Cuantitativa del fondo de ojo autofluorescencia para la Evaluación de Enfermedades de la Retina

El objetivo general de la autofluorescencia cuantitativa, o qAF, es evaluar el nivel general de lipofuscina en las células de soporte de la retina, el epitelio pigmentario de la retina, o EPR, tanto en ojos sanos como enfermos. Esta técnica puede ayudar a responder preguntas clave en la biología de las células de la retina, como la forma en que la salud del epitelio pigmentario de la retina interactúa con el desarrollo de la degeneración macular relacionada con la edad, o DMAE. La principal ventaja de esta técnica es que permite determinar los niveles absolutos de autofluorescencia de lipofuscina en el fondo de ojo y, por tanto, realizar un seguimiento cuantitativo y reproductivo entre pacientes, entre sesiones de imagen de pacientes y en grandes poblaciones de estudio.

Antes de la obtención de imágenes, configure adecuadamente la oftancoscopia láser de escaneo confocal, o CSLO, para la adquisición de datos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para montar una referencia fluorescente interna, que se compra al fabricante, gire la lente para quitarla, desenrosque el anillo metálico de la máquina y reemplácelo con el nuevo anillo metálico que contiene la referencia. Es esencial que las pupilas estén dilatadas al menos 6 mm para el paso ininterrumpido de la luz.

Con 0,5% de tropicamida y 2,5% de fenilefrina, dilatan las pupilas del paciente al menos 6 mm, lo que es esencial para el paso ininterrumpido de la luz para ver y medir el fondo de ojo. Coloque correctamente al paciente en el CSLO con la barbilla apoyada en la barbilla, la frente apoyada en el reposacabezas y el canto lateral correctamente alineado con los indicadores. Para adquirir imágenes de referencia, primero tome imágenes del fondo de ojo con reflectancia infrarroja cercana, o luz infrarroja, para centralizar la cámara sobre la mácula y obtener un enfoque aproximado.

Con el paciente correctamente colocado, cambie la configuración de hardware en el panel de control al modo de imagen IR, coloque manualmente la cámara hasta que el fondo de ojo esté completamente enfocado y tome una imagen. Ajuste la configuración en el panel de control a IROCT, que utiliza tomografía de coherencia óptica de dominio espectral, o SDOCT, junto con imágenes IR, para evaluar la mácula en busca de enfermedades subyacentes. Utilice las guías presentes en la ventana de imágenes para orientar correctamente la OCT a la imagen IR del fondo de ojo.

Para lograr una calidad SDOCT óptima, coloque la cámara de modo que la imagen OCT esté en el tercio superior de su ventana de imagen. Adquiera al menos un escaneo de línea horizontal a través de la fóvea y que abarque todo el campo de imagen. Para configurar las imágenes de qAF, utilice la adquisición de imágenes de alta velocidad, que disminuye el riesgo de pérdida de señal debido al movimiento del paciente y el bloqueo de la luz por el iris o los párpados.

Utilice Media de 9 fotogramas, que captura rápida y secuencialmente nueve fotogramas de imagen que luego se promedian para reducir el ruido y los artefactos. Elija un campo de 30 x 30 grados, que se refiere a los grados de área de la retina capturados durante la adquisición de la imagen. Después de advertir al paciente sobre la luz azul, active el modo AF y alinee el eje de la cámara para que la pantalla se llene al máximo con AF de fondo de ojo, con un oscurecimiento mínimo de los lados y esquinas de la imagen.

Si los pacientes tienen dificultades para tolerar la luz azul brillante, aleje la cámara del ojo para comenzar a tomar imágenes y acerque lentamente la cámara al paciente hasta que el fondo del ojo esté a la vista. Ya sea manualmente o con el joystick del oftamoscopio, ajuste la alineación de la cámara moviendo el CSLO para reposicionar la cámara de modo que la señal AF esté en su nivel más alto en todo el campo, en lugar de lograr la imagen más nítida. Durante la adquisición de la imagen, los píxeles coloreados visibles en la referencia interna o en el fondo de ojo indican sobresaturación y, por lo tanto, pérdida de señal.

Exponga completamente la retina a la luz AF durante al menos 20 segundos para minimizar la absorción de luz por la rodopsina en la retina sensorial durante la toma de imágenes. Utilice este período para optimizar la alineación, el enfoque y la sensibilidad de la cámara. Haga que los sujetos parpadeen antes de cada adquisición de imagen, ya que una película de lágrimas fresca mejora la calidad de la señal.

Evite los párpados en el plano de adquisición y tome la imagen. Es importante generar al menos dos imágenes de alta calidad por sesión de imágenes para tener en cuenta el análisis de datos. Realice el procesamiento posterior a la imagen mediante el software CSLO para calcular la media de la pila de nueve fotogramas, para aumentar la relación señal/ruido.

Realizar análisis de imágenes según el protocolo de texto. Como se muestra aquí, en ojos sanos, la FA emitida por el EPR se distribuye de manera relativamente uniforme por todo el fondo de ojo. Se observa una intensidad reducida en la región macular central debido al bloqueo de la luz por el pigmento macular, y en los lados y esquinas debido a la óptica del ojo y la cámara.

Los vasos deben estar oscuros y bien enfocados. Esta figura representa una presentación del mapa de calor correspondiente de los niveles de qAF de esta figura. Los colores más fríos corresponden a áreas de menor intensidad de AF, mientras que los colores más cálidos corresponden a áreas de mayor intensidad de AF.

La intensidad máxima se observa generalmente en el segundo anillo concéntrico de ocho segmentos, y las intensidades medias en esta área se utilizan para la mayoría de los análisis de datos. Aquí se muestra un análisis representativo del ojo con DMAE, que demuestra la atrofia geográfica, una forma avanzada de DMAE. Esta forma de DMAE da lugar a áreas localizadas de pérdida de EPR, evidenciadas por una FA marcadamente reducida o ausente, y causa una pérdida progresiva de la visión central.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar seleccionar cuidadosamente a los pacientes candidatos y obtener imágenes de alta calidad reproducibles para maximizar la calidad de los datos. El uso de este procedimiento puede permitir el seguimiento longitudinal de la salud de la retina para determinar el progreso de las degeneraciones de la retina. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la oftalmología siguieran y analizaran las degeneraciones de la retina.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo usar la autofluorescencia cuantitativa para evaluar a sus pacientes con degeneraciones de retina. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.