Name: Evaluación de planar-Cell-polaridad fenotipos en ciliopatía ratón mutante cóclea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Aprenda a examinar la cóclea de ratón mutante ciliar para fenotipos de polaridad celular planar usando microscopía electrónica de barrido e inmunohistoquímica. Este protocolo permite analizar el desarrollo del oído interno.

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El autor desea agradecer a Mateo Kelley, Tiziana Cogliati, Jessica Gumerson, Uwe Wolfrum, Rivka Levron, Viola Kretschmer y Zoe Mann y para su evaluación crítica del manuscrito. Este trabajo fue financiado por el Premio Sofja Kovalevskaya (Fundación Humbodlt) y la Universidad Johannes Gutenberg, Mainz, Alemania.

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El autor declara que no tiene intereses financieros contrapuestos.

Cuando se prepara el tejido coclear para el análisis, hay algunos puntos clave a tener en cuenta. En primer lugar, las diferencias en el fondo genético puede modificar el fenotipo coclear, por lo que es necesario analizar y comparar sólo los controles de la misma camada. En segundo lugar, se requiere la eliminación completa de la membrana tectorial para obtener las mejores imágenes con inmunohistoquímica y es esencial para SEM. La membrana tectorial es una estructura opaca y puede oscurecer las células del epitelio sens...

cilios primarios son apéndices largos basados ​​en microtúbulos que se extienden desde la superficie de la mayoría de células de mamífero. cilios primarios se confunde a menudo con cilios móviles, de los cuales siempre hay múltiples por célula, y cuya finalidad es mover fluido a través de superficies de la membrana. cilios primarios, por el contrario, adoptar funciones sensoriales y son por consiguiente también se hace referencia como cilios sensorial. Una vez en el olvido, este orgánulo ha sido recientemente &#39;redescubierto&#39; como resultado de su asociación con una multitud de enfermedades genéticas humanas 1. Idealmente posicionado como un orgánulo de señalización, el cilio primaria se ha demostrado que regulan numerosas rutas de señalización, muchas de las cuales son importantes no sólo en la homeostasis del tejido y la enfermedad, sino también durante el desarrollo 2. Una de las primeras vías de señalización demostrado estar asociadas con la disfunción cilios fue la vía de señalización Wnt no canónica, conocido también como vía de la polaridad celular plana (PCP) <sup<html> &gt; 3. Esta cascada de señalización inicialmente identificado en Drosophila, es fundamental para la embriogénesis; en particular para los procesos de convergencia y de extensión y para la orientación correcta de las células en el plano de los epitelios 4. La señalización secuencial de un conjunto básico de proteínas reguladoras traduce las señales direccionales que en última instancia conducen a reordenamientos del citoesqueleto y dan como resultado la polarización coordinada de las células epiteliales en un plano 5. El proceso de convergencia y la extensión es absolutamente necesario para el conducto coclear para alargar y para el correcto patrón celular 6. Como esto se regula a través de la activación de la vía de PCP, uno de los fenotipos más llamativos de mutantes PCP cóclea es un conducto coclear acortado con epitelios sensoriales desorganizado 7. Del mismo modo, los mutantes de ratón, que carecen de cilios, también presentan una convergencia y la extensión fenotipo tan 8,9, aunque precisamente cómo esto está regulado aún no se ha dilucidado. ve_content &quot;&gt; Debido a que los procesos de convergencia y de extensión son críticos para la derivación del conducto coclear, y el patrón celular de los epitelios sensoriales dentro del conducto coclear, la cóclea en desarrollo es un órgano ideal en el que para examinar la señalización de PCP durante el desarrollo de los vertebrados. El órgano de Corti, el término dado al epitelio sensorial especializado que recubre el conducto coclear, está compuesto por células de soporte no sensoriales y las células ciliadas mechanosensory que deben ser orientados de manera uniforme para la cóclea para funcionar 10. las células ciliadas mechanosensory se llama así debido a la manojos estereociliar que se extienden desde la placa cuticular (superficie apical) de cada una de las células ciliadas sensoriales 11. Estos actúan como transductores primarios de mechanosensation ya pesar de su nomenclatura como estereocilios, en realidad están compuestas por microvellosidades a base de filamentos de actina modificado. Dentro de cada pelo en forma de V haz, tres filas de estereocilios se organizan en un pa altamente ordenada y regular,ttern caso de una manera similar a la escalera. Cilios real basado en los microtúbulos, cinetocilios llamados, son necesarios para el desarrollo y orientación de los haces estereociliar 12. Sobre cada célula de pelo, una sola cinocilio está unido físicamente al haz estereocilios, centralmente situada adyacente a la fila más alta de estereocilios. La función precisa de la cinocilio no está claro, y una hipótesis es que la cinocilio &#39;tira&#39; los estereocilios en forma a medida que maduran desde microvellosidades 12. En los vertebrados, cinetocilios en la cóclea solamente están presentes de forma transitoria y se retraen de las células pilosas en los ratones antes de la aparición de la audición 11,13,14. La pérdida completa de los cilios en los resultados en desarrollo cóclea en conductos cocleares acortar gravemente, mal formado y mal orientada haces estereociliar, así como los cuerpos basales mis-posicionado 8,9. Un cilio funcional no es sólo formaba parte del axonema ciliar. Muchas proteínas asociadas con los ciliosse producen en función de los complejos localizados en subdominios cilios afines, como la basal del cuerpo, zona de transición, o axonema ciliar 15. El cuerpo básica, derivada del centríolo madre del centrosoma, es también un centro organizador de microtúbulos por los microtúbulos se extienden lejos del cilio en el cuerpo celular y puede regular el tráfico intracelular, así como el tráfico ciliar. La zona de transición ciliar es otra región donde la función ciliar se regula en función de la organización de importación y exportación de compuestos ciliares 16. Múltiples estudios han identificado una conexión entre los cilios y Wnt no canónica (de señalización PCP), aunque el mecanismo exacto no está claro 17. La redundancia de ciliares y PCP genes y la sensibilidad de la polaridad celular a anormalidades celulares generalizadas, hacen que sea difícil para enlazar directamente a una mutación específica déficit de PCF. Una de las salidas de lectura de la señalización de PCP es el posicionamiento del cuerpo basal y primarcilio y, por lo tanto, la segregación de la primaria de los defectos secundarios es un reto. Algunos estudios en el pez cebra y el ratón mutantes han sugerido ninguna conexión entre cilios y la señalización Wnt 18-20. Las discrepancias en los datos siempre son representativas de las especies, tejidos, o las diferencias temporales que dependen de las contribuciones ciliares hacia la señalización de Wnt. Además, la capacidad de respuesta normal de Wnt podría ser retenida si cuerpos basales siguen siendo funcionales. Una comprensión más profunda de la función de las proteínas ciliares en vías de señalización celular y otros fenómenos biológicos es crucial para nuestra comprensión de la biología celular y del desarrollo, así como para el desarrollo de estrategias de tratamiento dirigidas.

<table><tbody><tr><td>Herramientas/Equipos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastómero de silicona - Sylgard 184</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>761028-5EA</td><td>Ver nota 2</td></tr><tr><td>Micro tijeras de disección-hoja recta</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas (n.º 5 y 55) y pinzas romas</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección.</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio de vidrio sin recubrimiento</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>deslizamientos de cubierta de microscopio (22 mm y veces; 40 mm y veces; 0,15 mm)</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipetas de transferencia</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pines de Minutien</td><td>&nbsp; Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Portamuestras SEM</td><td>tousimis</td><td>8762</td><td></td></tr><tr><td>Microscopía electrónica de barrido tacos</td><td>TED PELLA</td><td>16111</td><td></td></tr><tr><td>PELCO Pestañas: Adhesivo de carbono</td><td>TED PELLA</td><td>16084-3</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Secador de puntos críticos</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio electrónico de barrido</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio de vidrio</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cubreobjetos de vidrio</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pañuelos Kimwipe &nbsp;</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>reactivos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de pincel</td><td></td><td></td><td></td>de pintura fina</tr><tr><td>1 y veces; Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído&nbsp; (PFA) (Grado EM requerido para EM)</td><td>Varios</td><td></td><td>Prepare una solución al 4% en 1 y veces; PBS hecho fresco cada vez. Grado EM requerido para EM.</td></tr><tr><td>2.5% Glutaraldehído Grado1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl (pH 7.5)</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl 2</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suero de cabra normal</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab Fragment Burro Anti-Ratón IgG (H + L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G Medios de montaje</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>10&times; Hanks' Solución salina equilibrada (HBSS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>14065</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Tetróxido de osmio (OsO4 )</td><td>Sigma-Aldrich/Fluka Analytical</td><td>75632</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tánico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>403040</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 200 a prueba</td><td>Varios</td><td></td><td></td></tr><tr><td>anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>anti Arl13b</td><td>Protein Tech</td><td>17711-1-AP</td><td>Concentración sugerida 1:1.000</td></tr><tr><td>anti tubulina acetilada (611-B1)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6793</td><td>Concentración sugerida 1:800</td></tr><tr><td>anti gamma tubulina (GTU-88)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6557</td><td>Concentración sugerida 1:200</td></tr><tr><td>anti Zo_1&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>40-2300</td><td>Concentración sugerida 1:500</td></tr><tr><td>Miosina VI</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25-6791</td><td>Concentración sugerida 1:1000</td></tr><tr><td>Miosina VIIa</td><td>Proteus Biosciences</td><td>25-6790</td><td>Concentración sugerida 1:1.000</td></tr><tr><td>anti Vangl2</td><td>Merk Millipore</td><td>ABN373</td><td>Concentración sugerida 1:250</td></tr><tr><td>anti G&alfa; i3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G4040</td><td>Concentración sugerida 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 488 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12379</td><td>Concentración sugerida 1:300 - 1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 568 Phalloidin</td><td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A12380</td><td>Concentración sugerida 1:300 - 1.000</td></tr></tbody></table>

evaluación de planar-cell-polaridad fenotipos en ciliopatía ratón mutante cóclea

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

En los últimos años, los cilios primarios han emergido como reguladores clave en el desarrollo y la enfermedad al influir en numerosas vías de señalización. Una de las primeras vías de señalización que se ha demostrado que está asociada con la función ciliar fue la vía de señalización Wnt no canónica, también conocida como señalización de polaridad de células planas (PCP). Uno de los mejores lugares para estudiar los efectos de la señalización de la polaridad de las células planas (PCP) durante el desarrollo de los vertebrados es la cóclea de los mamíferos. La interrupción de la señalización de PCP en la cóclea del ratón interrumpe el crecimiento coclear, el patrón celular y la orientación de las células ciliadas, todos los cuales se ven afectados por la disfunción de los cilios. El objetivo de este protocolo es describir el análisis de la señalización de PCP en la cóclea de mamíferos en desarrollo mediante análisis fenotípico, inmunohistoquímica y microscopía electrónica de barrido. Los defectos en la convergencia y la extensión se manifiestan como un acortamiento del conducto coclear y/o cambios en el patrón celular, que se pueden cuantificar después de la disección de mutantes de ratón en desarrollo. Los cambios en la orientación del haz estereociliar y la longitud o posición de los cinecilios se pueden observar y cuantificar mediante inmunofluorescencia o microscopía electrónica de barrido (SEM). Una comprensión más profunda del papel de las proteínas ciliares en las vías de señalización celular y otros fenómenos biológicos es crucial para nuestra comprensión de la biología celular y del desarrollo, así como para el desarrollo de estrategias de tratamiento dirigidas.

La disección y la cóclea Preparación del tejido Después de la eliminación del cerebro, puesto línea media disección sagital de una cabeza P0 ratón, el laberinto óseo, visto desde atrás, puede ser visualizado (Figura 1A, flecha blanca) y se retira. La Figura 1B muestra los laberintos óseas aisladas con el cabello coclear mirando hacia arriba, ventral, (izquierda) y por detrás, ...

Los cilios primarios influyen en varias vías de señalización. La cóclea de mamíferos es ideal para examinar la señalización de la polaridad de las células planas (PCP). La disfunción de los cilios afecta el crecimiento coclear, el patrón celular y la orientación de las células ciliadas, lecturas de PCP. Nuestro objetivo es analizar la señalización de PCP en la cóclea de ratón mediante análisis fenotípico, inmunohistoquímica y microscopía electrónica de barrido.

Evaluación de planar-Cell-polaridad fenotipos en ciliopatía ratón mutante cóclea

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

El objetivo general de este protocolo es examinar el oído interno de ratones mutantes ciliados en busca de fenotipos de polaridad celular planar. Estas técnicas permiten una descripción detallada del fenotipo coclear, lo que conducirá a una comprensión más precisa del papel de los cilios en el establecimiento de la señalización de polaridad celular planar en vertebrados. La principal ventaja de este protocolo es que, una vez dominado, los epitelios cocleares disecados pueden utilizarse para una variedad de análisis fenotípicos diferentes.Después de preparar los reactivos y el tejido de animales experimentales, en la etapa de desarrollo E16.5 hasta p3, utilice una hoja de bisturí o un par pequeño de tijeras para diseccionar la cabeza a lo largo de la línea media sagital comenzando desde la nariz y extendiéndose hasta el cótilo. Retire el cerebro de cada mitad del cráneo con un par de pinzas. Luego, identifique los huesos temporales que contienen los laberintos óseos en desarrollo del oído interno.Mientras trabaje con la muestra bajo un microscopio de disección, utilice un par de pinzas para separar los laberintos óseos del cráneo pasando suavemente las pinzas por debajo de los laberintos óseos. Tras la disección, use la punta de las pinzas de disección para limpiar las ventanas oval y redonda y hacer un pequeño orificio en el ápice de la espiral coclear. A continuación, fije los laberintos óseos en 1,5 mililitros de paraformaldehído al 4 % durante cinco minutos en hielo para facilitar la eliminación de la membrana tectorial.Ahora, coloque los laberintos óseos en una placa de disección recubierta con elastómero de silicona negra que contenga PBS para facilitar la disección. Utilice pinzas número cinco para eliminar el cartílago externo, exponiendo así el conducto coclear. Comience en la ventana oval, inserte la punta inferior de las pinzas en la ventana oval y levante suavemente el cartílago, moviéndose lentamente hacia arriba en dirección al ápice.A continuación, use un par de fórceps finos para pellizcar la membrana de Reissner en la base del conducto coclear y desprenderla con un movimiento hacia arriba. Visualice el aspecto dorsal del conducto coclear, incluyendo el epitelio sensorial. Luego, use fórceps número 55 para pellizcar la membrana tectorial en la base de la cóclea y desprenda hacia arriba en dirección al ápice.Es necesario eliminar completamente la membrana tectorial para obtener las mejores imágenes mediante inmunohistoquímica, y es esencial para la microscopía electrónica de barrido. Después de exponer el órgano de Corti, fije adicionalmente el tejido y realice la inmunohistoquímica, o prepárelo para microscopía electrónica de barrido, como se detalla en la parte escrita del protocolo. Una vez que el tejido haya sido teñido, coloque la muestra en un recipiente negro de elastómero de silicona que contenga PBS.Utilizando pinzas finas, retire la región vestibular de la espiral coclear. Luego, retire con mucho cuidado el cartílago y el mesénquima subyacentes de la espiral coclear. La espiral coclear restante contiene el surco interno, el órgano de Corti y el surco externo.Transfiera la espiral coclear a una gota de PBS colocada sobre un portaobjetos de microscopio. Retire el PBS con un tejido absorbente o un trozo de papel de filtro, y reposicione suavemente la espiral coclear si el epitelio se ha desplazado y se superpone sobre sí mismo. Añada una gota de medio de montaje directamente sobre la muestra de cóclea y coloque suavemente un cubreobjetos directamente sobre la muestra, teniendo cuidado de evitar burbujas de aire.Utilice un microscopio epifluorescente o confocal de barrido láser equipado con objetivos de alta magnificación y alta apertura numérica para capturar imágenes de la superficie apical de las células pilosas cocleares. Utilice objetivos de menor aumento para obtener imágenes superpuestas de la espiral coclear y cuantificar la longitud del conducto coclear. Las siguientes imágenes muestran tinción inmunofluorescente de la vuelta basal, de una cóclea tipo del día postnatal uno.La faloidina marca el actina filamentosa en las estereocilias y la actina cortical en la periferia celular. La miosina VIIA es un marcador para las células pilosas internas y externas. ZO_1 marca las uniones estrechas entre células, lo que la convierte en un excelente marcador para distinguir los límites celulares.La alfa-tubulina acetilada se utiliza como marcador para el cinocilio en el vértice del haz, como indica la flecha blanca. Los microtúbulos internos también están marcados por la alfa-tubulina acetilada, que es particularmente abundante en las células pilares, como indican los asteriscos blancos. Esta imagen de conductos cocleares disecados en E18.5, teñidos con tubulina acetilada, demuestra un acortamiento notable de los conductos cocleares con knockout condicional de IFT20 en comparación con el control.La siguiente imagen es una preparación de montaje completo de la vuelta basal de la cóclea, en ratones con nulificación de BBS8, en el día cero posnatal. Los haces estereociliares en las cócleas de ratones con nulificación de BBS8 presentan rotación variable, como indica la flecha derecha, o están aplanados y mal localizados, como indica la flecha central. Las cinocilias están mal localizadas o faltan axonemas, como indica la flecha izquierda.Al preparar el fenotipo coclear para el análisis, es importante recordar que las diferencias en el fondo genético pueden modificar el fenotipo coclear. Por lo tanto, es fundamental utilizar controles de camada para el análisis. Otros análisis incluyen pruebas audiométricas y el cultivo de explantes cocleares, lo que permite el tratamiento con diversos activadores o inhibidores de señales, contribuyendo así al entendimiento mecanicista de los procesos de desarrollo implicados.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar el tejido coclear para analizar el papel de los componentes ciliares y sus efectos distintos sobre la señalización del PCP.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Un procedimiento simple de vibratome seccionar el órgano de Corti, seguido por microscopía confocal de inmunohistoquímica y se describe. Este procedimiento permite una mejor conservación de la citoarquitectura fino del órgano de Corti de mamíferos, y por lo tanto permite la cuantificación exacta de los tipos de células.

Vibratome seccionamiento para la Preservación de Mejora de la citoarquitectura del órgano de Corti mamíferos

La citometría de flujo es una herramienta poderosa que permite el aislamiento y estudio de poblaciones celulares específicas. Este protocolo describe los pasos para aislar células que expresan LacZ a partir de tejidos cocleares de ratones transgénicos neonatos. Las células cocleares disociadas se marcaron utilizando sustratos conjugados con fluoróforos de β-galactosidasa antes de la separación mediante citometría de flujo.

Aislar las células que expresan LacZ de tejidos de ratón del oído interno mediante citometría de flujo

Imágenes en vivo de la cóclea de mamíferos embrionario es un reto porque los procesos de desarrollo en la mano operan en un gradiente temporal de más de diez días. Aquí presentamos un método para cultivar y luego la formación de imágenes de embriones tejido explante coclear tomado de un ratón reportero fluorescente en cinco días.

A largo plazo Lapso de tiempo de imágenes de Ratón cocleares explantes

Presentamos un método que describe el aislamiento y cultivo de explantes cocleares del oído interno de ratones embrionarios.  También demostramos un método para la transferencia de genes a explantes cocleares a través de electroporación de onda cuadrada. El cultivo in vitro de explantes, junto con la técnica de transferencia de genes, permite a los investigadores estudiar los efectos de la alteración de la expresión génica durante el desarrollo.

Cultura de embriones de ratón explantes cocleares y Gene Transfer por electroporación

Se presenta un método para aislar el órgano de Corti adultos como tres vueltas intactas cocleares (ápice, medio y de base). También demostramos un procedimiento de inmunotinción con anticuerpos marcados con fluorescencia. En conjunto, estas técnicas permiten el estudio de las células ciliadas, células de soporte, y otros tipos de células que se encuentra en la cóclea.

Todo el montaje La disección y de inmunofluorescencia del Adulto ratón cóclea

Presentamos un protocolo para aislar la bulla auditiva, la cápsula y los huesecillos de ratones postnatales para análisis histológico y de montaje completo.

La disección de la Auditivo Bulla en ratones postnatales: Aislamiento de los huesos del oído medio y el análisis histológico

Culturas organotypic tridimensional del utrículo murino y cóclea en ópticamente claro colágeno geles preservar tejido natural morfología, permiten estimulación mecánica mediante ajuste de la rigidez de la matriz y permitan de genes mediada por virus.

Culturas Organotypic tridimensionales de órganos sensoriales vestibulares y auditivas

Este manuscrito describe un protocolo experimental para evaluar las características morfológicas y el estado funcional de las sinapsis de cinta en ratones normales. El modelo actual también es adecuado para modelos de sinaptopatía coclear inducidas por ruido y relacionados con la edad. También se discuten los resultados correlativos de estudios anteriores del ratón.

Evaluación morfológica y funcional de sinapsis de cinta en regiones de frecuencia específica de la Cóclea de Ratones

Este artículo presenta un método de preparación de superficie coclear modificado que requiere descalcificación y uso de un adhesivo celular y tisular para adherir las piezas de epitelía coclear a 10 mm de resbalones de cubierta redonda para inmunohistoquímica en cocleares de ratón adultos.

Preparación de la superficie coclear en el ratón adulto

Este estudio describe cómo diseccionar el saco endolinfático del oído interno del ratón a diferentes edades. El resultado de una disección similar se muestra en un modelo de ratón Slc26a4-null de agrandamiento del saco endolinfático. Un ratón transgénico con un indicador fluorescente expresado en el saco endolinfático se presenta como modelo para visualizar fácilmente el saco endolinfático, y herramienta educativa.

Disección del saco endolinfático de ratones

El protocolo actual actualiza los protocolos anteriores e incorpora enfoques relativamente sencillos para el cultivo de explantes cocleares de alta calidad. Esto proporciona una adquisición de datos fiable e imágenes de alta resolución en células vivas y fijas. Este protocolo apoya la tendencia actual de estudiar las células del oído interno.

Explantes cocleares neonatales enteros como modelo in vitro

Aprenda a examinar la cóclea de ratón mutante ciliar para fenotipos de polaridad celular planar usando microscopía electrónica de barrido e inmunohistoquímica. Este protocolo permite analizar el desarrollo del oído interno.

Evaluación de planar-Cell-polaridad fenotipos en ciliopatía ratón mutante cóclea

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