica y la investigación. Es una técnica segura, eficaz y bien tolerado. El conchotome Weil-Blakesley tiene una punta afilada morder con un 4 - 6 mm de ancho hueco. Se inserta a través de una 5 - incisión mm de la piel 10 y se puede maniobrar para penetración en el tejido controlada. La punta se abre y cierra en el tejido y luego hace girar a través de 90 -180 ° para cortar el músculo. La cantidad de músculo obtenida tras repetidas de muestreo puede variar de 20 mg a 290 mg que se pueden procesar tanto para la histología y los estudios moleculares. La herida debe mantenerse la actividad física vigorosa seco y mantenerse a un mínimo de aproximadamente 72 horas, aunque los niveles normales de actividad pueden reiniciar inmediatamente después del procedimiento. Este procedimiento es seguro y eficaz cuando se presta mucha atención a la selección de los sujetos, la asepsia completa y el cuidado posterior al procedimiento. Derecha e izquierda vlateralis Astus son adecuados para la biopsia depende de la preferencia del participante.

El procedimiento descrito anteriormente es seguro y aceptable en tanto en entornos clínicos y de investigación. Cuando la biopsia se lleva a cabo como parte del proceso de diagnóstico, el músculo se debe elegir dependiendo de los síntomas y signos de debilidad muscular del paciente. El sitio de la biopsia debe estar libre de lesiones anteriores, contracturas o el instrumental de 21,1. En la investigación, las condiciones estandarizadas como el ayuno o la exclusión de los pacie...

Este vídeo demuestra la técnica de biopsia muscular percutánea del vasto lateral humano utilizando el conchotome de Weil-Blakesley.

Humano<em&gt; vasto externo</em&gt; Esquelético biopsia muscular utilizando el Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

El objetivo general de este método es introducir una técnica segura, eficaz y bien tolerada de biopsia muscular del vasto lateral, con el fin de obtener tejido suficiente para la histoquímica y el análisis molecular tanto en estudios de diagnóstico como de investigación. Este método puede ayudar a los investigadores a obtener suficiente tejido muscular con un mínimo de molestias y traumatismos para el participante. La principal ventaja de esta técnica es que es segura y aceptable tanto en el ámbito clínico como en el de investigación.Las complicaciones son bajas y las molestias se mantienen al mínimo cuando el procedimiento se realiza con una técnica estándar. Para comenzar, pida al participante que se acueste cómodamente en un sofá en posición supina. Exponga el muslo preferido del pliegue de la ingle y extienda una lámina absorbente desechable debajo del muslo expuesto.Asegúrese de que la pierna permanezca recta y relajada durante todo el procedimiento, pero el muslo se tense momentáneamente para delinear el vasto lateral. Marque el sitio del procedimiento aproximadamente 2/3 hacia abajo en una línea imaginaria desde la espina ilíaca anterosuperior hasta la rótula. Para preparar

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El propósito de este video es presentar la técnica modificada de biopsia del músculo esquelético de Bergström en sujetos humanos.

Procedimientos de biopsia de músculo esquelético humano utilizando la técnica de Bergström Modificado

Los principales tipos de células adherentes derivadas del músculo humano son las células miogénicas y los fibroblastos. Aquí, las poblaciones celulares se enriquecen mediante la clasificación de células activadas magnéticamente basadas en el antígeno CD56. El posterior inmunomarcaje con anticuerpos específicos y el uso de técnicas de análisis de imagen permiten cuantificar las características citoplasmáticas y nucleares de las células individuales.

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

Se describen los métodos de biopsia de músculo vasto lateral, la preparación de las mitocondrias purificada, y perfilado respirométrico. El uso de volumen muscular pequeña hace que esta técnica adecuada para aplicaciones de investigación clínica.

Evaluación de Preparación y respirometría de mitocondrias aisladas de tejido músculo esquelético Obtenidos percutánea Biopsia con aguja

Aquí presentamos un protocolo para la disección de huesos largos de extremidades traseras (fémures y tibias) del ratón de laboratorio. Describimos además una técnica rápida para el aislamiento de la médula ósea de estos huesos que utiliza la centrifugación para la extracción de la médula ósea del espacio de la médula ósea.

Murino Hind Limb largo Bone La disección y el aislamiento de médula ósea

Ultrasonido 3D imaging (3DUS) permite morfometría rápida y rentable de los tejidos musculoesqueléticos. Presentamos un protocolo para medir longitud volumen y fascículo del músculo usando 3DUS.

Proyección de imagen de ultrasonido 3D: morfometría rápida y rentable de tejido músculo-esquelético

La coloración de Immunohistochemical de las isoformas de cadena pesada de miosina ha surgido como discriminador de estado de la técnica del tipo de fibra del músculo esquelético (es decir, tipo I, tipo IIA, tipo IIX, tipo IIB). Aquí, presentamos un protocolo de tinción junto con un algoritmo novela semi-automatizado que facilita la rápida evaluación de la morfología del tipo de fibra y fibra.

Análisis semi-automatizado de fibra tipo composición y morfología del músculo esquelético de ratón

Presentamos protocolos detallados para realizar experimentos de difracción de rayos X de ángulo pequeño utilizando músculos esqueléticos de ratón intactos. Con la amplia disponibilidad de modelos de ratón transgénicos para enfermedades humanas, esta plataforma experimental puede formar un banco de pruebas útil para esclarecer la base estructural de las enfermedades musculares...

Difracción de rayos X del músculo esquelético murino intacto como herramienta para el estudio de la base estructural de la enfermedad muscular

Presentamos técnicas para aislar, cultivar, caracterizar y diferenciar las células progenitoras musculares primarias humanas (hMPC) obtenidas del tejido de biopsia muscular esquelética.  los hMPC obtenidos y caracterizados a través de estos métodos se pueden utilizar para abordar posteriormente cuestiones de investigación relacionadas con la miogénesis humana y la regeneración muscular esquelética.

Aislamiento, cultivo, caracterización y diferenciación de células progenitoras musculares humanas del procedimiento de biopsia muscular esquelética

Aquí se describe un protocolo para el inmunoetiquetado directo de miofibers necróticas en criosecciones musculares. Las células necróticas son permeables a las proteínas séricas, incluyendo la inmunoglobulina G (IgG). Revelar la aceptación de IgG por miofibers permite la identificación y cuantificación de miofibers que sufren necrosis independientemente de la condición muscular.

Inmunoetiquetado Desgeneración de miofibra en biopsias musculares

Este informe técnico describe una variación de la técnica modificada de Bergstrom para la biopsia del musculus tibialis anterior que limita el daño de la fibra.

Colección de biopsias de músculo esquelético del Compartimiento Superior del Musculus Humano Tibialis Anterior para la Evaluación Mecánica

Aquí, describimos un método detallado para el aislamiento de mitocondrias del músculo esquelético de ratón y el posterior análisis de la respiración por tasa de consumo de oxígeno (OCR) utilizando ensayos respirométricos basados en microplacas. Esta tubería se puede aplicar para estudiar los efectos de múltiples intervenciones ambientales o genéticas en el metabolismo mitocondrial.

Aislamiento de mitocondrias del músculo esquelético de ratón para ensayos respirométricos

Aprende la técnica de biopsia muscular percutánea del vasto lateral en humanos utilizando el conchotome de Weil-Blakesley. Este método seguro permite obtener tejido suficiente para histoquímica y análisis molecular con mínima incomodidad.

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