Retroductal submandibular Glándula instilación y con localización fraccionado irradiación en un modelo de rata de hipofunción salival

La hipofunción de las glándulas salivales, un efecto adverso importante de la radioterapia de cabeza y cuello, disminuye la calidad de vida del paciente. La demostración de la eficacia de nuevas terapias en modelos animales es un requisito previo antes de la transición clínica. Este protocolo describe la administración retroductal y la irradiación local de las glándulas submandibulares de rata.

El objetivo general de este procedimiento es administrar terapéuticamente retroductivamente a las glándulas submandibulares para evaluar su eficacia en la lucha contra la disfunción salival. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de los trastornos de las glándulas salivales, como qué terapias pueden proteger o restaurar la función de las glándulas salivales contra la radiación. La principal ventaja de esta técnica es que las glándulas salivales se pueden tratar localmente, lo que reduce el riesgo de efectos secundarios en el tejido no objetivo.

Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque las aberturas del conducto no son visibles y la cánula debe manipularse a ciegas en el conducto. Antes de comenzar el procedimiento, corte un tubo de polietileno PE 10 de diez centímetros de largo con un bisturí, luego agarre ambos extremos del tubo entre el dedo índice y el pulgar de cada mano y caliente la sección central del tubo por encima de una llama suave, tirando cuidadosamente de ambos lados para estirar el tubo ablandado hasta duplicar su longitud. A continuación, utilice un bisturí para cortar el tubo por la mitad en un ángulo de 45 grados para obtener dos cánulos con un extremo cónico cada uno.

Estire el extremo no cónico de uno de los cánulos sobre la aguja de calibre 29 de la jeringa de insulina de 0,5 cc. A continuación, retire la cánula y extraiga 220 microlitros de solución salina en la jeringa. Golpee el eje de la jeringa para desalojar las burbujas de aire y vuelva a colocar la cánula sobre la aguja.

Presione el émbolo para expulsar el aire de la cánula y asegurar un flujo libre de solución a través del tubo y ajuste el volumen de solución salina en la jeringa a 200 microlitros. Ahora confirme el nivel adecuado de sedación de la rata mediante un pellizco en los dedos de los pies y un reflejo palpable y aplique lubricante ocular sobre las córneas expuestas. Coloque el amimal en una plataforma de sujeción especialmente diseñada y enganche los dientes incisivos superiores en la barra transversal.

Enrolla una banda elástica alrededor de los incisivos inferiores para tirar de la mandíbula hacia abajo. Anclécelo a la plataforma. A continuación, pase una sutura estéril a través de la lengua y levántela para elevar el suelo de la boca.

A continuación, utilice un hemostático para sujetar las suturas y pase el hemostático por encima de la barra transversal. A continuación, utilice un separador de mejillas hecho a medida para expandir las mejillas y un microscopio de disección para localizar las papilas sublinguales en el suelo de la boca. Con unas pinzas delicadas, agarre el extremo cónico del tubo de PE 10 preformado y manipule suavemente la punta de la cánula en el orificio ductal de la papila sublingual.

A continuación, introduzca la cánula de tres a cinco milímetros en el conducto, asegurándose de que la cánula pase a través del conducto sin obstrucciones. Antes de instilar la solución salina, inyecte atrofina por vía subcutánea en el pescuezo del animal. Diez minutos después de la inyección, asegure la cánula al orificio del conducto con una gota de cianoacrilato.

Después de que el pegamento se haya secado, presione lentamente el émbolo de la jeringa a 50 microlitros por minuto hasta que se hayan instilado 200 microlitros de la solución salina en la glándula. Si encuentra presión en la espalda durante la instilación, deténgase y luego retire el tubo, luego recanule con una cánula nueva. A continuación, sujete el tubo con un hemostático y retire con cuidado la jeringa.

Deje el tubo en el conducto durante 30 a 60 minutos hasta que el animal recupere la conciencia. A continuación, retire la sutura que sujeta la lengua y transfiera al animal a una jaula separada bajo una lámpara de calor hasta que se recupere por completo. Aplicar localmente irradiación fraccionada a la glándula submandibular.

Columnata una hendidura de tres centímetros de campo de radiación que abarca el área desde el borde inferior del manible hasta la parte superior del esternón de la rata anestesiada en posición supina. Después de colocar un bolo equivilante de tejido de un centímetro sobre la región. Ajuste la distancia entre la fuente de radiación y la parte superior del bolo a 100 centímetros utilizando un haz de fotones de seis megavoltios en el acelerador lineal.

Irradie al animal con 2,5 grays durante el tiempo de exposición adecuado. Al final del período de exposición a la radiación, calienta al animal durante su recuperación, como se acaba de demostrar. Durante los experimentos iniciales, se confirmó la correcta colocación de la cánula mediante la infusión de la glándula con hematoxilina o una solución azul tryplan y la evaluación de la tinción de la glándula en animales sacrificados.

Las glándulas submandibulares se estudiaron porque pueden ser irradiadas selectivamente con radiación columnada al cuello, evitando efectos orales graves que pueden afectar la salud de los animales y el resultado experimental. El análisis de los efectos de este esquema de radiación fraccionada sobre el flujo salival a las ocho semanas después de la radiación demuestra que la exposición diaria a incrementos de 2,5 grises reduce precipitadamente el flujo salival. Dentro de una reducción de 10 veces en la producción de saliva en los animales irradiados en comparación con los animales no irradiados.

Una vez dominada, esta técnica se puede completar en pocos minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe asegurarse del paso sin restricciones de la cánula al conducto excratorio de la glándula salival. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de los trastornos de las glándulas salivales exploraran tratamientos para la radiación y las afecciones autoinmunes de las glándulas salivales.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar la instalación retroductal en la glándula submandibular de la rata y cómo irradiar localmente las glándulas para evaluar la eficacia terapéutica de la mejora de la toxicidad de la radiación. No olvide que trabajar con terapias génicas y proteicas puede ser extremadamente peligroso y las precauciones como evitar los pinchazos con agujas y minimizar la exposición de la piel a agentes biológicos siempre deben tomarse mientras se realiza este procedimiento.