Name: Administración transarterial de virus oncolíticos para locorregional Terapia de HCC ortotópico en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Aprende a administrar virus oncolíticos por vía hepática arterial para terapia locorregional de carcinoma hepatocelular en modelos ortotópicos de rata. Esta técnica permite alcanzar altos títulos virales en múltiples lesiones tumorales.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo cuenta con el apoyo de los subproyectos SFB 824 C6 y C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), Fundación Alemana de Investigación, Bonn, Alemania.

Nota: Los siguientes pasos se han realizado de acuerdo con las directrices de nuestra institución y el gobierno local de Baviera, Alemania. Todos los intentos de reproducir este protocolo se deben hacer en la adhesión a las directrices locales para el tratamiento humanitario de los animales, según lo dictado por el cuidado de animales local y el empleo. Por ejemplo, muchos institutos requieren que los guantes estériles se usan durante la cirugía de roedores. Por otra parte, el trabajo con los virus debe realizarse de acuerdo con las regulaciones locales, teniendo cuidado para la seguridad personal y ambiental. Se debe tener cuidado para disponer adecuadamente de residuos contaminados y para limpiar instrumentos y espacio de trabajo (es decir, por tratamiento en autoclave y la limpieza con un desinfectante antiviral apropiado de acuerdo con las instrucciones del fabricante). 1. Preparativos antes de la cirugía A partir <ol><li> Esterilizar instrumentos quirúrgicos (es decir, por tratamiento en autoclave). </li><li> Diluir el virus a la correspondconcentración IATE, que variará dependiendo de la toxicidad del virus específico que está siendo utilizado y de la susceptibilidad de la cepa de rata. Nota: Por ejemplo, cuando el uso de virus de la estomatitis vesicular en ratas Buffalo macho, por lo general la inoculación de 10 7 pfu en un volumen de 1 ml, que es la dosis máxima tolerada en ese modelo. <ol><li> Rellenar previamente el virus (utilizando una técnica aséptica) en jeringuillas de 1 ml, y adjuntar 30 g de agujas, teniendo cuidado de eliminar el aire de la jeringa y la aguja. </li></ol></li><li> Preparar el espacio quirúrgico con todos los materiales y equipos necesarios, y rociar la zona con etanol para desinfectar. Llenar un pequeño recipiente con solución salina estéril (NaCl al 0,9%) para humedecer torundas de gasa y bastoncillos de algodón. </li></ol> 2. Preparación de la rata <ol><li> Administrar un analgésico (como se especifica por el comité de cuidado de los animales y el uso local), en la apropiada dosis 30 minutos antes de comenzar el procedimiento quirúrgico. Por ejemplo,administrar una dosis alta de metamizol (100-200 mg / kg). </li><li> Anestesiar la rata de usar la inhalación (isoflurano) o inyectable (es decir, una mezcla de medetomidina (0,15 mg / kg), midazolam (2 mg / kg), y el fentanilo (0,005 mg / kg), también conocido como MMF) anestesia. Administrar isolflurane a través de un vaporizador a 1-3% y ajustar según sea necesario para mantener la respiración normal y la frecuencia cardíaca. <ol><li> Antes de continuar, asegúrese de que la rata está completamente sedado y no pueda sentir dolor pellizcando la almohadilla de la pata y la observación de una reacción. </li><li> Aplicar un ungüento oftálmico veterinario para evitar la sequedad durante la anestesia. </li></ol></li><li> Afeitar el área abdominal desde el esternón hasta justo por encima de los genitales utilizando una pequeña cortadora de cabello veterinaria. Tenga cuidado para conseguir un afeitado apurado sin dañar la piel. </li><li> Fijar la rata en el lecho quirúrgico utilizando cinta adhesiva en las patas delanteras y las patas traseras, y, si se utiliza la anestesia de inhalación, coloque el hocico en un cono de la nariz de dimensiones adecuadas. Coloque una almohadilla térmicapor debajo de la rata para mantener la temperatura corporal. Desinfectar la zona abdominal usando un desinfectante de grado quirúrgico, seguido de un enjuague con alcohol y la aplicación de una pintura antiséptico. </li></ol> 3. La laparotomía <ol><li> Usando un pequeño bisturí curvo, tal como # 15, hacer una pequeña incisión vertical en la capa de la piel directamente a lo largo de la línea media. Extender la incisión hasta el proceso xifoides. A continuación, una incisión en la capa muscular levantando suavemente hacia arriba con un par de pinzas de Adson para hacer una incisión con bisturí, y luego extender la incisión hasta el proceso xifoides con tijeras quirúrgicas. Tener cuidado de no perforar los órganos de la cavidad abdominal o de dañar los pequeños vasos en cada lado del proceso xifoides. </li><li> Coloque un retractor a través del abdomen para difundir el músculo y la piel y exponer toda la zona abdominal. </li><li> Humedecer dos 7,5 x 7,5 cm 2 hisopos de gasa con solución salina fisiológica estéril y se extiende uno en la parte superior de la cirugíala apertura y uno en la parte inferior, como se muestra en la Figura 2A. </li></ol> 4. Aislamiento de la arteria hepática <ol><li> El uso de dos hisopos de aplicador de algodón humedecido humedecidos con solución salina fisiológica estéril, levante suavemente los intestinos y el ciego fuera de la cavidad abdominal, y colocarlos en el hisopo de gasa inferior. Doble la gasa sobre los órganos de mantener húmeda y para mantenerlos fuera del camino. </li><li> El uso de dos hisopos aplicador de algodón humedecido, levante suavemente el lóbulo hepático lateral izquierdo, que será el lóbulo más predominante en vista en esta etapa. Da la vuelta al lóbulo hacia arriba, y, usando un pequeño par de tijeras de primavera, cortar a través de la membrana fibrosa en la parte inferior del lóbulo, permitiendo que el lóbulo a ser completamente volteado hacia arriba y descansar en la parte superior de la torunda de gasa previamente colocado. Doblar el hisopo de gasa sobre el lóbulo para mantenerlo en su lugar. </li><li> Continuar con el siguiente lóbulo (el caudado anterior), que es ahora el lóbulo más anterior a la vista. con THe ayuda de un microscopio de disección y pinzas finas, diseccionar la membrana delgada que rodea el lóbulo con el fin de liberarlo y permitir que se volcó libremente hacia arriba. Coloque el lóbulo debajo de la torunda de gasa junto con el lóbulo lateral izquierdo. </li><li> Observar el lóbulo caudado posterior, que ahora serán visibles. Repita el paso 4.3 para diseccionar completamente el caudado lóbulo posterior y darle la vuelta hacia arriba y hacia el interior de la gasa junto con los lóbulos del hígado previamente colocados. </li><li> Justo debajo de la posición original del lóbulo caudado, encontrar la arteria hepática común, que ahora serán visibles y fácilmente reconocido por su fuerte pulsación. A raíz de la arteria hacia la derecha anatómica, observar el material membranoso de espesor oscureciendo las arterias hepáticas gastroduodenales y propios de la vista. Con unas pinzas finas, levanta este material y suavemente arrancarla, teniendo cuidado de evitar cualquier vasos pequeños en esta área. Use hisopos de algodón del aplicador para detener cualquier sangrado que puede ocurrir. <ol><li> Busque la unaramas rterial, que será claramente visible con la ayuda de un microscopio de disección cuando las membranas se disecan correctamente. </li></ol></li><li> El uso de dos, una pinza atraumática finas, diseccionar cuidadosamente la arteria hepática común, la arteria gastroduodenal, y la arteria hepática propia de tal manera que se liberan de las membranas que rodean (Figura 2B). </li></ol> 5. Preparación de la arteria para Inyección <ol><li> Pasar una sutura de prolene 7-0 por debajo de la arteria gastroduodenal, y el uso de un micro-porta-agujas para atar una ligadura permanente en el extremo distal, justo por encima de la bifurcación (véase la figura 1 para la colocación adecuada). Permitir aproximadamente 2 pulgadas de material de sutura restantes en los extremos, y la abrazadera con un soporte de aguja para tirar de la arteria enseñado, como en la figura 2C. </li><li> Coloque una pequeña pinza en la arteria hepática común para bloquear temporalmente el flujo sanguíneo (Figura 2C). Nota: Esta es importante para prevenir el sangrado masivo una vez que la aguja se retira de la arteria. Además, el bloqueo del flujo sanguíneo arterial permitirá la administración del virus más lento y una mayor eficiencia de transducción. <ol><li> Importante: Trabajar rápidamente para limitar la cantidad de tiempo que el flujo sanguíneo se detiene - realizar la inyección y la posterior ligadura de la arteria dentro de 5 min de pinzamiento de la arteria hepática común. </li></ol></li><li> Si es posible, aumentar la ampliación en el microscopio de disección, de modo que la arteria gastroduodenal es en un enfoque nítido y aparece lo suficientemente grande como para insertar con precisión la aguja G 30. Coloque la aguja de la jeringa de inyección en el lumen de la arteria gastroduodenal y empuje lentamente el émbolo. Nota: La colocación correcta de la aguja resultará en la solución inyectada fluye directamente a través de la arteria hepática propia y hacia el hígado. <ol><li> Realizar la inyección muy lentamente para maximizar la eficiencia de transducción. </li></ol></li> &lt;li&gt; Una vez se ha administrado todo el volumen de la inyección, se retrae lentamente la aguja de la arteria. Nota: No debe haber sangrado del sitio de inyección. En el caso de que el sangrado se produce, esto indica que la abrazadera no está correctamente colocado y debe ajustarse rápidamente. </li></ol> 6. Cierre <ol><li> Pasar una segunda sutura de prolene 7-0 por debajo de la arteria gastroduodenal, y atar una segunda ligadura permanente por encima del punto de inyección. </li><li> Retire la abrazadera de la arteria hepática común. Confirmar que el flujo de sangre a través de la arteria hepática propia hacia el hígado se ha restaurado. <ol><li> Cortar los extremos sueltos de las ligaduras. </li></ol></li><li> Confirmar que no hay sangrado antes de devolver los intestinos y el hígado a la cavidad abdominal. Tenga cuidado de que el apéndice se devuelve en su orientación original. </li><li> Suturar el músculo y la piel en capas separadas utilizando material de sutura Vicryl 4-0 con una aguja curva. lugar continuous suturas de aproximadamente 1 mm de distancia y tirar con fuerza. <ol><li> Durante la fase de sutura, administrar un analgésico tal como buprenorfina (0,05 mg / kg). </li></ol></li><li> Retire la rata de la anestesia. Si se ha utilizado isoflurano, la rata debe recuperar la consciencia dentro de varios minutos. Si MMF se ha utilizado como una anestesia inyectable, antagonizar con una inyección subcutánea de atipamezol (0,75 mg / kg), Flumazenil (0,2 mg / kg), y la naloxona (9,12 mg / kg), que revertir los efectos de la anestesia y permitir que los animales puedan recobrar el conocimiento dentro de los 20 min. Mantener calientes ratas con una lámpara de calentamiento por infrarrojos durante la fase inicial de despertar. <ol><li> No deje un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal. </li><li> No devuelva un animal que ha sido sometido a una cirugía para la compañía de otros animales hasta que esté completamente recuperado. </li></ol></li><li> Supervisar las ratas después de la operación para detectar signos patológicos de la angustia, y el seguimientocon analgésicos como es requerido por el comité de cuidado y uso de animales local. Por ejemplo, la buprenorfina puede administrarse a 0,05 mg / kg cada 12 horas. </li></ol>

<ol><li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+health+policy+-+lessons+from+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence-based health policy - lessons from the Global Burden of Disease Study.</a> Science. 274, 740-743 (1996).</li>
<li>Parkin, D. M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+world+cancer+burden%3A+Globocan+2000%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> Int J Cancer. 94, 153-156 (2001).</li>
<li>Bruix, J., Sala, M., Llovet, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoembolization+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chemoembolization for hepatocellular carcinoma.</a> Gastroenterology. 127, 179-188 (2004).</li>
<li>Miraglia, R., Pietrosi, G., Maruzzelli, L., Petridis, I., Caruso, S., Marrone, G., Mamone, G., Vizzini, G., Luca, A., Gridelli, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+transcatheter+embolization%2Fchemoembolization+%28TAE%2FTACE%29+for+the+treatment+of+single+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of transcatheter embolization/chemoembolization (TAE/TACE) for the treatment of single hepatocellular carcinoma.</a> World J Gastroenterol. 13, 2952-2955 (2007).</li>
<li>Breedis, C., Young, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood+supply+of+neoplasms+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The blood supply of neoplasms in the liver.</a> Am J Pathol. 30, 969-977 (1954).</li>
<li>Nakashima, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+characteristics+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathologic characteristics of hepatocellular carcinoma.</a> Semin Liver Dis. 6, 259-266 (1986).</li>
<li>Heo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+dose-finding+clinical+trial+of+oncolytic+immunotherapeutic+vaccinia+JX-594+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer.</a> Nat Med. 19, 329-336 (2013).</li>
<li>Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+newcastle+disease+virus+as+an+improved+oncolytic+agent+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma.</a> Mol Ther. 18, 275-284 (2010).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Kournioti, C., Tai, Y. S., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolysis+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+the+rat+liver+by+hepatic+artery+infusion+of+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Oncolysis of multifocal hepatocellular carcinoma in the rat liver by hepatic artery infusion of vesicular stomatitis virus.</a> Mol Ther. 9, 368-376 (2004).</li>
<li>Shinozaki, K., Ebert, O., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+advanced+hepatocellular+carcinoma+in+rats+via+repeated+hepatic+arterial+infusions+of+recombinant+VSV%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Eradication of advanced hepatocellular carcinoma in rats via repeated hepatic arterial infusions of recombinant VSV.</a> Hepatology. 41, 196-203 (2005).</li>
<li>Altomonte, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+antitumor+effects+of+transarterial+viroembolization+for+multifocal+hepatocellular+carcinoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Synergistic antitumor effects of transarterial viroembolization for multifocal hepatocellular carcinoma in rats.</a> Hepatology. 48, 1864-1873 (2008).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aunque la inyección intratumoral directa es sin duda el método más simple para dar como resultado una transducción tumoral eficiente de un solo nódulo tumoral, la infusión arterial hepática representa una vía de administración ideal para atacar el CHC ortotópico multifocal. Este método ha demostrado ser seguro y eficaz para tratar el CHC en ratas inmunocompetentes con virus oncolíticos. Además, dado que los pacientes con CHC se tratan de forma rutinaria mediante la aplicación transarterial de quimioembolización, el mét...

El carcinoma hepatocelular (CHC) es el quinto cáncer más frecuente en todo el mundo, y la tercera causa principal de muerte relacionada con el cáncer, por lo que es un importante problema de salud 1,2. Para los pacientes que no son candidatos para la resección del tumor, o aquellos que esperan un trasplante de hígado, la terapia locorregional la técnica de embolización transarterial (TAE) o la quimioembolización transarterial (TACE) se aplican como estándar de cuidados paliativos 3,4. Estas terapias se aprovechan de la característica única de doble suministro de sangre en el hígado mediante el cual los tumores se alimentan casi exclusivamente por el flujo sanguíneo arterial hepática, mientras que el hígado circundante recibe la mayor parte de su suministro de sangre de la vena porta 5,6. Debido a las eficacias extremadamente limitadas de las terapias establecidas para el CHC, virus oncolíticos han surgido como alternativas terapéuticas prometedoras. JX-594, recientemente rebautizada Pexa-Vec, es una quinasa eliminado en vectores vaccinia timidina, armado de granulocitos-macrophage factor estimulante de colonias (GM-CSF), que se ha completado la fase II de ensayos clínicos para el CHC 7. Más recientemente, un vector recombinante virus de la estomatitis vesicular (VSV) que expresa interferón beta humano ha entrado en una fase I de ensayos clínicos para el CHC sorafenib-refractario (NCT01628640). Como los virus oncolíticos se acercan más a la obtención de la aprobación para la aplicación clínica de HCC en pacientes, la necesidad de una vía de administración eficaz para apuntar enfermedad multifocal es evidente. Mientras que la administración sistémica es en gran parte ineficaz debido a la transducción de tumor ineficiente, aplicaciones intratumorales podrían limitar la eficacia de la terapia para el tumor inyectado, dejando lesiones microscópicas uninjectable susceptibles a la progresión de la enfermedad. Hemos establecido un método de aislamiento de la arteria hepática en ratas para administrar la terapia virus oncolítico de una manera locorregional para apuntar HCC ortotópico. Hemos demostrado que esta vía de administración da como resultado seguro y effective la transducción de nódulos HCC multifocales, lo que resulta en una prolongación significativa la supervivencia en ratas inmunocompetentes 8-10. A continuación, se describe el método de acceso, disección, e inyectar en la arteria hepática en ratas. Un esquema del procedimiento se muestra en la Figura 1 (previamente publicado 9)

<table><tbody><tr><td>Maquinillas veterinarias</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>Pequeña recortadora inalámbrica ideal para eliminar el pelo de la zona quirúrgica</td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G Agujas</td><td>Braun</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12; "</td></tr><tr><td>Jeringas de 1 ml</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>Jeringa de tuberculina</td></tr><tr><td>Bisturí desechable</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td>#15 cuchilla&nbsp;</td></tr><tr><td>tijeras quirúrgicas estándar</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>Afilado/romo, para abrir la piel y los músculos</td></tr><tr><td>Pinza Adson</td><td>Fine Science Tools</td><td>1101-12</td><td>Con dientes, para agarrar la piel y los músculos</td></tr><tr><td>Retractor de Alm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>Con dientes romos, para abrir la cavidad abdominal durante la cirugía</td></tr><tr><td>Hisopos de gasa</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>18504</td><td>7,5 cm x 7,5 cm, debe esterilizarse en autoclave antes de usarlo</td></tr><tr><td>Hisopos aplicadores con punta de algodón</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>11970</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Foreceps de punta fina</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0,4 mm, punta angulada, para la disección de la arteria hepática</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>Para cortes delicados</td></tr><tr><td>Soporte para microagujas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>Para ligar la arteria gastroduodenal</td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>Mordazas de carburo de tungsteno</td></tr><tr><td>7-0 Suturas de Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>Sutura de polipropileno con aguja curvada, para ligadura de la arteria gastroduodenal</td></tr><tr><td>4-0 Suturas Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>Con aguja curva</td></tr><tr><td>acoplada Lámpara de calentamiento por infrarrojos</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>Para el mantenimiento de la temperatura corporal en el postoperatorio</td></tr></tbody></table>

administración transarterial de virus oncolíticos para locorregional terapia de hcc ortotópico en ratas

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

El carcinoma hepatocelular (CHC) es una enfermedad con opciones de tratamiento limitadas y mal pronóstico. En los últimos años, las viroterapias oncolíticas han demostrado ser herramientas potencialmente poderosas para combatir las neoplasias malignas. Debido al suministro dual de sangre único en el hígado, es posible aplicar terapias localmente a los tumores hepáticos ortotópicos, que se alimentan predominantemente del flujo sanguíneo arterial. Hemos demostrado previamente que la administración arterial hepática de virus oncolíticos da lugar a una transducción segura y eficiente de las lesiones multifocales de CHC, lo que resulta en una prolongación significativa de la supervivencia en ratas inmunocompetentes. Este procedimiento imita de cerca la aplicación de la embolización transarterial en los pacientes, que es el tratamiento paliativo estándar que se brinda a muchos pacientes con CHC. La capacidad de administrar terapias tumorales a través de la arteria hepática en ratas permite un modelo preclínico altamente sofisticado para evaluar nuevos vectores virales en desarrollo. En este trabajo describimos el protocolo detallado para la microdisección de la arteria hepática para la infusión de vectores oncolíticos del virus en el tratamiento del CHC ortotópico.

Con la experiencia, se puede lograr una tasa de éxito de casi el 100% (lo que significa que la arteria se diseccionó y se inyecta con éxito, y el animal sobrevivió cirugía). Sin embargo, el estado de salud de la rata antes de la cirugía (grado de carga tumoral, la función hepática subyacente, etc.), obviamente, jugar un papel en el resultado de la intervención quirúrgica. Después de la cirugía, las ratas se puede esperar que experimentar pérdida de peso transitoria y una ligera ...

Las viroterapias oncolíticas están en desarrollo como nuevas terapias para el tratamiento del carcinoma hepatocelular (CHC). En este trabajo describimos un método para el tratamiento locorregional del CHC mediante la administración arterial hepática de virus oncolítico.

Administración transarterial de virus oncolíticos para locorregional Terapia de HCC ortotópico en ratas

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

El objetivo general de esta intervención quirúrgica consiste en administrar una terapia con virus oncolítico de forma locorregional mediante la administración arterial hepática a lesiones de carcinoma hepatocelular ortotópico o HCC. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de los virus oncolíticos, como por ejemplo, ¿cuál es la eficacia del tratamiento aplicado de manera locorregional para tratar el HCC ortotópico? La principal ventaja de esta técnica es que permite la administración de altos títulos de virus oncolítico a múltiples lesiones de HCC.Una limitación de la administración intratumoral o sistémica. Esta técnica imita la aplicación de la quimioembolización transarterial. El estándar de atención para muchos pacientes con HCC que permite una excelente traducción de datos preclínicos.Antes de comenzar la cirugía, colóquese el equipo de protección personal adecuado y desinfecte el área quirúrgica y el equipo con etanol al 70%. Diluya el virus a la concentración adecuada, según la toxicidad del virus y la susceptibilidad de la cepa de rata que se esté utilizando. Luego, llene previamente jeringas de un mililitro con el virus diluido y equípelas con agujas de calibre 30, teniendo cuidado de eliminar cualquier burbuja.Confirme que la rata está completamente sedada por la ausencia de respuesta al pellizco en la planta del pie. Con un escalpelo pequeño y curvo, realice una incisión pequeña y vertical en la piel, directamente a lo largo de la línea media, y extienda la abertura hasta el proceso xifoides. A continuación, incise la capa muscular de la misma manera, teniendo cuidado de no perforar los órganos de la cavidad abdominal.Coloque un retractor a través del abdomen para separar el músculo y la piel, exponiendo toda el área abdominal. Luego humedezca dos gasas de 7,5 por 7,5 centímetros con solución salina fisiológica y coloque una gasa sobre la parte superior de la abertura quirúrgica y otra sobre la inferior. Para aislar la arteria hepática, primero use dos bastoncillos de algodón humedecidos para transferir suavemente los intestinos y el ciego fuera de la cavidad abdominal hacia la gasa inferior, doblando la gasa sobre los órganos para mantenerlos húmedos.A continuación, levante y gire suavemente el lóbulo hepático lateral izquierdo hacia arriba sobre la gasa superior y utilice un par pequeño de tijeras de resorte para cortar la membrana fibrosa en la cara inferior del lóbulo. Doble la gasa sobre el lóbulo para mantenerlo en su lugar. Luego, utilizando un microscopio de disección y pinzas finas, separe la membrana delgada que rodea el lóbulo caudado interno y gire el lóbulo hacia la gasa superior.Coloque el lóbulo caudado interno debajo del pliegue de gasa junto con el lóbulo lateral izquierdo, y luego diseccione el lóbulo caudado posterior de la misma manera. Después de colocar el lóbulo caudado posterior debajo de la gasa, localice la arteria hepática común por su fuerte pulso. Siguiendo la arteria hacia la derecha anatómica, use pinzas finas para retirar el tejido membranoso grueso que oculta las arterias gastroduodenal y hepática propia.Detenga cualquier sangrado con un aplicador de algodón. Luego, utilice dos fórceps finos y atraumáticos para diseccionar cuidadosamente las arterias hepática común, gastroduodenal y hepática propia de las membranas circundantes. Para inyectar la arteria hepática, primero pase una sutura de prolene 7-0 por debajo de la arteria gastroduodenal y use un portagujas microquirúrgico para colocar una ligadura permanente en el extremo distal de la arteria, justo por encima de la bifurcación, dejando aproximadamente dos pulgadas de material de sutura en cada extremo.A continuación, coloque una pinza pequeña sobre la arteria hepática común para bloquear temporalmente el flujo sanguíneo. Dentro de los cinco minutos siguientes a la colocación de la pinza, aumente el aumento hasta que la arteria gastroduodenal esté nítidamente enfocada y aparezca lo suficientemente grande como para insertar con precisión la aguja. Luego, introduzca la aguja de la jeringa de inyección en la luz de la arteria gastroduodenal y presione lentamente el émbolo para maximizar la eficiencia de transducción.Una vez administrado todo el volumen de inyección, retire lentamente la aguja de la arteria y pase una segunda sutura de prolene 7-0 debajo de la arteria gastroduodenal. Coloque una segunda ligadura permanente por encima del sitio de inyección y retire el clamp de la arteria hepática común. Confirme que el flujo sanguíneo a través de la arteria hepática propia hacia el hígado se ha restablecido, y corte los extremos sueltos de las ligaduras.Confirme que no haya hemorragia interna. Luego, devuelva los tejidos externos a la cavidad abdominal. Utilizando vicryl 4-0 y una aguja curva, sutúre el músculo y la piel en capas separadas con puntos continuos aproximadamente un milímetro aparte.Luego, supervise al animal hasta que se recupere por completo. La cinética de la replicación viral intratumoral depende del virus. Por ejemplo, la replicación del virus de la estomatitis vesicular alcanza su punto máximo dentro de un día después de la inyección.Con numerosos focos virales, un progenitor exclusivamente dentro de los nódulos de carcinoma hepatocelular de los animales inyectados. En contraste, el virus de la enfermedad de Newcastle presenta una cinética prolongada de replicación viral, con títulos máximos del virus el día cinco posterior a la inyección. Debido a la especificidad tumoral inherente de los virus, el patógeno se elimina rápidamente del tejido hepático normal circundante.Además, el análisis morfométrico de nódulos tumorales tratados con el vector del virus de la estomatitis vesicular seleccionados al azar demuestra que la eficiencia de transducción tumoral no se correlaciona con el tamaño del tumor. La administración transarterial hepática de microesferas de almidón degradable, simultáneamente con la solución viral, provoca una embolización casi completa de los nódulos tumorales, mientras que tiene un efecto mínimo sobre la perfusión del tejido hepático normal. Como se demuestra además mediante estas imágenes dinámicas de resonancia magnética con contraste utilizando un agente de contraste de gadolinio.Una vez dominada, esta técnica puede completarse en 20 minutos, si se realiza adecuadamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar tener todo preparado previamente antes de administrar la anestesia, para minimizar el tiempo requerido para la intervención. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo diseccionar la arteria hepática y prepararla para la inyección de soluciones de virus oncolíticos para la terapia locorregional del carcinoma hepatocelular.No olvide que trabajar con virus puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones, como usar ropa protectora personal y desinfectar adecuadamente el área de trabajo y los instrumentos, mientras se realiza este procedimiento.

transarterial-administration-oncolytic-viruses-for-locoregional

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

En este artículo se describe la identificación del serotipo del virus adeno-asociado 3 (AAV3) como el vector más eficiente para orientar las células humanas del cáncer de hígado.

De alta eficiencia de transducción de las células de cáncer de hígado por recombinante serotipo del virus adeno-asociado 3 Vectores

Se presenta una revisión fácil de establecer de la clásica banda de dos técnicas para el trasplante ortotópico de hígado en ratas.

Trasplante ortotópico de hígado en ratas

El video muestra la administración locorregional de virus oncolíticos a través de la inyección arterial hepática como enfoque terapéutico para el carcinoma hepatocelular. Estos virus se replican selectivamente en las células tumorales, induciendo la lisis celular y liberando antígenos asociados a las células tumorales. Este proceso desencadena la muerte celular inmunogénica, induciendo una respuesta antitumoral.

Ataque a tumores hepáticos con virus oncolíticos a través de la arteria hepática

Trasplante hepático auxiliar proporciona un soporte temporal en la insuficiencia hepática aguda, hasta que la regeneración del hígado no. El trasplante heterotópico auxiliar hígado (HALT) con arterialización vena porta (PVA) hace una función hepática suficiente. Hemos desarrollado una técnica análoga en la rata, para examinar la influencia de la arterialización de la vena porta en la morfología y la función del injerto.

Heterotópico Rata auxiliar Trasplante de Hígado Con Flujo regulado Portal Vein Arterialización en aguda Insuficiencia Hepática

La reconstrucción de la cava suprahepática (SHVC) sigue siendo un paso difícil en el trasplante orthotopic del hígado de rata. En este artículo, se muestra un protocolo paso a paso para la reconstrucción de SHVC en ratas usando una técnica de anastomosis magnética novela.

Un modelo de rata de Orthotopic trasplante del hígado usando una técnica de Anastomosis magnética novela para la reconstrucción de la Vena Cava suprahepática

El objetivo de este artículo es proporcionar una cartilla para el desarrollo y uso del modelo de conejo de carcinoma VX2 para cáncer de hígado.

Desarrollo y aplicación angiográfica del conejo VX2 modelo de cáncer de hígado

Aquí, describimos el desarrollo de un modelo murino clínicamente relevante de cáncer de hígado recapitulando las características inmunitarias típicas del cáncer hepatocelular (HCC).

Un modelo de ratón ortotópico inducido por hepatocitos oncogénicos que surge en el ajuste de la inflamación hepática y la fibrosis

La inyección de organoides de cáncer colorrectal (CCR) en la vena porta genera metástasis hepáticas ricas en estroma. Este modelo de ratón de metástasis hepática del CCR representa una herramienta útil para estudiar las interacciones tumor-estroma y desarrollar nuevas terapias dirigidas al estroma, como las terapias génicas mediadas por virus adenoasociadas.

Inyección en la vena porta de organoides de cáncer colorrectal para estudiar la metástasis hepática del estroma

Aquí, presentamos un protocolo para crear xenoinjertos de carcinoma hepatocelular ortotópico con y sin ligadura de la arteria hepática y realizar imágenes no invasivas de tomografía por emisión de positrones (PET) de hipoxia tumoral utilizando [18 F] fluoromisonidazol ([18 F] FMISO) y [18 F] fluorodesoxiglucosa ([18F] FDG).

Imágenes PET/MR no invasivas en un modelo ortotópico de ratón de carcinoma hepatocelular

Virus oncolíticos son prometedores para la terapéutica del cáncer. La capacidad de determinar la infectability de muestras de tejido obtenidas de pacientes vivos antes del tratamiento es una ventaja única de este enfoque terapéutico. Este protocolo describe cómo procesar los tejidos...

Ex infección in vivo del tejido vivo con virus oncolíticos

Aprende a administrar virus oncolíticos por vía hepática arterial para terapia locorregional de carcinoma hepatocelular en modelos ortotópicos de rata. Esta técnica permite alcanzar altos títulos virales en múltiples lesiones tumorales.

Administración transarterial de virus oncolíticos para locorregional Terapia de HCC ortotópico en ratas

Explorar más videos