Ortotópico de la extremidad posterior de trasplante en el ratón

El objetivo general de este video instructivo es presentar un modelo murino de trasplante ortotópico de extremidades traseras utilizando una técnica de manguito sin sutura para la anastomosis supermicrovascular. Los modelos animales son fundamentales para la comprensión y el tratamiento de las enfermedades humanas y han allanado el camino para que el trasplante reconstructivo se convierta en una realidad clínica en las últimas dos décadas. Este modelo en particular puede ayudar a responder preguntas clave relacionadas con la trayectoria fisiológica de una respuesta aloinmune específica de los aloinjertos compuestos vascularizados.

La principal ventaja de la técnica es que la técnica del manguito sin sutura reduce significativamente la complejidad y aumenta la tasa de éxito de este procedimiento supermicrovasular. Después de confirmar el nivel adecuado de sedación mediante un pinzamiento de los pies, afeitar la extremidad trasera y la ingle del animal donante. A continuación, desinfecte la piel con yodo de povidona al 10% y coloque al ratón bajo un microscopio de disección.

Con las tijeras, comience la extracción de la extremidad donante con una incisión en la piel de la ingle proximal a la zona media del muslo. Conectando circunstancialmente la incisión para demarcar la extremidad posterior del resto del resto del cuerpo. Identificar y diseccionar la arteria, la vena y el nervio femoral.

A continuación, utilice fórceps y microtijeras para separar las tres estructuras. La prevención de microtraumatismos en la pared del vaso mediante el uso de una técnica sin contacto es esencial para garantizar el éxito del procedimiento. Una vez disecado el pedículo vascular, utilice las microtijeras para dividir los vasos en el ligamento inguinal.

Continúe la división de los grupos musculares ventrales y dorsales individuales aproximadamente en la mitad del muslo para separar el injerto del animal donante. A continuación, secciona el fémur cortando en el centro de la diáfisis femoral. Con una jeringa equipada con una aguja de calibre 33, enjuague la extremidad extraída con dos ml de solución salina heparinizada de cuatro grados centígrados.

A continuación, coloque manguitos individuales de poliimida en la vena y la arteria femoral. Y guarde el injerto en una gasa de algodón húmeda en una placa de Petri a cuatro grados centígrados hasta su inserción. El montaje de la pesis en los manguitos de poliimida es el paso más crítico del procedimiento.

Dado que la malnotación puede perjudicar el flujo sanguíneo y la presión inadecuada puede exponer algunos tejidos antibióticos, aumentando la probabilidad de formación de trombosis. Para extraer la extremidad posterior receptora, inyectar 0,3 ML de solución salina tibia por vía intraperitoneal. Haga una incisión circunferencial alrededor de la extremidad posterior e identifique y diseccione la arteria, la vena y el nervio femoral como se acaba de demostrar.

Una vez disecado el pedículo vascular, pinza los vasos femorales en el ligamento inguinal. Y corte los vasos distalmente en la arteria epigástrica superficial. Continúe dividiendo los grupos musculares ventrales y dorsales individuales aproximadamente en la mitad del muslo para separar la extremidad trasera nativa del animal receptor.

A continuación, secciona el fémur en el centro de la diáfisis femoral. A continuación, utilice una aguja espinal de calibre 20 como varilla intramedular y alinee los huesos del fémur del receptor y el injerto en la posición nativa de la extremidad posterior. Conecte los huesos del fémur del donante y del receptor.

Utilice material de sutura absorbible para cubrir los grupos musculares ventrales y dorsales. Realizar esta alineación de manera precisa y rápida evita la pérdida prolongada de sangre de la cavidad ósea. Para conectar los vasos femorales, tire del lado receptor del vaso sobre los manguitos de poliimida.

Y use una sutura de nailon 10-0 para fijar el vaso receptor en el manguito con un lazo circunferencial. Cuando el recipiente se haya estabilizado, suelte las abrazaderas. Y verifique visualmente que los puños no estén mal girados.

Verifique visualmente la homeostasis y use la electrocauterización para detener cualquier fuente de sangrado. A continuación, cierre la piel con suturas de nailon no absorbibles. Y vigilar al animal hasta que esté completamente recuperado.

La realización de un alotrasplante compuesto vascularizado en un modelo de ratón utilizando esta técnica de manguito sin sutura facilita el logro de una supervivencia excelente y a largo plazo del injerto y del animal. Además, esta técnica representa un método fiable para obtener resultados reproducibles de rechazo gradual del injerto y un modelo de alotrasplante compuesto vascularizado, tal y como se documenta en las imágenes. De hecho, el análisis histológico de los tejidos obtenidos de animales sometidos a rechazo subraya aún más la dinámica reproducible del rechazo del aloinjerto en este modelo murino.

Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 90 a 120 minutos, si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe prestar la máxima atención a la manipulación del tejido y evitar cualquier tipo de sangrado. Tras su desarrollo, esta técnica puede abrir el camino a los investigadores en el campo del trasplante reconstructivo.

Explorar cuestiones mecanicistas básicas relacionadas con la aloinmunidad de aloinjertos compuestos vascularizados. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar todos los pasos críticos de un trasplante ortotópico de extremidades traseras en el ratón.