Un sistema de puntuación rápida fenotípica Neurológica para la Evaluación de progresión de la enfermedad en el SOD1-G93A modelo de ratón de la ELA

El objetivo general de este procedimiento es evaluar de forma rápida y fiable la función neuromuscular de los ratones SOD uno G 93 a mediante la evaluación diaria de la función de sus extremidades traseras mediante un sencillo sistema de puntuación neurológica fenotípica. Esto se logra observando primero las extremidades traseras de los ratones mientras las suspende por la cola. El segundo paso es permitir que los ratones caminen mientras observan su forma de andar.

A continuación, los ratones se colocan de lado para comprobar la presencia o ausencia del reflejo de escritura. El paso final es realizar el análisis de datos ajustando los datos de puntuación neurológica de cohortes de ratones en un modelo de regresión logística ordinal. En última instancia, nuestro sistema de puntuación neurológica fenotípica se utiliza para evaluar la progresión de la enfermedad en el SOD one G 93, un modelo de ratón de un LS con el fin de discernir la eficacia de las intervenciones terapéuticas.

La principal ventaja de este método sobre todas las demás técnicas existentes es que es rápido, sencillo, fiable y mínimamente estresante para los ratones. Las implicaciones de este método se extienden a una terapia de la esclerosis lateral neotrópica o un SL, ya que permite la evaluación rápida de las intervenciones terapéuticas en el modelo de ratón más común de la enfermedad. La demostración visual es fundamental, ya que el método de puntuación neurológica es difícil de aprender porque las diferencias neurológicas pueden ser sutiles.

Comience por alojar ratones machos SOD uno G 93 A de modo que haya un ratón por jaula, hembras SOD un ratón G 93 A hasta dos por jaula. Proporcionar enriquecimiento ambiental para los ratones en forma de cabañas de plástico. Proporcione a los ratones comida y agua en el registro de Lido.

Pesos corporales para todos los ratones y estudios al mismo tiempo. El peso corporal diario es un indicador sensible de la progresión de la enfermedad y de cualquier malestar que pueda resultar del tratamiento farmacológico crónico. Durante el estudio, evalúe la puntuación neurológica de cada ratón diariamente a través de un régimen de tres pruebas realizadas secuencialmente.

Observe cuidadosamente cómo delinear las puntuaciones en los puntos de transición fenotípicos es muy difícil en la primera prueba. La prueba de suspensión de la cola, sostenga el mouse aproximadamente a 1.5 pulgadas de la base de la cola sobre la parte superior del cable de la jaula de inicio. Observe la función de las extremidades traseras durante un período de uno a dos segundos y repita la prueba tres veces.

Para la prueba de caminar. Coloque el mouse sobre una superficie limpia que proporcione algo de tracción y tenga una distancia peatonal de al menos 25 centímetros. Permita que el ratón camine hasta 75 centímetros mientras observa su ga.

Para la prueba de reflejos de escritura, coloque el mouse de lado y use un cronómetro para medir el tiempo que tarda en escribirse sin ayuda desde ambos lados. Solo se requiere una prueba de esta prueba. Puntúe cada extremidad trasera a la izquierda o a la derecha de forma independiente en una escala de cero a cuatro basada en el resultado colectivo de las tres pruebas de observación fenotípica.

Una puntuación sinusal de cero que indica que el ratón es presintomático. Durante la prueba de suspensión, las extremidades traseras se extienden completamente lejos de la línea media lateral y permanecen en esta posición durante dos segundos o más. Además, durante la prueba de marcha, se observa una marcha normal.

Asigne una puntuación de uno que indique la aparición de los primeros síntomas. Si durante la prueba de suspensión, la extremidad trasera está colapsada hacia la línea media lateral, parcialmente colapsada hacia la línea media lateral temblando o anormalmente extendida de alguna otra manera. Además de los síntomas de la prueba de suspensión que acabamos de mostrar, la marcha de un ratón que debería recibir una puntuación de uno debería seguir pareciendo normal o ligeramente más baja.

Asigne una puntuación de dos que indique el inicio de Parsis. Si durante la prueba de suspensión, la extremidad trasera está parcial o completamente colapsada, y además durante la prueba de caminar, las extremidades traseras se utilizan para el movimiento hacia adelante. Sin embargo, los dedos de los pies se curvan hacia abajo al menos dos veces durante una caminata de 75 centímetros o cualquier parte del pie se arrastra para obtener una puntuación de dos.

El ratón también debe ser capaz de escribir a sí mismo después de ser colocado en ambos lados en 10 segundos. Una puntuación sinusal de tres que indica parálisis. Si durante la prueba de suspensión el ratón muestra una parálisis rígida en la extremidad trasera o tiene un movimiento articular mínimo, el ratón puede seguir mostrando movimiento hacia adelante durante la prueba de marcha, sin embargo, no utilizando sus extremidades traseras.

Además de una puntuación sinusal de tres, el ratón debe ser capaz de escribir a sí mismo después de ser colocado en ambos lados en 10 segundos. Finalmente, una puntuación de cuatro, definiendo el punto final humanitario siempre que el ratón muestre parálisis rígida durante la suspensión. La prueba no muestra ningún movimiento hacia adelante durante la prueba de caminar usando las extremidades traseras, y tampoco puede escribirse a sí misma dentro de los 10 segundos posteriores a ser colocada a ambos lados.

Los ratones machos suelen tener una progresión de la enfermedad más agresiva que los ratones hembra, como lo demuestra una mayor proporción de su esperanza de vida que muestra síntomas que se pueden clasificar con una puntuación neurológica de uno en comparación con las hembras. A medida que los síntomas aumentan en el rango de una puntuación neurológica de dos o tres, el número de días que se pasa en cada puntuación es igual en frecuencia en todos los géneros. Aquí se muestra la logística ordinal, gráficos de análisis estadístico generados utilizando el protocolo neuroco que se acaba de describir.

Estos datos proceden de un estudio farmacológico sobre la eficacia de un fármaco en el que se compara una cohorte de SOD uno G 93, un ratón que recibe el compuesto de ensayo TDI 1 73, con una cohorte de ratones que reciben un vehículo. No se observaron diferencias estadísticamente significativas cuando los géneros se analizaron por separado, pero se alcanzó significación estadística cuando se fusionaron los géneros. Aunque mostró tendencias similares, el análisis de supervivencia de Kaplan Meyer no fue lo suficientemente sensible como para revelar diferencias significativas incluso cuando se fusionaron los géneros.

Una vez dominado, el sistema de puntuación se puede aplicar en menos de un minuto por ratón si se realiza correctamente. Después de ver este vídeo, debería tener una buena comprensión de cómo evaluar la progresión de la enfermedad en el SOD one G 93, un modelo de ratón de un LS mediante el uso del sistema Neuroco.