Name: Circunscrita capsular del infarto de modelado mediante técnica photothrombotic (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Aprende a crear un modelo de infarto capsular circunscrito con deterioro motor persistente mediante técnica fototrombótica modificada en ratas. Este método permite estudiar alteraciones motoras y desarrollar intervenciones terapéuticas.

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Este trabajo fue apoyado por una beca del Instituto de Medicina Ingeniería de Sistemas (Imse) y Fondo GIST-Caltech Collaborative (K04592) de GIST y por el Programa de Investigación de Ciencias Básicas a través NRF de Corea financiado por el Ministerio de Ciencia, las TIC y la planificación futura (NRF-2013R1A2A2A01067890).

Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales del Instituto Gwangju de Ciencia y Tecnología (GIST), y todos los procedimientos fueron aprobados por el Cuidado de Animales institucional y el empleo en GIST. 1. Pasos Pre-Lesioning <ol><li> Identificación de la Zona Extremidad anterior de la cápsula interna usando AAV-GFP <ol><li> Casa y manejar las ratas Sprague Dawley (~ 400 g, 11 - 13 semanas) de acuerdo con las directrices institucionales y nacionales. </li><li> Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos y electrodos utilizando un esterilizador apropiado (vapor o en un esterilizador de plasma). Utilice esterilizador de vapor a 121 ° C como ajuste de 30 min para la esterilización y 30 min para seco. </li><li> Anestesiar al animal con una mezcla de clorhidrato de ketamina (100 mg / kg) y xilazina (7 mg / kg) a través de una inyección intramuscular. Comprobar la profundidad de la anestesia por pellizco de la pata. Mantener la temperatura corporal a 37,5 ± 0,5 ° C a través de una almohadilla térmica bajoel cuerpo del animal. </li><li> Colocar el animal en un marco estereotáxico usando una barra de soporte de la oreja y la boca. </li><li> Limpiar y desinfectar la zona quirúrgica con un 70% de alcohol y solución de povidona yodada. Infiltrarse en el clorhidrato de lidocaína al 2% debajo del cuero cabelludo en la zona del cráneo incisión intención de reducir el dolor intraoperatorio. </li><li> Aplicar ungüento oftálmico veterinario para prevenir la sequedad de los ojos. Coloque un paño estéril sobre el animal a los sitios operativos. Mantener todos los procedimientos en condiciones estériles. </li><li> Realizar una incisión en la línea media del cráneo de 2 cm utilizando un bisturí y retraer la piel bilateral con retractores de alambre. Se seca el cráneo con hisopos de algodón y peróxido de hidrógeno al 30%. </li><li> Hacer un agujero con un taladro de la pieza de mano sobre la zona de la extremidad anterior de la corteza motora (AP: 2.5 de bregma, ML: ± 2,5 de la línea media) y despejar las vías con micro-cureta para el virus de la inyección. </li><li> Descongelar el AAV-GFP (2 x 10 12 moléculas de virus / ml) sobre hielo y de carga 1 l de lavirus en una jeringa de 10 microlitros. Coloque la jeringa en el marco estereotáctico. </li><li> Mover la aguja en el orificio pre-hechos y bajar la aguja 1 mm de profundidad en la duramadre. </li><li> Inyectar el virus lentamente (0,1 l / min) utilizando una alta precisión microbomba y dejar la aguja en su sitio durante otros 10 min para permitir que el virus se difunda hacia fuera. </li><li> Después de limpiar el lugar de la operación con irrigación salina, asegurar la herida con sutura de nylon 3-0; liberar la rata desde el marco estereotáctico y la transfiere a una cámara de recuperación. Administrar ketoprofeno (2 mg / kg) a través de una inyección intramuscular para el control del dolor postoperatorio. </li><li> Se mantiene la temperatura corporal (37 ° C) con el cojín de calefacción y administrar antibióticos de clase cefemes segunda generación (0,1%, 1 ml) a través de una inyección intramuscular y clorhidrato de lidocaína al 2% por vía subcutánea, según sea necesario. No deje un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantenerdecúbito esternal. casa sola al animal hasta la recuperación completa. </li><li> Después de 2 - 3 semanas de recuperación, profundamente anestesiar la rata con una sobredosis de clorhidrato de ketamina (300 mg / kg) a través de una inyección intramuscular en el capó. Confirmar la muerte de los animales por la falta de respuesta de los pies pellizcos, el pulso y la respiración. Coloque la supina rata en el capó. </li><li> Abra la cavidad abdominal a través de una &quot;incisión en forma de Y &#39;para abrir la cavidad torácica. Sujete firmemente la aorta descendente con una pinza hemostática y la ruptura de la aurícula derecha del corazón de rata para el drenaje de sangre. Iniciar la perfusión en el ventrículo izquierdo del corazón con frío 1% de paraformaldehído por 5 min (10 ml / min) seguido de 4% de paraformaldehído durante 30 min (10 ml / min). </li><li> Retire la cabeza de la rata de la carcasa con un par de tijeras. Hacer una incisión en la línea media del cuello a la nariz y eliminar los músculos del cuello usando tijeras o pinzas gubias de manera que el cráneo está expuesto. diseccionar suavemente los huesos del cráneo y duras a cabo desde el cerebro. </li><li>Extraer el cerebro y colocar el cerebro de rata en un tubo cónico de 50 ml lleno con 4% de paraformaldehído durante la noche. Al día siguiente, lavar el cerebro con 1x PBS 3 veces y lo coloca en una solución de sacarosa al 30%. </li><li> Después de que el cerebro se hunde completamente a la parte inferior de la solución de sacarosa al 30%, coloque el cerebro en el criomolde con compuesto OCT a -20 ° C en cryotome. Cortar el cerebro en el plano coronal a un espesor de 40 micras y un intervalo de 200 micras. </li><li> Realizar tinción inmunohistoquímica GFP usando el método de deslizamiento 14. Aplicar el anticuerpo primario (1: 200 de anti-proteína fluorescente verde, fracción IgG de conejo) para las secciones de cerebro durante la noche a 4 ° C. El 2 de días, se lava con 1% de fosfato de solución salina tamponada con (PBST) solución de Tween-20 3 veces y aplicar el anticuerpo secundario (1: 500 de IgG de cabra anti-conejo (H + L)) durante 1 hora. Enjuague el portaobjetos con 1% de PBST 3 veces. Coloque la cubierta de vidrio en la sección de cerebro. </li><li> El uso de un microscopio de fluorescencia (longitud de onda de excitación470 nm, longitud de onda de emisión de 525 nm, un aumento de 5X), observar el AAV-GFP axones transducidas en la cápsula interna. Comparación de las ubicaciones de los axones transducidas con el Atlas de cerebro de rata 15 para determinar las coordenadas estereotácticas de los axones transducidas </li></ol></li><li> El ajuste de la intensidad de luz adecuada para capsular del infarto Modelado pre-lesioning <ol><li> La construcción de la interfaz de los nervios óptico <ol><li> Cortar una longitud apropiada (4 cm) de una aguja espinal de calibre 27 con un estilete en el interior con una broca de corte. NOTA: El corte puede comprimir y aplastar la punta de la aguja espinal; retirar el estilete y pulir la punta de la aguja espinal para eliminar la porción aplastada de la aguja espinal y mantener el calibre interior de la aguja espinal. </li><li> Tira de una longitud apropiada (10 cm) de la camisa de la fibra óptica (125 micras con un núcleo de 62,5 micras) de cable de conexión de un lado. </li><li> Inserte el fi óptica unjackedBER en el tubo de metal (diámetro externo: 3,8 mm, diámetro interno: 3,3 mm y longitud: 17 mm), que luego se sujeta alrededor de la fibra. El tubo de metal es útil para llenar el espacio entre la fibra óptica y el cubo de la aguja espinal. Sujetar el inferior media del tubo de metal con un prensador dos veces. </li><li> Aplicar el epoxi curable por calor en la fibra óptica y insertar la fibra óptica dentro de la aguja espinal. Aplicar un epoxi adicional para el espacio vacío en el centro. Curar la resina epoxi durante 20 min a 100 ° C para la fijación estable. </li><li> Escindir la fibra óptica que sobresale hacia fuera de la aguja espinal y pulir la fibra óptica en la punta de la aguja espinal mediante lapeado diamante (pulido) hojas. </li><li> Conecte la parte del conector FC / PC del cable de conexión al acoplador del sistema de láser verde y medir la intensidad de la luz desde la punta de la fibra óptica utilizando la potencia óptica digital y medidor de energía. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. PhotothromBotic infarto en lesiones por la cápsula interna <ol><li> Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos y electrodos utilizando un esterilizador apropiado (vapor o en un esterilizador de plasma). Utilice esterilizador de vapor a 121 ° C como ajuste de 30 min para la esterilización y 30 min para seco. </li><li> Anestesiar al animal (~ 400 g, 11 - 13 semanas) con una mezcla de clorhidrato de ketamina (100 mg / kg) y xilazina (7 mg / kg) a través de una inyección intramuscular. Comprobar la profundidad de la anestesia por pellizco de la pata. Se mantiene la temperatura corporal a 37,5 ± 0,5 ° C a través de una almohadilla de calentamiento en el cuerpo del animal. </li><li> Colocar el animal en un marco estereotáxico usando una barra de soporte de la oreja y la boca. </li><li> Limpiar y desinfectar la zona quirúrgica con un 70% de alcohol y solución de povidona yodada. Infiltrarse en el clorhidrato de lidocaína al 2% debajo del cuero cabelludo en la zona del cráneo incisión intención de reducir el dolor intraoperatorio. Aplicar ungüento oftálmico veterinario para prevenir la sequedad de los ojos. </li><li> Aplicar un campo estéril sobre la unatremo y exponer los sitios operativos. Mantener todos los procedimientos en condiciones estériles. </li><li> Realizar una incisión en la línea media del cráneo de 2 cm y retraer la piel bilateral con retractores de alambre. Se seca el cráneo con permutas de algodón y peróxido de hidrógeno. </li><li> Ajustar la altura de la abrazadera de la nariz hasta el bregma y lambda están alineados en el mismo nivel. Paso crítico: Esta alineación es crítica para acercarse correctamente una estructura más profunda, como en la realización de una lesión del infarto en la cápsula interna en el experimento principal. </li><li> Hacer un agujero (diámetro: 2 mm; PA: -2,04 desde bregma; ML: ± 3,0 de la línea media) usando un taladro para inducir photothrombosis. </li><li> Pulir y limpiar la punta de la fibra óptica de la interfaz óptica. Fijar la ONI al marco estereotáxico sin doblar. Compruebe la punta de la ONI y limpiarla con claridad antes y después de la inserción de la interfaz óptica. </li><li> Medir la intensidad del láser desde la punta de la fibra óptica antes de la inserción de la optical interfaz al sitio diana del cerebro de rata. Ajustar la intensidad del láser de 3,5 mW, según lo confirmado por los pasos previos a la cirugía, en la punta de la fibra óptica. </li><li> Inserte la ONI en el área de orientación de la cápsula interna (-7,8 mm confirmados de la etapa previa a la cirugía) a través del agujero de perforación. </li><li> Mantener la temperatura corporal a 37,5 ± 0,5 ° C durante photothrombosis. Una temperatura corporal más baja no puede producir el grado esperado de miocardio. Inyectar Rose Bengal (2 ml / kg) a través de la vena de la cola. </li><li> Encienda el láser verde de 532 nm durante 90 s 1 min después de la inyección de Rosa de Bengala. Después de la irradiación, retire con cuidado la ONI desde el cerebro. Después de limpiar el lugar de la operación, asegurar la herida asegurar la herida con sutura de nylon 3-0; liberar la rata desde el marco estereotáctico y la transfiere a una cámara de recuperación. </li><li> Para el grupo de operación simulada (SOG), lleve a cabo un procedimiento de lesión de decisiones idénticas, excepto por la inyección de solución salina (0,2 ml / 100 g) en lugar de Rose-Bengala. </li><li>Se mantiene la temperatura corporal (37 ° C) con el cojín de calefacción después de la cirugía y administrar antibióticos de cefalosporina (segunda generación, 0,1%, 1 ml) a través de una inyección intramuscular. No dejar al animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal. No devolver los animales post-quirúrgicos para la jaula ocupada por otros animales hasta que esté completamente recuperado. NOTA: experimento preliminar se realizó en los mismos procedimientos para encontrar la intensidad de la luz óptima desde 1 mW a 5 mW y el procedimiento puede ser necesario para adquirir el grado satisfactorio de lesión en diferentes condiciones. </li></ol> 3. Evaluación de las lesiones por infarto capsular <ol><li> Las pruebas de comportamiento y los animales agrupación <ol><li> Realizar sola pastilla llegar a tareas como se describe por Whishaw et al. 14 para evaluar el déficit motor de la extremidad anterior todos los días durante 1 semana después del modelado de un derrame cerebral. Realizar una sola tarea de pellets llegar(SPRT) en animales con restricción alimenticia (90% del peso corporal control) utilizando Plexiglas transparente (30 x 15 x 35 cm de altura) con un 1 cm de anchura de hendidura y un útil de los alimentos en la parte delantera de la mitad de la pared frontal. </li><li> Coloque una pastilla en el banco de alimentos de forma oblicua contralateral a la extremidad anterior preferida. Administrar 20 gránulos por sesión durante 3 semanas. NOTA: Un número exitosa de SPRT se define como un alcance en el que el animal agarra una bola de comida y la pone en la boca sin que se caiga. </li><li> Calcular la puntuación como porcentaje de tramos de éxito, que se define por la siguiente fórmula: <img alt="ecuación1" src="/files/ftp_upload/53281/53281equation1.jpg" /> NOTA: Dividimos los animales en 3 grupos: el grupo de operación simulada (SOG), grupo de recuperación moderada (MRG), y la mala grupo de recuperación (PRG). Si la puntuación SPRT posterior al accidente cerebrovascular&gt; 50%, clasificamos a las ratas como el MRG, que indica la presencia de una lesión importante, pero no la destrucción completa de la target. Si la puntuación SPRT posterior al accidente cerebrovascular es &lt;50% en comparación con el marcador SPRT carrera previa, clasificamos el grupo como PRG, lo que indica lesioning completa en el objetivo. </li></ol></li><li> La confirmación de un infarto lesiones por neurohistológica <ol><li> Realizar la perfusión cardiaca con 4% de paraformaldehído como se describe anteriormente. Después de que el cerebro se hunde completamente en la solución de sacarosa al 30%, realice seccionamiento coronal a un espesor de 10 micras y un intervalo de 200 micras usando un microtomo o cryotome 4. </li><li> Mancha con H &amp; E, Nissl, Luxol Fast Blue-PAS, Neurofilamentos proteína-L o glial tinción de la proteína ácida fibrilar y observar los hallazgos histológicos para determinar la intensidad óptima de la luz que puede cubrir todo el ancho de la cápsula interna en el área objetivo de observar la tinción 4,17. </li><li> El uso de software ImageJ, medir el volumen de la zona infartada photothrombotic de la cápsula interna en los toboganes del cerebro.<ol><li> Para medir el volumen del área infartada, iniciar el software &#39;ImageJ&#39;. Para abrir los archivos para ser apilados, seleccione &#39;Imagen a pilas&#39; ( &#39;Imagen&#39; → &#39;pilas&#39; → &#39;Imagen a pilas&#39;). Editar nombre de archivo y seleccione &#39;establecer la escala &quot;(&quot; Analizar &quot;→&quot; Establecer la Escala&#39;) para modificar la escala. </li><li> En &#39;plugins&#39;, seleccione &#39;Medir las pilas&#39; para calcular el volumen o área de imágenes. Introduzca el intervalo de distancia de 2 imágenes en &#39;Slice Spacing &quot;. Hacer un dibujo de la ROI (región de interés) de todas las imágenes y haga clic en &quot;Medir&quot;. NOTA: El software &#39;ImageJ&#39; calcula automáticamente el área y volumen de cada imagen y el volumen total de ellos. </li></ol></li></ol></li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El modelo de infarto capsular presentado aquí demuestra una lesión diana con deficiencia motora marcada y persistente en la función de la extremidad anterior. Los modelos anteriores de un derrame cerebral subcortical capsular han demostrado un grado insuficiente de deterioro motor y una rápida 6,8,9 proceso de recuperación. En este sentido, este modelo se asemeja a los casos de infarto capsular clínicos que presentan deterioro funcional a largo plazo. Los pasos más críticos en el ...

Hasta hace poco, la &quot;carrera de la materia gris (GMS) modelos&quot; se han utilizado exclusivamente para comprender la fisiopatología del accidente cerebrovascular y para guiar el desarrollo de nuevos tratamientos. Sin embargo, ha habido una creciente prevalencia de accidente cerebrovascular que afecta a la sustancia blanca subcortical en individuos de edad avanzada, lo que constituye 15 - 25% de los ictus 1,2. Numerosos estudios se han realizado en relación con el uso de modelos de carrera de la SGM, mientras que hay pocos estudios que han utilizado modelos de carrera de la sustancia blanca (WMS). La materia blanca en los roedores es sustancialmente menor que la materia blanca en los seres humanos o primates. En consecuencia, es más difícil de acceder selectivamente y destruir las regiones diana en la sustancia blanca 3. Además, no hay herramientas eficaces se han desarrollado hasta la fecha para destruir selectivamente la medida prevista de la materia blanca de destino. Por lo tanto, ha sido la falta de modelos apropiados para el estudio de los trazos de la materia blanca. st Animalmodelos roke a menudo se utilizan para controlar el progreso de la recuperación de motor para el desarrollo de nuevos rehabilitación y métodos terapéuticos. Es ideal para utilizar un modelo animal que exhibe un déficit neurológico a largo plazo concordante con las alteraciones anatómicas demostrado en el accidente cerebrovascular humana 4,5. En este sentido, la rápida recuperación del déficit motor y la amplia participación del cerebro después del infarto lesioning puede no ser realista en la búsqueda de la investigación del accidente cerebrovascular. Anteriores modelos de infarto capsular han sido realizadas por la oclusión de la carótida interna o las arterias coroideas anterior y difusión de la endotelina-1 (ET-1) en la cápsula interna 6-9. Sin embargo, oclusión de la arteria requiere una cuidadosa disección de las arterias, sino que produce una amplia área de la lesión del infarto, incluyendo la cápsula interna, sin déficit de comportamiento persistentes. Por otra parte, ET-1 no era difusa para destruir por completo el brazo posterior de la cápsula interna, y por lo tanto menos marcada o de persistir Behavioral déficit. Un modelo de infarto photothrombotic ha sido ampliamente utilizado para generar diversos tipos de lesiones del infarto en el córtex y estructuras subcorticales 10. La técnica incluye la administración intravenosa, seguido por la iluminación focal, lo que conduce a la agregación de plaquetas en los vasos pequeños y la generación de lesiones de infarto 10. Photothrombotic técnica se ha utilizado ampliamente para crear lesiones GMS, mientras que rara vez se ha utilizado para generar lesiones WMS 5,11. Para esta técnica, una combinación de Rosa de Bengala colorante y la luz de irradiación ha demostrado ser útil en la destrucción de la estructura diana, causando déficits funcionales correspondientes. El elemento clave de esta técnica es photothrombotic irradiación de luz, ya que determina el tamaño de las lesiones de infarto. Resultados de irradiación de luz en diferentes efectos en la materia gris y la materia blanca, debido a la dispersión de la luz es más de 4 veces mayor en ma blancatter en comparación con la materia gris 12; En consecuencia, si la intensidad de la luz tiene una irradiancia suficientemente baja (&lt;1,140 mW / mm2), se puede limitar la extensión a la lesión photothrombotic afecta a la medida en la sustancia blanca (es decir., Cápsula interna). Por ejemplo, la luz de mayor energía puede inducir infartos, tanto en la materia gris y blanca, sin embargo, menor energía de la luz puede inducir photothrombosis sólo en la sustancia blanca. Por otra parte, la penetración de la energía de la luz era muy limitado. Aproximadamente el 99% de la energía de la luz se pierde más allá de 1 mm de la fuente de luz 13. Por lo tanto, se espera que los objetivos muy precisos, más baja energía la luz induce photothrombosis sólo en la sustancia blanca con una intrusión mínima de la sustancia gris vecino. A continuación, se describe un nuevo método para crear lesiones de infarto en la zona de la extremidad anterior de la cápsula interna en los roedores. Se describe el método de identificación de la zona de la extremidad anterior de la ca internapsule, la tecnología de irradiación de luz, incluyendo el ajuste y la entrega de la luz, y la generación de una lesión del infarto. También describimos las pruebas de comportamiento utilizados para evaluar la integridad de la modelización capsular.

<table><tbody><tr><td>controlador de temperatura DC</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC.</td><td></td><td></td>ATC1000</tr><tr><td>Instrumentos estereotáxicos digitales</td><td>STOELTING CO.</td><td>51900</td><td></td></tr><tr><td>Estimulador eléctrico</td><td>CyberMedic Corp.</td><td>EMGFES 2000</td><td></td></tr><tr><td>Epoxi&nbsp;</td><td>Productos de fibra de precisión, INC.</td><td>PFP-353ND1</td><td>Relación de mezcla: 10 (A): 1 (endurecedor B) por peso&nbsp; Programa de curado: 1 min @150 &deg; C 2 ~ 5 min @120 &deg; C 5 ~ 10 min @100 &deg; C 15 ~ 30 min @80 &deg; </td></tr><tr><td>C Escriba de fibra óptica &nbsp;</td><td>THORLABS, INC</td><td>S90R Cable de</td><td></td></tr><tr><td>conexión de fibra</td><td>KOREA OPTRON Corp.</td><td></td><td>Diámetro exterior: 3 mm &Oslash; 200 y micro; m 0.39 NA FC/PC-FC/PC Fuente</td></tr> de <tr><td>alimentación láser</td> de 1 m <td>CHANGCHUN NEW INDUSTRIES OPTOELECTRONICS TECH. CO., LTD.</td><td>MGL-FN-532nm-200mW-14010196</td><td></td></tr><tr><td>Anillo de engarzado&nbsp;</td><td>DAWOOTECH CO., LTD.</td><td></td><td>Longitud: 19 mm Diámetro interior: 3 mm Diámetro exterior: 3,8 mm Material:</td></tr><tr><td>Controlador de bomba de jeringa SUS Micro4-micro</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC</td><td>95100</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de potencia óptica</td><td>THOLABS, INC</td><td>PM100D</td><td></td></tr><tr><td>Hoja de lapeado (pulido) de diamante</td><td>THORLABS, INC</td><td>LF3D</td><td>Grano : 3 y micro; m</td></tr><tr><td>Chapa de diamante lapeada (pulido)</td><td>THORLABS, INC</td><td>LF6D</td><td>Grano : 6 y micro; m</td></tr><tr><td>Rosa de Bengala</td><td>SIGMA-ALDRICH CO. LLC.</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>Aguja para anestesia raquídea con punta de lápiz (Aguja espinal)&nbsp;</td><td>B.BRAUN MELSUNGEN AG&nbsp;</td><td>4502027</td><td>Tamaño: 27 G Longitud: 88 mm Aguja: 0,40 mm</td></tr><tr><td>Papel de lija impermeable&nbsp;</td><td>DEERFOS CO., LTD</td><td>CC261</td><td>Grano : 1,000 y micro; m</td></tr><tr><td>Nanofil 10&nbsp; y micro; l jeringa</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC</td><td>NANOFIL</td><td></td></tr><tr><td>Nanofil 33&nbsp; Aguja G BVLD</td><td>WORLD PRECISION INSTRUMENTS, INC</td><td>Virus NF33BV-GFP</td><td></td></tr><tr><td></td><td>UNC Vector Core</td><td>AAV2-CamKIIa-eYFP</td><td>2 x 1012 moléculas de virus/ml</td></tr><tr><td>Proteína fluorescente anti-verde, fracción IgG de conejo</td><td>Life Technologies, INC</td><td>A11122</td><td>anticuerpo primario (1:200)</td></tr><tr><td>Cabra Anti-Conejo IgG (H + L)</td><td>Life Technologies, INC</td><td>A11034</td><td>secundario anticuerpo (1:500)</td></tr><tr><td>Ceftezol</td><td>GUJU Pharma CO.,LTD.</td><td>A27802741</td><td>0,1%, 1 ml</td></tr><tr><td>de inyección de clorhidrato de lidocaína</td><td>JEIL PHARMACEUTICAL CO.,LTD.</td><td>A04900271</td><td>2%, 1 ml</td></tr><tr><td>Taladro de mano</td><td>Seshin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medidor digital de potencia y energía</td><td>óptica THORLABS, INC</td><td>PM100D</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>UNIBIOTech</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

circunscrita capsular del infarto de modelado mediante técnica photothrombotic

Circumscribed Capsular Infarct Modeling Using a Photothrombotic Technique

El reciente aumento en la tasa de prevalencia de accidente cerebrovascular en la materia blanca exige investigación específica en el campo. Sin embargo, la falta de un modelo animal pertinente para el accidente cerebrovascular de la sustancia blanca ha obstaculizado las investigaciones de investigación. Aquí, describimos un método novedoso para crear un infarto capsular circunscrito que minimiza el daño a las estructuras vecinas de materia gris. Utilizamos el rastreo neural previo a la cirugía con proteína fluorescente verde adenoasociada al virus (AAV-GFP) para identificar la organización somatotópica del área de las extremidades anteriores dentro de la cápsula interna. El ajuste de la intensidad de la luz en función de las diferentes propiedades ópticas de la materia gris y blanca contribuye a la destrucción selectiva de la materia blanca con una conservación relativa de la materia gris. El posicionamiento preciso de la interfaz óptico-neuronal permite la destrucción de toda el área de las extremidades anteriores en la cápsula interna, lo que conduce a un déficit motor marcado y persistente. Así, esta técnica produce lesiones de infarto capsular altamente replicables con un déficit motor persistente. El modelo será útil no solo para estudiar el accidente cerebrovascular de la sustancia blanca (WMS) a nivel conductual, de circuito y celular, sino también para evaluar su utilidad para el desarrollo de nuevas intervenciones terapéuticas y de rehabilitación.

El método que aquí se presenta tiene por objeto crear un infarto capsular circunscrita con un déficit motor persistente. Por lo tanto, es fundamental para determinar correctamente el objetivo dentro de la cápsula interna en la etapa de pre-cirugía. El mapeo somatotopic de fibras piramidales en la cápsula interna no ha sido resuelto hasta la fecha. Para identificar correctamente el objetivo dentro de la cápsula interna, el área de la extremidad anterior deberán estar delimitadas. Una inye...

Este manuscrito describe una técnica de modelado de infarto capsular. Aquí hemos utilizado una técnica photothrombotic modificado con baja intensidad de la luz después de la cartografía de destino antes de la cirugía. Usando esta técnica, hemos creado un modelo de infarto capsular circunscrita con deficiencia motora persistente.

Circunscrita capsular del infarto de modelado mediante técnica photothrombotic

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for ...

El objetivo general de esta técnica es crear un modelo de infarto capsular circunscrito con una discapacidad motora persistente, utilizando la técnica de foto-trombosis. Antes de inducir el infarto capsular, es necesario identificar el área del miembro anterior en la cápsula interna mediante la introducción de un virus adeno-asociado que expresa GFP en el área del miembro anterior de la corteza motora. Comience colocando una rata anestesiada en un marco estereotáxico.Luego afeite la cabeza de la rata y esterilice el cuero cabelludo utilizando alcohol al 70 % y solución de povidona y yodo. Inyecte clorhidrato de lidocaína al 2 % bajo el cuero cabelludo en el área de la incisión planeada para reducir el dolor intraoperatorio. Aplique una pomada oftálmica para prevenir el secado de los ojos.Y coloque una gasa estéril sobre el animal. Después de realizar una incisión media de dos centímetros en el cuero cabelludo, posicione el brazo estereotáxico para identificar el área del miembro anterior de la corteza motora según las coordenadas estereotáxicas. Taladre un orificio de entrada en esta posición.Mueva la aguja hacia el orificio perforado y baje la aguja un milímetro a través de la dur

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Este video muestra el procedimiento para generar un accidente cerebrovascular fototrombótico en un modelo de ratón mediante la iluminación láser de un cráneo intacto después de la administración de un tinte fotosensible.

Modelado de accidente cerebrovascular fototrombótico en modelo de ratón: una técnica de iluminación láser a través del cráneo de ratón después de la administración de un tinte fotosensible para inducir fototrombosis

Photothrombosis es una técnica rápida, mínimamente invasivo para la inducción de infarto pequeño y bien delimitado en áreas de interés de una manera altamente reproducible. Es especialmente adecuado para el estudio de las respuestas celulares y moleculares que subyacen a la plasticidad cerebral en ratones transgénicos.

Isquemia photothrombotic: Un modelo de lesión cortical fotoquímico mínimamente invasiva y reproducible de Estudios Carrera Ratón

Aquí, describimos un enfoque de microscopía óptica semi-invasiva para la inducción de un coágulo fototrombótico de Bengala Rosa en la corteza somatosensorial de un ratón in vivo.  Se describen los aspectos técnicos del procedimiento de imagen, desde la inducción de un evento fototrombótico hasta la aplicación y la recopilación de datos.

Rosa de Bengala Photothrombosis por imagen óptica confocal<em&gt; En Vivo</em&gt;: Un modelo de solo recipiente Stroke

La fototrombosis es un procedimiento mínimamente invasivo y altamente reproducible para inducir isquemia focal en la médula espinal y sirve como modelo de lesión de la médula espinal en ratones.

Photothrombosis inducida por isquemia focal como un modelo de lesión de médula espinal en ratones

Este protocolo describe la aplicación de la tomografía combinado fluorescente en el infrarrojo cercano (NIRF) de formación de imágenes y micro-computarizada (microCT) para la visualización de tromboembolia cerebral. Esta técnica permite la cuantificación de la carga de trombo y la evolución. La técnica de imagen NIRF imagina y marcado con fluorescencia de trombos en el cerebro escindido, mientras que la técnica microCT visualiza trombo dentro de animales vivos utilizando nanopartículas de oro-.

Imagen Fluorescente combinado del infrarrojo cercano y la tomografía computarizada-Micro para visualizar de manera directa tromboembolia cerebral

El accidente cerebrovascular es un problema global con opciones de tratamiento mínimas y sin terapia clínica actual para regenerar el tejido cerebral perdido. Aquí describimos métodos para crear un accidente cerebrovascular fototrombótico preciso en la corteza motora de roedores y la posterior inyección de biomateriales de hidrogel para estudiar sus efectos sobre la regeneración de tejidos después del accidente cerebrovascular.

Inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular

Los modelos tradicionales de ictus fototrombótico (SPT) inducen principalmente agregados plaquetarios densos de alta resistencia al tratamiento lítico con activadores tisulares del plasminógeno (tPA). Aquí se introduce un modelo de PTS murino modificado mediante la coinyección de trombina y colorante fotosensible para la fotoactivación. El modelo de SPT potenciado con trombina produce coágulos mixtos de plaquetas:fibrina y es muy sensible a la trombólisis tPA.

Un modelo de accidente cerebrovascular fototrombótico enriquecido con fibrina y sensible al tPA

Aquí se describe el modelo de accidente cerebrovascular fototrombótico, donde se produce un accidente cerebrovascular a través del cráneo intacto mediante la inducción de la oclusión microvascular permanente utilizando iluminación láser después de la administración de un tinte fotosensible.

Modelado de accidente cerebrovascular en ratones: lesiones corticales focales por fototrombosis

Utilizando un enfoque totalmente óptico, se induce un accidente cerebrovascular isquémico mientras se registra simultáneamente la actividad neuronal de Ca2+ utilizando un biosensor fluorescente en el núcleo de accidente cerebrovascular emergente de un ratón despierto y que se comporta.

Fototrombosis y fotometría de fibra simultáneas para inducir y monitorear el accidente cerebrovascular isquémico en ratones que se comportan

Este protocolo proporciona un método integrado que incluye la administración viral, la implantación de optrode, la inducción fototrombótica, el registro simultáneo de la actividad de astrocitos y neuronales, y la estimulación optogenética de los astrocitos. Este método integrado tiene como objetivo proporcionar una investigación simultánea de la relación astrocito-neurona a lo largo de las etapas agudas a crónicas del ictus isquémico.

Un método integrado para el modelado fototrombótico del ictus y el registro in vivo de la actividad neuronal y astrocítica en ratones en comportamiento

Aprende a crear un modelo de infarto capsular circunscrito con deterioro motor persistente mediante técnica fototrombótica modificada en ratas. Este método permite estudiar alteraciones motoras y desarrollar intervenciones terapéuticas.

Circunscrita capsular del infarto de modelado mediante técnica photothrombotic

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