Cuantitativa del fondo de ojo autofluorescencia para la Evaluación de Enfermedades de la Retina

El objetivo general de la autofluorescencia cuantitativa, o qAF, es evaluar el nivel total de lipofuscina en las células de soporte de la retina, el epitelio pigmentario de la retina, o RPE, en ojos sanos y enfermos. Esta técnica puede ayudar a responder preguntas clave en la biología celular de la retina, como cómo la salud del epitelio pigmentario de la retina interactúa con el desarrollo de la degeneración macular relacionada con la edad, o AMD. La principal ventaja de esta técnica es que permite la determinación de niveles absolutos de autofluorescencia de lipofuscina en el fondo ocular, y por lo tanto un seguimiento cuantitativo y reproducible entre pacientes, entre sesiones de imagenología de pacientes, y en grandes poblaciones de estudio.

Antes de la adquisición de imágenes, configure adecuadamente la oftalmoscopia láser de barrido confocal, o CSLO, para la adquisición de datos según las instrucciones del fabricante. Para instalar una referencia fluorescente interna, que se adquiere del fabricante, gire el lente para retirarlo, desenrosque el anillo metálico de la máquina y reemplácelo con el nuevo anillo metálico que contiene la referencia. Es esencial que las pupilas estén dilatadas al menos 6 mm para permitir el paso ininterrumpido de la luz.

Con tropicamida al 0,5 % y fenilefrina al 2,5 %, dilate las pupilas del paciente al menos 6 mm, lo cual es esencial para permitir el paso ininterrumpido de la luz con el fin de observar y medir el fondo del ojo. Coloque adecuadamente al paciente en el CSLO con la barbilla apoyada en el reposabarbillas, la frente contra el soporte frontal y los ángulos externos de los ojos alineados correctamente con los indicadores. Para obtener imágenes basales, primero capture el fondo del ojo mediante reflectancia en infrarrojo cercano, o luz IR, con el fin de centrar la cámara sobre la mácula y obtener un enfoque aproximado.

Con el paciente correctamente posicionado, cambie la configuración del hardware en el panel de control al modo de imagenología IR, posicione manualmente la cámara hasta que el fondo del ojo esté completamente enfocado y tome una imagen. Ajuste la configuración en el panel de control a IROCT, que utiliza tomografía de coherencia óptica de dominio espectral, o SDOCT, junto con la imagenología IR, para evaluar la mácula en busca de enfermedades subyacentes. Utilice las guías presentes en la ventana de imagenología para orientar correctamente la OCT respecto a la imagen IR del fondo del ojo.

Para lograr una calidad óptima de SDOCT, coloque la cámara de manera que la imagen OCT se encuentre en el tercio superior de su ventana de imagen. Adquiera al menos un corte transversal horizontal a través de la fóvea, abarcando todo el campo de imagen. Para configurar la imagen qAF, utilice la adquisición de imágenes de alta velocidad, lo cual disminuye el riesgo de pérdida de señal debido al movimiento del paciente y al bloqueo de la luz por el iris o los párpados.

Utilice el promedio de 9 cuadros, que captura rápida y secuencialmente nueve cuadros de imagen que luego se promedian para reducir el ruido y los artefactos. Seleccione un campo de 30 x 30 grados, lo que se refiere a los grados del área retiniana capturada durante la adquisición de la imagen. Después de advertir al paciente sobre la luz azul, active el modo de autofluorescencia (AF) y alinee el eje de la cámara de manera que la pantalla se llene al máximo con la autofluorescencia del fondo de ojo, con oscurecimiento mínimo de los lados y las esquinas de la imagen.

Si los pacientes tienen dificultad para tolerar la luz azul intensa, aleje la cámara del ojo para comenzar la adquisición de imágenes y acérquela lentamente al paciente hasta que el fondo del ojo esté completamente visible. Ya sea manualmente o con el joystick del oftalmoscopio, ajuste la alineación de la cámara moviendo el CSLO para reposicionarla de manera que la señal de AF alcance su nivel más alto en todo el campo, en lugar de obtener la imagen más nítida. Durante la adquisición de imágenes, la presencia de píxeles de color en la referencia interna o en el fondo del ojo indica saturación excesiva y, por tanto, pérdida de señal.

Exponga completamente la retina a la luz AF durante al menos 20 segundos para minimizar la absorción de luz por la rodopsina en la retina sensorial durante la adquisición de imágenes. Utilice este período para optimizar el alineamiento, enfoque y sensibilidad de la cámara. Pida a los sujetos que parpadeen antes de cada adquisición de imagen, ya que una película lagrimal fresca mejora la calidad de la señal.

Evite los párpados en el plano de adquisición y tome la imagen. Es importante generar al menos dos imágenes de alta calidad por sesión de adquisición para el análisis de datos. Realice el procesamiento posterior a la imagen utilizando el software CSLO para calcular la media de la pila de nueve cuadros, con el fin de aumentar la relación señal-ruido.

Realice el análisis de la imagen según el protocolo descrito. Como se muestra aquí, en ojos sanos, la autofluorescencia emitida por el epitelio pigmentario de la retina se distribuye de manera relativamente uniforme en todo el fondo del ojo. Se observa una intensidad reducida en la región macular central debido a la absorción de luz por el pigmento macular, y en los lados y esquinas debido a la óptica del ojo y de la cámara.

Los vasos deben ser oscuros y estar claramente enfocados. Esta figura representa una presentación correspondiente en mapa de calor de los niveles de qAF de esta figura. Los colores más fríos corresponden a áreas de menor intensidad de AF, mientras que los colores más cálidos corresponden a áreas de mayor intensidad de AF.

La intensidad máxima generalmente se observa en el segundo anillo concéntrico de ocho segmentos, y las intensidades medias en esta área se utilizan para la mayoría del análisis de datos. Aquí se muestra un análisis representativo del ojo con DMAE, que demuestra atrofia geográfica, una forma avanzada de DMAE. Esta forma de DMAE provoca áreas localizadas de pérdida del epitelio pigmentario retiniano (EPR), evidenciada por una autofluorescencia marcadamente reducida o ausente, y causa una pérdida progresiva de la visión central.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar seleccionar cuidadosamente a los pacientes candidatos y obtener imágenes de alta calidad de forma reproducible para maximizar la calidad de los datos. El uso de este procedimiento permite el seguimiento longitudinal de la salud retiniana para determinar la progresión de las degeneraciones retinianas. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la oftalmología siguieran y analizaran las degeneraciones retinianas.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo utilizar la autofluorescencia cuantitativa para evaluar a sus pacientes con degeneraciones retinianas. Gracias por verlo y mucha suerte con sus experimentos.