Name: Monitoreo en tiempo real de intracelular del ácido biliar Dinámica El uso de un sensor de ácido biliar basada FRET-codificados genéticamente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-04T15:00:01.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Aprende a visualizar el transporte de ácidos biliares en células vivas mediante un sensor FRET codificado genéticamente. Esta técnica permite monitorear dinámicas metabólicas con alta resolución espacial y temporal sin necesidad de marcaje.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue financiado por las subvenciones iniciales del ERC (ERC-2011-StG 280255 y ERC-2013-StG 337479) y por la Organización Holandesa para la Investigación y el Desarrollo en Salud (Vidi 91713319).

<ol><li>Aoki, K., Kamioka, Y., Matsuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+resonance+energy+transfer+imaging+of+cell+signaling+from+in+vitro+to+in+vivo%3A+basis+of+biosensor+construction%2C+live+imaging%2C+and+image+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Fluorescence resonance energy transfer imaging of cell signaling from in vitro to in vivo: basis of biosensor construction, live imaging, and image processing.</a> Dev. Growth Differ. 55 (4), 515-522 (2013).</li>
<li>Jares-Erijman, E. A., Jovin, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FRET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">FRET imaging.</a> Nature Biotechnol. 21 (11), 1387-1395 (2003).</li>
<li>Mank, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FRET-based+calcium+biosensor+with+fast+signal+kinetics+and+high+fluorescence+change%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">A FRET-based calcium biosensor with fast signal kinetics and high fluorescence change.</a> Biophys. J. 90 (5), 1790-1796 (2006).</li>
<li>Li, I. T., Pham, E., Truong, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+biosensors+based+on+the+principle+of+fluorescence+resonance+energy+transfer+for+monitoring+cellular+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biotechnol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Protein biosensors based on the principle of fluorescence resonance energy transfer for monitoring cellular dynamics.</a> J. Biotechnol. Lett. 28 (24), 1971-1982 (2006).</li>
<li>Stephens, D. J., Allan, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+microscopy+techniques+for+live+cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Light microscopy techniques for live cell imaging.</a> Science. 300 (5616), 82-86 (2003).</li>
<li>Merkx, M., Golynskiy, M. V., Lindenburg, L. H., Vinkenborg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+FRET+sensor+proteins+based+on+mutually+exclusive+domain+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Soc.+Trans%22%5BJournal%5D)">Rational design of FRET sensor proteins based on mutually exclusive domain interactions.</a> Biochem. Soc. Trans. 41 (5), 1201-1205 (2013).</li>
<li>Lindenburg, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Stickiness%3A+Thermodynamic+Characterization+of+Intramolecular+Domain+Interactions+To+Guide+the+Design+of+Fo%CC%88rster+Resonance+Energy+Transfer+Sensors%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem%22%5BJournal%5D)">Quantifying Stickiness: Thermodynamic Characterization of Intramolecular Domain Interactions To Guide the Design of Förster Resonance Energy Transfer Sensors.</a> Biochem. 53 (40), 6370-6381 (2014).</li>
<li>van der Velden, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+bile+acid+transport+in+single+living+cells+using+a+genetically+encoded+F%C3%B6rster+resonance+energy+transfer+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Monitoring bile acid transport in single living cells using a genetically encoded Förster resonance energy transfer sensor.</a> J. Hepatol. 57 (2), 740-752 (2013).</li>
<li>Dawson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heteromeric+organic+solute+transporter+%CE%B1-%CE%B2%2C+Ost%CE%B1-Ost%CE%B2%2C+is+an+ileal+basolateral+bile+acid+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The heteromeric organic solute transporter α-β, Ostα-Ostβ, is an ileal basolateral bile acid transporter.</a> J. Biol. Chem. 280 (8), 6960-6968 (2005).</li>
<li>Meier, P. J., Stieger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+salt+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Bile salt transporters.</a> Annu. Rev. Physiol. 64 (1), 635-661 (2002).</li>
<li>Klarenbeek, J. B., Goedhart, J., Hink, M. A., Gadella, T. W., Jalink, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mTurquoise-based+cAMP+sensor+for+both+FLIM+and+ratiometric+read-out+has+improved+dynamic+range%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A mTurquoise-based cAMP sensor for both FLIM and ratiometric read-out has improved dynamic range.</a> PLoS One. 6 (4), e19170(2011).</li>
<li>Wallrabe, H., Periasamy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+protein+molecules+using+FRET+and+FLIM+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Imaging protein molecules using FRET and FLIM microscopy.</a> Curr. Opin Biotechnol. 16 (1), 19-27 (2005).</li>
<li>Plass, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Farnesoid+X+receptor+and+bile+salts+are+involved+in+transcriptional+regulation+of+the+gene+encoding+the+human+bile+salt+export+pump%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Farnesoid X receptor and bile salts are involved in transcriptional regulation of the gene encoding the human bile salt export pump.</a> J. Hepatol. 35 (3), 589-596 (2002).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aquí se presenta un protocolo detallado para el uso de un nuevo codificado genéticamente sensor de ácido biliar capaz de monitorizar la dinámica espacio-temporales de transporte de ácidos biliares en las células vivas. Este biosensor consta de proteínas fluorescentes azul cerúleo y citrino que se fusionan a FXR LBD-, formando de este modo un sensor de ácido biliar basado en FRET (BAS). El sensor de Bile Acid es relativamente simple y conveniente en uso al tener experiencia básica con cultivo...

Förster Resonance Energy Transfer (FRET) es ampliamente utilizado para obtener una mejor comprensión de las funciones celulares en las células vivas con una alta resolución temporal y espacial 1. En FRET, la energía de un fluoróforo donante excitado se transfiere a un fluoróforo aceptor. Eficiencia de FRET es fuertemente dependiente de la distancia entre el donante y el fluoróforo aceptor y su orientación y por lo tanto es una lectura sensible de los cambios conformacionales que afectan a los dos fluoróforos. Este fenómeno se explota para generar biosensores basados ​​en FRET para la obtención de imágenes de moléculas pequeñas. Los cambios en su concentración pueden ser monitoreados a medida que aumenta / disminuye en la proporción de intensidad de emisión del aceptor con respecto al fluoróforo donante 2. Por ejemplo, biosensores calcio basados ​​en FRET permiten la detección rápida y estable de las concentraciones de calcio libres en las células 3 viviente. Otras ventajas de biosensores basados ​​en FRET se Imaging en células vivas individuales, theredera no invasividad, de su capacidad para dirigirse a diferentes tipos de células y 4 compartimentos celulares. Muchos aspectos de la dinámica de ácidos biliares intracelular son aún poco conocidos. Por ejemplo, se sabe poco sobre el mecanismo de regulación subyacente de transporte de ácidos biliares conjugada y no conjugada. Técnicas existentes para supervisar este transporte hacen principalmente el uso de reporteros basados ​​en luciferasa, ácidos biliares radiomarcados, o análogos de ácidos biliares fluorescentes. Esto último requiere la modificación de los ácidos biliares, posiblemente afecte a sus propiedades. Periodistas basados ​​en luciferasa tienen mala resolución de tiempo. Además, estas técnicas resultan en la pérdida de la muestra y no son aplicables para formación de imágenes en las células individuales. Por lo tanto, sería beneficioso utilizar métodos que permiten imágenes de células única en vivo de la actividad de transporte utilizando biosensores FRET, especialmente ya que incluye la ventaja de la detección radiométrica 5, 6. Mientras que las variantes de CFForma P / YFP usa más frecuentemente pares FRET, nuevas estrategias que utilizan Morange y mCherry que portan mutaciones auto-asociación inductores han dado lugar a una expansión de la caja de herramientas FRET con nuevos sensores, incluyendo un sensor de ácido biliar desplazada al rojo 7. Hemos creado previamente una FRET bilis sensor ácido genéticamente codificado (BAS), que consiste en un fluoróforo donante (cerúleo) y un fluoróforo aceptor (citrino) que se fusiona con el dominio de unión a ligando de receptor X farnesoide (FXR) (FXR-LBD) y un péptido que contiene un motivo LXXLL 8. Este péptido se asocia con el FXR LBD-ácido de una manera dependiente de la bilis. Tras la activación de FXR, la distancia entre citrino y cerúleo alterará debido a un cambio conformacional. En líneas celulares de mamíferos, FXR activación resulta en un aumento claramente detectable en la proporción de citrino / cerúleo, mientras que el sensor purificada trabaja en la dirección opuesta y conduce a una relación de FRET disminuido tras la activación de FXR. Este sensor (CytoBAS)permite el monitoreo de la dinámica de ácidos biliares citosólicas. Mediante la adición carboxilo-terminal de motivos dirigidos subcelulares, el constructo de BAS puede ser dirigido al núcleo (NucleoBAS) y peroxisomas (PeroxiBAS), lo que permite mediciones de las concentraciones de ácidos biliares en diferentes compartimentos celulares. Aunque la adición del motivo focalización peroxisomal no perjudica su capacidad de respuesta a los ácidos biliares, de células permeables FXR ligandos no indujo cambios en cualquier traste PeroxiBAS dentro de los peroxisomas 8. Como la naturaleza de esta discrepancia no se conoce, el protocolo a continuación se centra en CytoBAS y NucleoBAS. El uso de este sensor FRET codificados genéticamente se demostró recientemente en las células que contienen los transportadores de ácidos biliares hepáticos Na + polipéptido / taurocolato de co-transporte (PNCT) y orgánica alfa transportador de soluto / beta (OSTαβ) 8. PNCT es el importador de ácido biliar hepática principal e OSTαβ es una bilis intestinal basolateraltransportador de ácido que puede funcionar tanto como un importador y exportador depende del gradiente de concentración de ácidos biliares electroquímica 9, 10. Los datos recientes muestran que al transporte de ácidos biliares por PNCT y / o OSTαβ, las respuestas sólidas y rápidas en relación de FRET como un resultado de la interacción ligando-FXR-LBD se pueden observar. A continuación, describimos protocolos detallados para los métodos para medir la FRET como el análisis microscópico y confocal de células activadas por fluorescencia (FACS), destacamos pasos críticos, abordamos los problemas potenciales y discutir métodos alternativos. El uso de este sensor FRET codificado genéticamente, la interacción de ácidos biliares con FXR-LBD se puede cuantificar y monitoreada directamente en las células vivas y proporciona un método rápido y simple de visualizar transporte de ácidos biliares y la dinámica en tiempo real. Plásmidos de expresión de mamíferos que codifican CytoBAS NucleoBAS y están disponibles comercialmente. Por lo tanto, este biosensor puede contribuir aún más a lala comprensión de los transportadores de ácidos biliares o compuestos que activan el FXR y proporcionan una visión más profunda de la biología de los ácidos biliares y la señalización.

<table><tbody><tr><td>CytoBAS&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>62860</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBAS&nbsp;</td><td>Addgene</td><td>62861</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's modified Eagles media (DMEM)</td><td>Lonza</td><td>BE12-614F</td><td>Glucosa alta sin L-glutamina</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (pluma/estreptococo)</td><td>Lonza</td><td>17-602E</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina (200mM)</td><td>Lonza</td><td>17-605E</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Invitrogen</td><td>102-70</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (10x)</td><td>Matraz</td> de cultivo celular Lonza <td>CC-5012</td><td></td></tr><tr><td>T-25</td><td>VWR international</td><td>392-0253</td><td>Matraz</td>de</tr><tr><td>cultivo celular T-175</td> recubierto de laminina <td>VWR international</td><td>392-0238</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos</td> recubierta de laminina <td>VWR international</td><td>734-0229</td> Plato de 10 cm <td>recubierto de poli-L-lisina y laminina</td></tr><tr><td></td><td>VWR international</td><td>392-0243</td><td>Recubierto de laminina</td></tr><tr><td>Dietilaminoetilo (DEAE) - Dextrano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9885</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenimina (PEI)&nbsp;</td><td>Brunschwig</td><td>23966-2</td><td></td></tr><tr><td>G418 (genética) 50 mg/ml</td><td>Invitrogen</td><td>10131-027</td><td></td></tr><tr><td>Higromicina B, 50 mg/ml</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>Cilindro de clonación (6 x 8 mm)</td><td>Bellco</td><td>2090-00608</td><td></td></tr><tr><td>L-15 Leibovitz medio de cultivo</td><td>Invitrogen</td><td>21083-027</td><td>Rojo sin fenol</td></tr><tr><td>Tubo de poliestireno de fondo redondo (5 ml) Tubo Facs</td><td>Falcon BD</td><td>352008</td><td>Sin tapón, no estéril</td></tr><tr><td>Falcon 2.063 tubos (5 ml)</td><td>Falcon BD</td><td>352063</td><td>Tapón a presión, estéril</td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek Cubreobjetos de 8 pocillos Thermo</td><td>scientific</td><td>155409</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Filtrado con carbón vegetal FBS</td><td>Life technologies</td><td>12676011</td><td></td></tr><tr><td>GW4064</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5172</td><td></td></tr><tr><td>TCDCA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6260</td><td></td></tr><tr><td>CDCA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9377</td><td></td></tr><tr><td>Otros productos químicos</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>n.v.t.</td><td></td></tr></tbody></table>

monitoreo en tiempo real de intracelular del ácido biliar dinámica el uso de un sensor de ácido biliar basada fret-codificados genéticamente

Real Time Monitoring of Intracellular Bile Acid Dynamics Using a Genetically Encoded FRET-based Bile Acid Sensor

La transferencia de energía de resonancia de Förster (FRET) se ha convertido en una poderosa herramienta para monitorear el plegamiento, la interacción y la localización de proteínas en células individuales. Los biosensores basados en el principio de FRET han permitido la visualización en tiempo real de eventos de señalización subcelular en células vivas con alta resolución temporal y espacial. Aquí, describimos la aplicación de un sensor de ácidos biliares (BAS) codificado genéticamente que consta de dos fluoróforos fusionados con el dominio de unión del ligando del receptor X FARNESOIDE (FFR-LBD), formando así un sensor de ácidos biliares que puede ser activado por un gran número de especies de ácidos biliares y otros ligandos FXR (sintéticos). Este sensor se puede dirigir a diferentes compartimentos celulares, incluido el núcleo (NucleoBAS) y el citosol (CytoBAS) para medir las concentraciones de ácidos biliares localmente. Permite cuantificar de forma rápida y sencilla la entrada de ácidos biliares celulares, el flujo y la distribución subcelular de ácidos biliares endógenos sin necesidad de marcaje con marcadores fluorescentes o radionúcleos. Además, los sensores BAS FRET pueden ser útiles para monitorizar la unión de ligandos FXR. Finalmente, demostramos que este biosensor FRET se puede combinar con imágenes de otros fluoróforos espectralmente distintos. Esto permite el análisis combinado de la dinámica de los ácidos biliares intracelulares y i) la localización y/o abundancia de proteínas de interés, o ii) la señalización intracelular en una sola célula.

El sensor FRET-BAS presentado se basa en el dominio de FXR (LBD-FXR) de unión al ligando unido a dos fluoróforos citrino y cerúleo) y un motivo LXXLL. Este sensor permite investigaciones de transporte de ácidos biliares en las células con alta resolución espacial y temporal (Figura 1 A) viviente. Las mutaciones en cerúleo y citrino se aplicaron a promover la formación del complejo intramolecular (Figura 1</strong...

Proporcionamos un protocolo detallado para estudiar la dinámica de los ácidos biliares en células vivas utilizando un sensor BAS FRET codificado genéticamente. Este sensor de ácidos biliares representa una herramienta única para estudiar (regular el) transporte de ácidos biliares y la activación de FXR en una amplia gama de tipos de células.

Monitoreo en tiempo real de intracelular del ácido biliar Dinámica El uso de un sensor de ácido biliar basada FRET-codificados genéticamente

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) has become a powerful tool for monitoring protein folding, interaction and localization in single cells. ...

El objetivo general de este procedimiento es utilizar un sensor de ácidos biliares FRET codificado genéticamente para visualizar fácilmente el transporte y la dinámica de los ácidos biliares con una alta resolución espacial y temporal. Este sensor puede responder a preguntas metabólicas clave, como la relación de la bilis y la dinámica con la glucosa, los lípidos y el metabolismo energético. La principal ventaja de esta técnica es que el transporte de ácidos biliares ahora se puede monitorear directamente a células vivas individuales sin la necesidad de etiquetar los ácidos biliares.Este método puede proporcionar información sobre el transporte y la dinámica de las células y los ácidos biliares. También se puede utilizar para visualizar los efectos o la activación de células vivas individuales, o para combinar imágenes de la localización de proteínas y el transporte de ácidos biliares. El sensor de ácidos biliares codificado genéticamente, en adelante, el sensor, consta de un fluoróforo cerúleo donante y un fluoróforo de citrino exceptuado.Los dos fluoróforos están unidos por el dominio de unión al ligando del receptor nuclear de ácidos biliares FXR, fusionado con un cofactor FXR,

real-time-monitoring-intracellular-bile-acid-dynamics-using

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Este protocolo describe un método para la medición en tiempo real de los flujos de calcio mitocondrial de imagen fluorescente. El método se aprovecha de una circular permutaciones YFP basada en sensor de calcio de doble excitación radiométrica (radiométrica pericam-mt) expresa selectivamente en las mitocondrias.

Seguimiento de los cambios dinámicos en niveles de calcio mitocondrial de la apoptosis mediante un sensor de calcio genéticamente codificados

Förster transferencia de energía de resonancia (FRET) microscopía es una poderosa técnica para monitoreo en tiempo real de eventos de señalización en las células vivas utilizando biosensores diversos como los periodistas. Aquí describimos cómo construir un epifluorescencia personalizado FRET sistema de imágenes a partir de componentes disponibles en el mercado y cómo usarlo para FRET experimentos.

FRET Microscopía de Monitoreo en tiempo real de eventos de señalización en las células vivas Uso de biosensores unimoleculares

Se presenta una descripción de cómo calibrar Transferencia Förster Resonance Energy sensores biológicos integrados (FIBS) en el perfil metabólico situ. Los FIBS se pueden utilizar para medir los niveles intracelulares de metabolitos de forma no invasiva ayudando en el desarrollo de modelos metabólicos y cribado de alto rendimiento de las condiciones de bioprocesos.

FIBS habilitadas no invasiva perfiles metabólicos

Este artículo le mostrará cómo controlar la dinámica de glutamina en las células vivas mediante FRET. Sensores codificados genéticamente permiten la monitorización en tiempo real de las moléculas biológicas con una resolución subcelular. Diseño experimental, detalles técnicos de los parámetros experimentales, y las consideraciones para los análisis post-experimentales serán discutidos para los sensores de glutamina codificados genéticamente.

Glutamina Flux Imaging utilizando sensores codificados genéticamente

Herramientas para el diagnóstico de la malabsorción de ácidos biliares y miden transporte de ácidos biliares in vivo están limitados. Un enfoque innovador de animales vivos se describe que utiliza protones combinado (1 H), además de flúor (19F) de formación de imágenes por resonancia magnética; esta novedosa metodología tiene el potencial de traslación para la detección de problemas de absorción de ácidos biliares en la práctica clínica.

El uso de ácidos biliares y Multi-fluorados<em&gt; En Vivo</em&gt; Imagen de Resonancia Magnética para medir el transporte de ácidos biliares

Este protocolo describe un método sencillo para analizar las señales de calcio en las plantas generadas por hemipteran insectos, como pulgones. Thaliana de Arabidopsis transformada con el biosensor de calcio GFP GCaMP3 permiten la proyección de imagen en tiempo real en vivo de la dinámica de calcio con una alta resolución temporal y espacial.

En tiempo real en Vivo la grabación de señales de calcio Arabidopsis durante la alimentación de insectos utilizando un Biosensor fluorescente

La activación de la quinasa multifuncional Ser/Thr AURKA se caracteriza por su autofosforilación en Thr288. Las sondas fluorescentes que dependen de FRET pueden discriminar entre sus estados inactivo y activado. Aquí, ilustramos algunas estrategias para la ingeniería de sondas, junto con un protocolo FRET rápido para seguir la activación de la quinasa a lo largo de la mitosis.

Monitoreo en tiempo real de la activación de aurora quinasa A utilizando biosensores FRET conformacionales en células vivas

Este protocolo presenta un flujo de trabajo estándar de cribado de alto rendimiento para microorganismos industriales. Consiste en construir una biblioteca mutante mediante mutagénesis ARTP, realizar cribado positivo de gotas con microfluidica automatizada y, posteriormente, verificar los resultados. La fiabilidad del flujo de trabajo se validó mediante el cribado de cepas de B. coagulans de alto rendimiento.

Cribado de alto rendimiento de mutantes de Bacillus coagulans hiperproductores de ácido L-láctico utilizando una plataforma microfluídica automatizada de gotas

En este protocolo de video rastreamos, a alta velocidad y en tres dimensiones, lisosomas marcados con fluorescencia dentro de células vivas, utilizando el método de seguimiento orbital en un microscopio modificado de dos fotones.

Rastreo Orbital 3D en un microscopio de dos fotones Modificado: una aplicación para el Seguimiento de vesículas intracelulares

Este artículo describe la monitorización en tiempo real de la ablación de HIFU en hígado canino con imágenes de ultrasonido de alta velocidad de fotogramas utilizando imágenes divergentes y de onda plana. Las imágenes de movimiento armónico para ultrasonido enfocado se utilizan para obtener imágenes de la disminución del desplazamiento inducido por la fuerza de radiación acústica en la región ablacionada.

Monitoreo en tiempo real de Ultrasonido de alta intensidad (HIFU) Ablación de<em&gt; In Vitro</em&gt; Canine hígados Uso Movimiento armónico Imaging para Ultrasonido Focalizado (HMIFU)

Aprende a visualizar el transporte de ácidos biliares en células vivas mediante un sensor FRET codificado genéticamente. Esta técnica permite monitorear dinámicas metabólicas con alta resolución espacial y temporal sin necesidad de marcaje.

Monitoreo en tiempo real de intracelular del ácido biliar Dinámica El uso de un sensor de ácido biliar basada FRET-codificados genéticamente (Video) | JoVE Journal

Monitoreo en tiempo real de intracelular del ácido biliar Dinámica El uso de un sensor de ácido biliar basada FRET-codificados genéticamente

Explorar más videos