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DOI: 10.3791/53748-v
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Este protocolo describe las técnicas específicas utilizadas para la caracterización estructural de las secuencias reductoras de glicosil extremo (RE) e interno de los heteroxilanos mediante el marcaje del RE con 2 aminobenzamida antes de la hidrólisis enzimática (endoxilanasa) y luego el análisis de los oligosacáridos resultantes mediante espectrometría de masas (MS) y resonancia magnética nuclear (RMN).
El objetivo general es caracterizar las secuencias glicosales de la región interna y del extremo reductor de los heteroxilanos marcando el residuo de azúcar final reductor original de los heravenaxilanos solubles en agua y tratándolo con una endoxilanasa para generar una mezcla de sacáridos de dolara de la marca. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la glicomicia, como las alteraciones de la estructura fina de oligosacáridos o polisacáridos, en respuesta al desarrollo planificado del crecimiento, así como a los factores de estrés abiótico y biótico. La principal ventaja de este método es que describe el enfoque integrado para la secuenciación de la secuencia de n reductora, así como la regeneración interna de cualquier glicano o polisacárido.
Prepare una solución molar de cianoborohidruro de sodio en un mililitro de agua. A continuación, disuelva 27,2 miligramos de reactivo 2AB en la solución de cianoborohidruro de sodio calentando a 65 grados centígrados y ajustando el pH de la mezcla de reacción a pH 5,5 con ácido acético al 10 por ciento. Añadir 200 microlitros de la mezcla de reacción a un miligramo de arabinoxilanos solubles en agua en un tubo de vidrio con tapón y mezclar con un mezclador de vórtice.
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