Evaluación transcutánea de la función renal en roedores Conscious

El objetivo general de este procedimiento es medir la función renal por vía transcutánea sin necesidad de muestras de sangre ni análisis experimentales adicionales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la nefrología, como por ejemplo, cuál es el impacto de dar daño renal o intervenciones terapéuticas específicas sobre la función renal. Las principales ventajas de esta técnica son que es mínimamente invasiva y que los resultados están listos para ser analizados inmediatamente después de la medición sin manipulaciones experimentales posteriores.

Esta técnica se puede utilizar para estudiar prácticamente cualquier afección renal en varias especies diferentes. Además, es útil para realizar mediciones secuenciales dentro de un animal. Antes de comenzar el procedimiento, confirme el nivel adecuado de anestesia con un pellizco en los dedos de los pies.

Y use una afeitadora eléctrica para quitar un área de pelaje de tres por seis centímetros de la parte posterior inferior del abdomen del animal. Retira el pelaje restante con crema depilatoria. Después de dos o tres minutos, lave bien la piel desnuda, ya que la crema puede emitir algo de fluorescencia de fondo.

A continuación, coloque el dispositivo óptico para medir la función renal en un lado de un parche adhesivo de doble cara. Colocando la parte óptica por encima de la ventana transparente y dejando el lado opuesto cubierto con una lámina protectora. A continuación, coloque un trozo de parche adhesivo de doble cara del mismo tamaño en la batería.

Antes de fijar el dispositivo, pese al animal. Luego, corte un trozo de venda de gasa elástica tubular aproximadamente un centímetro más largo que el ancho del parche adhesivo de doble cara. Y tire de la venda sobre la cabeza del animal.

A continuación, coloque al animal en posición supina, dejando al descubierto la zona afeitada. Y conecte el conector de la batería en el puerto correspondiente del dispositivo. Si la batería se ha conectado correctamente, el dispositivo comenzará a parpadear.

Retire la lámina protectora del otro lado del parche conectado a la batería. Y monte la batería en la superficie superior del dispositivo. Ahora, retire la cubierta protectora del parche del dispositivo operativo y, sujetando los bordes hasta que quede correctamente fijada, coloque el parche en el área afeitada en el lomo del animal.

Cubra el dispositivo con el vendaje de gasa elástica tubular, teniendo cuidado de estirar completamente el vendaje sobre el abdomen mientras se asegura de que las extremidades puedan moverse libremente. Una buena fijación es crucial para evitar artefactos de movimiento durante la medición, así que asegúrese de que el dispositivo esté conectado correctamente antes de que comience la medición. Cuando el vendaje esté en su lugar, aplique una tira de cinta adhesiva del mismo tamaño sobre el dispositivo para que cubra los cables de la batería.

Y mida la lectura de fondo durante uno a tres minutos sin ejercer presión sobre el dispositivo. Para administrar la FITC-sinistrina, después de calentar la cola del animal para dilatar las venas de la cola, inyecte por vía intravenosa el volumen adecuado de solución madre de FITC-sinistrina. A continuación, coloque con cuidado al animal solo en su jaula doméstica sin agua ni tapa de alambre.

Teniendo cuidado de no introducir artefactos de movimiento. A continuación, registre la fluorescencia emitida por la FITC-sinistrina con el dispositivo óptico durante el período de tiempo experimental adecuado. Al final del período de grabación, retire con cuidado la cinta adhesiva seguida del vendaje tubular.

A continuación, separe suavemente el parche adhesivo de doble cara de la piel. Y regrese al animal a su jaula de origen normal. Para leer los datos, desconecte la batería del dispositivo y retire el parche adhesivo.

A continuación, utilice un cable micro USB para conectar la grabadora óptica a un ordenador y descargar los datos con el software adecuado. Por último, utilice el software adecuado para generar la curva cinética de eliminación de acuerdo con los protocolos del software. Y abra el archivo CSV de puntos que contiene los datos.

Cuando la función renal se ve afectada, la vida media de FITC-sinistrina aumenta. Debido a la reducción de la excreción de la sustancia y a los cambios en la apariencia de la curva. Normalmente, la curva medida no vuelve al nivel de fondo y se observa un aumento del área bajo la curva.

En el mismo animal, las mediciones pre y post lesión demuestran un aumento en la intensidad máxima de fluorescencia debido a una acumulación del marcador causada por su excreción reducida. Por ejemplo, en presencia de insuficiencia renal, la curva FITC-sinistrin medida transcutáneamente exhibe un estado estacionario debido a la función gravemente deteriorada del tejido renal. Además, el dispositivo miniaturizado se ha utilizado para medir con éxito la función renal en varias cepas de roedores con una variedad de estados de salud diferentes.

Subrayando la idoneidad y sensibilidad del dispositivo para detectar cambios debidos a la enfermedad renal y al envejecimiento. Una vez dominado, el experimento se puede configurar completamente en 50 minutos con al menos cuatro animales por hora que pueden ser evaluados por un solo experimentador. Al intentar este procedimiento, es importante recordar proteger el dispositivo electrónico eliminando el suministro de agua y cualquier estructura que sobresalga durante el período de medición.