Name: El tratamiento de ratones con SCA1 hidrosolubles compuestos para no específicamente estimular la función mitocondrial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Aprende a evaluar compuestos hidrosolubles mitocondriales para tratar la ataxia espinocerebelosa tipo 1 en ratones. Este método permite cuantificar efectos terapéuticos en comportamiento cerebelar y tejido.

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Nos gustaría agradecer al Dr. Harry Orr de la Universidad de Minnesota por su generoso regalo de ratones transgénicos. También nos gustaría agradecer a los siguientes ex alumnos de Skidmore College por su trabajo realizando los experimentos anteriores: Monica Villegas, Porter Hall, Mitchell Spring, Nicholas Toker, Jenny Zhang, Chloe Larson y Cheyanne Slocum. Además, nos gustaría agradecer a Skidmore College por financiar el desarrollo de estos métodos.

<ol><li>Stucki, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+impairments+contribute+to+Spinocerebellar+ataxia+type+1+progression+and+can+be+ameliorated+by+the+mitochondria-targeted+antioxidant+MitoQ%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial impairments contribute to Spinocerebellar ataxia type 1 progression and can be ameliorated by the mitochondria-targeted antioxidant MitoQ.</a> Free Radic Biol Med. 97, 427-440 (2016).</li>
<li>Breuer, M. E., Willems, P. H., Russel, F. G., Koopman, W. J., Smeitink, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+mitochondrial+dysfunctions+in+the+brain%2C+from+mice+to+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inherit+Metab+Dis%22%5BJournal%5D)">Modeling mitochondrial dysfunctions in the brain, from mice to men.</a> J Inherit Metab Dis. 35 (2), 193-210 (2012).</li>
<li>Breuer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondrial+OXPHOS+dysfunction+in+the+development+of+neurologic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondrial OXPHOS dysfunction in the development of neurologic diseases.</a> Neurobiol Dis. , (2012).</li>
<li>Hroudová, J., Singh, N., Fizar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunctions+in+neurodegenerative+diseases%2C+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunctions in neurodegenerative diseases, relevance to Alzheimer's disease.</a> Biomed Res Int. 2014, 175062(2014).</li>
<li>Burright, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCA1+transgenic+mice%2C+a+model+for+neurodegeneration+caused+by+an+expanded+CAG+trinucleotide+repeat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SCA1 transgenic mice, a model for neurodegeneration caused by an expanded CAG trinucleotide repeat.</a> Cell. 82 (6), 937-948 (1995).</li>
<li>Clark, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purkinje+cell+expression+of+a+mutant+allele+of+SCA1+in+transgenic+mice+leads+to+disparate+effects+on+motor+behaviors%2C+followed+by+a+progressive+cerebellar+dysfunction+and+histological+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Purkinje cell expression of a mutant allele of SCA1 in transgenic mice leads to disparate effects on motor behaviors, followed by a progressive cerebellar dysfunction and histological alterations.</a> J Neurosci. 17 (19), 7385-7395 (1997).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers%2C+tissues+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3 (6), 965-976 (2008).</li>
<li>Deng-Bryant, Y., Singh, I. N., Carrico, K. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+tempol%2C+a+catalytic+scavenger+of+peroxynitrite-derived+free+radicals%2C+in+a+mouse+traumatic+brain+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of tempol, a catalytic scavenger of peroxynitrite-derived free radicals, in a mouse traumatic brain injury model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (6), 1114-1126 (2008).</li>
<li>Vaishnav, R. A., Singh, I. N., Miller, D. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+peroxidation-derived+reactive+aldehydes+directly+and+differentially+impair+spinal+cord+and+brain+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lipid peroxidation-derived reactive aldehydes directly and differentially impair spinal cord and brain mitochondrial function.</a> J Neurotrauma. 27 (7), 1311-1320 (2010).</li>
<li>Matthews, R. T., Yang, L., Browne, S., Baik, M., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+administration+increases+brain+mitochondrial+concentrations+and+exerts+neuroprotective+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 administration increases brain mitochondrial concentrations and exerts neuroprotective effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (15), 8892-8897 (1998).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+creatine+in+a+transgenic+mouse+model+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of creatine in a transgenic mouse model of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 20 (12), 4389-4397 (2000).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+coenzyme+Q10+and+remacemide+in+transgenic+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of coenzyme Q10 and remacemide in transgenic mouse models of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 22 (5), 1592-1599 (2002).</li>
<li>Hersch, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creatine+in+Huntington+disease+is+safe%2C+tolerable%2C+bioavailable+in+brain+and+reduces+serum+8OH2%27dG%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creatine in Huntington disease is safe, tolerable, bioavailable in brain and reduces serum 8OH2'dG.</a> Neurology. 66 (2), 250-252 (2006).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+with+coenzyme+Q10+and+creatine+produces+additive+neuroprotective+effects+in+models+of+Parkinson%27s+and+Huntington%27s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Combination therapy with coenzyme Q10 and creatine produces additive neuroprotective effects in models of Parkinson's and Huntington's diseases.</a> J Neurochem. 109 (5), 1427-1439 (2009).</li>
<li>Yang, X., Dai, G., Li, G., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+reduces+beta-amyloid+plaque+in+an+APP%2FPS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 reduces beta-amyloid plaque in an APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Mol Neurosci. 41 (1), 110-113 (2010).</li>
<li>Sandhir, R., Mehrotra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+supplementation+is+effective+in+improving+mitochondrial+dysfunctions+induced+by+3-nitropropionic+acid%2C+implications+in+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Quercetin supplementation is effective in improving mitochondrial dysfunctions induced by 3-nitropropionic acid, implications in Huntington's disease.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (3), 421-430 (2013).</li>
<li>Ergonul, P. G., Nergiz, C. <a target="_blank" href="http://www.agriculturejournals.cz/publicFiles/31627.pdf">Determination of organic acids in olive fruit by HPLC.</a> 'Czech Food Sci. 28 (3), 202-205 (2010).</li>
<li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantiative+measurement+of+motor+inco-ordination+in+naive+mice+using+an+acelerating+rotarod%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The quantiative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an acelerating rotarod.</a> J Pharm Pharmacol. 20 (4), 302-304 (1968).</li>
<li>Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+motor+balance+and+coordination+in+mice+using+the+balance+beam%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Servadio, A., Koshy, B., Armstrong, D., Antalffy, B., Orr, H. T., Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+analysis+of+the+ataxin-1+protein+in+tissues+from+normal+and+spinocerebellar+ataxia+type+1+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression analysis of the ataxin-1 protein in tissues from normal and spinocerebellar ataxia type 1 individuals.</a> Nat Genet. 10 (1), 94-98 (1995).</li>
<li>Klement, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ataxin-1+nuclear+localization+and+aggregation%2C+role+in+polyglutamine-induced+disease+in+SCA1+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ataxin-1 nuclear localization and aggregation, role in polyglutamine-induced disease in SCA1 transgenic mice.</a> Cell. 95 (1), 41-53 (1998).</li>
<li>Serra, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+profiling+links+SCA1+pathophysiology+to+glutamate+signaling+in+Purkinje+cells+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene profiling links SCA1 pathophysiology to glutamate signaling in Purkinje cells of transgenic mice.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2535-2543 (2004).</li>
<li>Carter, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+progressive+motor+deficits+in+mice+transgenic+for+the+human+Huntington%27s+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of progressive motor deficits in mice transgenic for the human Huntington's disease mutation.</a> J Neurosci. 19 (8), 3248-3257 (1999).</li>
<li>Anjomani Virmouni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+GAA-repeat-expansion-based+mouse+model+of+Friedreich%27s+ataxia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A novel GAA-repeat-expansion-based mouse model of Friedreich's ataxia.</a> Dis Model Mech. 8 (3), 225-235 (2015).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Si se utilizan estos métodos como se describe, que son capaces de detectar y mitigar la disfunción mitocondrial fosforilación mediada oxidativo en modelos de ratones enfermedad neurodegenerativa cerebelosos. Los ensayos bioquímicos y de comportamiento combinados son métodos multifacéticos para determinar el grado de contribución a la patología mitocondrial enfermedad neurodegenerativa cerebelosa. Al tratar a los ratones con ácido succínico para estimular el metabolismo y estimular la función mitocondrial, que son capace...

Las mitocondrias son los productores principales de trifosfato de adenosina (ATP), una coenzima esencial para la energía celular, con la mayoría de ATP mitocondrial producido a través de la fosforilación oxidativa (OXPHOS) usando la cadena de transporte de electrones. El cerebro, dada su alta demanda metabólica y su dependencia de la fosforilación oxidativa para la alimentación de la actividad neuronal, es altamente susceptible a la disfunción mitocondrial. Como resultado, la disfunción mitocondrial se activa durante el proceso de envejecimiento 1 y está implicada en la patogénesis de múltiples enfermedades neurodegenerativas 2, 3, 4. Por lo tanto, se deduce que las mitocondrias son dianas terapéuticas atractivas para la neurodegeneración. En este protocolo, hemos adoptado el uso de la ataxia espinocerebelosa tipo 1 (SCA1) como una enfermedad neurodegenerativa modelo para el estudio de las mitocondriasl disfunción y el desarrollo de terapias mitocondriales de orientación. SCA1 es causada por una mutación de poliglutamina (polyQ) expansión de repetición en el producto del gen ataxina-1 que desencadena la degeneración progresiva de las neuronas de Purkinje del cerebelo y neuronas de otras regiones del cerebro. La línea de ratón transgénico utilizado aquí (designado como el ratón SCA1), que expresa un polyQ-mutante ataxina-1 transgén bajo el control de un promotor específico de las células Purkinje, permite el análisis específico del componente de las células de Purkinje de SCA1 5. Los ratones con SCA1 sufren degeneración de las células de Purkinje gradual y desarrollan marcha atáxica 6. La disfunción mitocondrial complejo y la eficacia del tratamiento mitocondrial de orientación pueden ser evaluados con una batería de ensayos moleculares y de comportamiento. La disfunción mitocondrial complejo se mide ex vivo mediante ensayos que detectan la respiración alterada consumo de oxígeno en el tejido del cerebelo enla presencia de sustratos de cadena de transporte de electrones y los inhibidores de 7. Ensayos de respiración se han utilizado previamente con el tejido permeabilized, los aislados mitocondriales, y todo el tejido 7, 8, 9. Permiten una evaluación directa de la función mitocondrial a diferencia de los métodos de recopilación de datos morfológicos como la microscopía electrónica de transmisión o la tinción de inmunofluorescencia. El uso de todo el tejido en lugar de mitocondrias aisladas evita sesgos en la selección de las mitocondrias sanas que pueden ocurrir durante el proceso de aislamiento 7. Cuando se adapta al protocolo como se muestra, el ensayo de respiración es un valioso método para la detección de la disfunción mitocondrial en enfermedades neurodegenerativas del cerebelo. activadores no específicos del metabolismo pueden utilizarse para inferir la disfunción mitocondrial en modelos de ratones transgénicos de diseas neurodegenerativase y la ayuda en el desarrollo de nuevas terapias. La quercetina, la coenzima Q10 y la creatina han sido mostrado para mejorar la patología enfermedad neurodegenerativa en pacientes y en modelos animales de enfermedad neurodegenerativa 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. Aquí presentamos un activador metabólico novela, ácido succínico, para estimular el metabolismo y estimular la función mitocondrial en la enfermedad neurodegenerativa. Para asegurarse de que el activador está cruzando la barrera hematoencefálica, HPLC se empleó para detectar la entrega al tejido neural en ratones tratados 17. Para evaluar los efectos terapéuticos de los compuestos solubles en agua metabólicamente específica tales como el ácido succínico, una batería de paradigmas de comportamiento y estudios inmunopatológicos se puede utilizar. due a los déficits de coordinación motora se encuentran en la enfermedad neurodegenerativa cerebelosa, el ensayo pista huella, ensayo de haz y la aceleración de ensayo de barra giratoria se usa para detectar rescate de la patología conductual 6, 18, 19. Estas medidas se complementan con la evaluación de inmunopatológico citoarquitectura cerebelosa mediante la evaluación de espesor molecular capa (definida como Purkinje de células dendríticas longitud Arbor) y de Purkinje recuentos soma celular dentro de un lóbulo definido de tejido cerebelar 6, 20, 21. Aquí presentamos varios métodos neuropatológicos y de comportamiento para la detección y el tratamiento de la disfunción mitocondrial con compuestos solubles en agua metabólicamente objetivo. Utilizamos el análisis ex vivo de la respiración mitocondrial para analizar la disfunción mitocondrial en el tran SCA1sgenic ratón. Además, se muestra que los síntomas de la enfermedad y la patología se mejoran por el ácido succínico refuerzo mitocondrial soluble en agua, implicando más que la disfunción mitocondrial en progresión de la enfermedad SCA1.

<table><tbody><tr><td>Difosfato de adenosina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2754</td><td>ADP</td></tr><tr><td>Ascorbato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2153</td><td>BSA</td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-fenilindol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Digitonina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0632</td><td>DTT</td></tr><tr><td>Suero de burro</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>Glutamato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1446600</td><td></td></tr><tr><td>Malato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6994</td><td></td></tr><tr><td>Manitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Potasio-lactobionato</td><td>Bio-Azúcares</td><td>69313-67-3</td><td></td></tr><tr><td>Rotenona</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Saponina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Ácido succínico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3674</td><td></td></tr><tr><td>N,N&prime;,N&prime; -Tetrametil-p-fenilendiamina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7394</td><td>TMPD</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma Aldrich</td><td>U0631</td><td></td></tr><tr><td>Medio de montaje Vectashield</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000<</td><td></td></tr><tr><td>strong>Antibodies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>11NQ anticuerpo (anti-ataxina-1 )</td><td></td><td></td><td>Servadio, et al. 1995, PMID: 7647801</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-ratón anti-anti-ratón</td><td></td> anti-11015 <td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-conejo anti-conejo anticuerpo secundario</td><td>Life Technologies</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>Calbindin anticuerpo (cabra)</td><td>Santa Cruz</td><td>C-20<</td><td></td></tr><tr><td>strong>Animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Control de ratones transgénicos</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>A02</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>ratones SCA1</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>B05</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>Ratones de tipo salvaje</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001800</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ESM-100L micrótomo</td><td>ERMA</td><td></td><td>Sledge Microscopio</td></tr><tr><td>Fluoview FV1200 Microscopio Confocal</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de glicerol-gelatina</td><td>FD Neuro Technologies</td><td>PO101</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa Hamilton</td><td>Sigma Aldrich</td><td>VCAT 80465</td><td></td></tr><tr><td>OXYT1 Unidad de control de electrodos Oxytherm</td><td>Hansatech Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P.T.F.E. papel</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX-08277-15</td><td></td></tr><tr><td>Rotallion Rotarod</td><td>PPP& G</td><td></td><td>póngase en contacto con el autor para correspondencia para obtener información</td></tr><tr><td>Ultimate 3000 HPLC</td><td>Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://imagej.nih.gov/ij/">http://imagej.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>Cell counter plugin (for ImageJ)</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a></td></tr><tr><td>3P& G Rota-Rod v3.3.3 (software rotarod)</td><td>PPP& G Póngase</td><td></td><td>en contacto con el autor para correspondencia para obtener información</td></tr><tr><td>Phidget21.dll (necesario para el software rotarod)</td><td>DLL-Files.com</td><td></td><td><a href="https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html">https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html</a></td></tr></tbody></table>

el tratamiento de ratones con sca1 hidrosolubles compuestos para no específicamente estimular la función mitocondrial

Treating SCA1 Mice with Water-Soluble Compounds to Non-Specifically Boost Mitochondrial Function

La disfunción mitocondrial desempeña un papel significativo en el proceso de envejecimiento y en las enfermedades neurodegenerativas incluyendo varios degeneración espinocerebelosa hereditarios y otros trastornos del movimiento marcados por la degeneración progresiva del cerebelo. El objetivo de este protocolo es evaluar la disfunción mitocondrial en la ataxia espinocerebelosa tipo 1 (SCA1) y evaluar la eficacia de la orientación farmacológica de la respiración metabólica a través del ácido succínico compuesto soluble en agua para retardar la progresión de la enfermedad. Este enfoque es aplicable a otras enfermedades cerebelares y se puede adaptar a una serie de terapias solubles en agua. Análisis ex vivo de la respiración mitocondrial se utiliza para detectar y cuantificar los cambios relacionados con la enfermedad en la función mitocondrial. Con la evidencia genética (datos no publicados) y la evidencia de proteómica de la disfunción mitocondrial en el modelo de ratón de SCA1, evaluamos la eficacia del tratamiento con la dosis de refuerzo metabólico s soluble en aguaácido uccinic disolviendo este compuesto directamente en el agua potable jaula. La capacidad del fármaco para pasar la barrera hematoencefálica puede deducirse usando la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). La eficacia de estos compuestos puede ensayarse utilizando varios paradigmas de comportamiento entre ellos el rotarod de aceleración, prueba de barra de equilibrio y análisis de la huella. integridad cytoarchitectural del cerebelo se puede evaluar usando ensayos de inmunofluorescencia que detectan núcleos de las células de Purkinje y las dendritas de células de Purkinje y soma. Estos métodos son técnicas robustas para la determinación de la disfunción mitocondrial y la eficacia del tratamiento con los compuestos solubles en agua en la enfermedad neurodegenerativa cerebelosa.

A través de la orientación farmacológica de las mitocondrias cerebelosa con ácido succínico somos capaces de prevenir la disfunción mitocondrial en un modelo de ratón de la enfermedad neurodegenerativa SCA1 cerebelosa. El donador de electrones canónica de la succinato deshidrogenasa, ácido succínico, se disolvió en jaula de agua potable de los ratones con SCA1 durante un mes, con el comienzo evaluación de comportamiento durante la segunda semana de tratamiento y evaluación neuropatológic...

Presentamos un protocolo bioquímico y conductual para evaluar la eficacia de los compuestos solubles en agua dirigidos a las mitocondrias para el tratamiento de la ataxia espinocerebelosa tipo 1 (SCA1) y otras enfermedades neurodegenerativas cerebelosas.

El tratamiento de ratones con SCA1 hidrosolubles compuestos para no específicamente estimular la función mitocondrial

Mitochondrial dysfunction plays a significant role in the aging process and in neurodegenerative diseases including several hereditary spinocerebellar ...

El objetivo general de este experimento es observar y cuantificar los efectos terapéuticos de los activadores mitocondriales solubles en agua sobre el comportamiento y el tejido cerebeloso en ratones con ataxia cerebelosa espinal tipo uno. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos de la ataxia cerebelosa espinal, como si los déficits mitocondriales contribuyen a la patología de la enfermedad y si la enfermedad podría ser impedida por un activador mitocondrial soluble en agua. La principal ventaja de esta técnica es que el ácido succínico es un compuesto soluble en agua barato aprobado por la FDA que puede administrarse directamente en el cerebro a través del agua potable.Las implicaciones de esta técnica pueden extenderse a una terapia de otras enfermedades neurodegenerativas, ya que se encuentran déficits en los complejos de fosforilación oxidativa mitocondrial en múltiples enfermedades neurodegenerativas, incluidas el Alzheimer y la enfermedad de Huntington. Por lo general, los individuos nuevos en este método lucharán con la configuración inicial de los paradigmas de comportamiento, que pueden tener que ser ajustados para lograr resultados consistentes.

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La disfunción mitocondrial es una característica de la senescencia celular. En este trabajo se utiliza el tratamiento no invasivo de infrarrojo cercano (NIR) para mejorar la función mitocondrial en el ratón epitelio sensorial vestibular envejecimiento.

Infrarrojo Cercano (NIR) Luz aumenta la expresión de un marcador de la función mitocondrial en el ratón vestibular sensorial Epitelio

Se describe un protocolo para la detección in vivo de los efectos de los inhibidores mitocondriales en el organismo modelo Caenorhabditis elegans y para la identificación de compuestos potenciadores potenciales. Este protocolo se puede utilizar para analizar las bibliotecas de fármacos en busca de compuestos que modulen la función mitocondrial.

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Uso de la administración de fármacos guiada por micropipetas como método alternativo a la sonda nasogástrica oral en modelos de roedores

Los organoides cerebrales sirven como un modelo valioso para los estudios de encefalomiopatía mitocondrial, acidosis láctica y episodios similares a accidentes cerebrovasculares (MELAS), ofreciendo información sobre su fisiopatología subyacente y proporcionando una plataforma para la detección de fármacos. Los organoides derivados de líneas celulares con diferentes niveles de heteroplasmia de genes causantes de enfermedades exhiben diferencias fenotípicas significativas.

Modelado de enfermedades mitocondriales utilizando organoides cerebrales: un enfoque en la encefalomiopatía mitocondrial, la acidosis láctica y los episodios similares a accidentes cerebrovasculares

Inyecciones locales de un marcador mitocondrial con marcador mitocondrial terminal de células de Schwann en vivo para microscopía confocal. Este método utiliza pruebas de concepto demostradas en tejido muscular esquelético de ratones con músculo sano o enfermo para proporcionar una visualización mitocondrial de alta resolución.

Métodos para la cuantificación in situ de la morfología mitocondrial en células musculares y terminales de Schwann de ratones

Un procedimiento no invasivo para evaluar la función endotelial se demuestra con el 2000 Endo-PAT.

Valoración de la función endotelial vasodilatador con el 2000 Endo-PAT

Aprende a evaluar compuestos hidrosolubles mitocondriales para tratar la ataxia espinocerebelosa tipo 1 en ratones. Este método permite cuantificar efectos terapéuticos en comportamiento cerebelar y tejido.

El tratamiento de ratones con SCA1 hidrosolubles compuestos para no específicamente estimular la función mitocondrial

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