Name: Asistida por láser microdisección (LAM) como herramienta para la transcripción de perfiles de distintos tipos de células (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: Aprende microdisección asistida por láser para aislar células germinales femeninas de Boechera y obtener ARN de alta integridad. Este método permite analizar perfiles transcripcionales específicos de tipos celulares raros en plantas.

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Agradecemos a Timothy F. Sharbel (IPK Gatersleben) por proporcionar semillas de Boechera divaricarpa y a Sharon Kessler (Universidad de Oklahoma) por la lectura crítica y la corrección. El trabajo en el análisis de transcriptomas específicos de tipo celular para estudiar el desarrollo de gametofitos y apomixis en el laboratorio de UG cuenta con el apoyo de la Universidad de Zúrich, una beca de la "Deutsche Forschungsgemeinschaft" y el proyecto Marie Curie IDEAGENA a AS, subvenciones de la "Staatssekretariat für Bildung und Forschung" en el marco de la acción COST FA0903 (a UG y AS) y la Fundación Nacional Suiza (a UG).

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<li>Corral, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+apomixis-specific+polymorphism+is+correlated+with+exclusive+exonuclease+expression+in+premeiotic+ovules+of+apomictic+boechera+species%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">A conserved apomixis-specific polymorphism is correlated with exclusive exonuclease expression in premeiotic ovules of apomictic boechera species.</a> Plant Physiol. 163 (4), 1660-1672 (2013).</li>
<li>Deeken, R., Ache, P., Kajahn, I., Klinkenberg, J., Bringmann, G., Hedrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Arabidopsis+thaliana.+phloem+RNAs+provides+a+search+criterion+for+phloem-based+transcripts+hidden+in+complex+datasets+of+microarray+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Identification of Arabidopsis thaliana. phloem RNAs provides a search criterion for phloem-based transcripts hidden in complex datasets of microarray experiments.</a> Plant J. 55, 746-775 (2008).</li>
<li>Schmid, M. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Genome+Scale+Quantitative+Biology+in+Arabidopsis+thaliana%22">Genome Scale Quantitative Biology in Arabidopsis thaliana</a>. , University of Zürich. PhD Thesis 40-104 (2015).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El Protocolo es adecuado para diferentes tipos de células y de tejidos LAM combinado con análisis del transcriptoma mediante microarrays o ARN-Sec es una valiosa herramienta para obtener información sobre los patrones específicos de actividad de los genes que regulan los procesos de desarrollo o fisiológicas 7-11,13,14. Sin embargo, la idoneidad de este método para cualquier tipo de célula dada depende críticamente de las cuestiones estructurales. La célula tiene ...

En transcripcional estudios realizados a nivel tisular, la transcriptomes de tipos de células altamente especializadas, pero raras son a menudo enmascarados por las células circundantes más abundantes. Un ejemplo de tales tipos de células altamente especializadas son las células del linaje reproductivo femenino (línea germinal) en las plantas. La línea germinal femenina se especifica dentro de óvulos en desarrollo, los precursores de las semillas en el interior del gineceo del 1,2 flor. La célula madre megaspora (MMC) es la primera célula de la línea germinal femenina. Se somete a la meiosis para formar una tétrada de megaesporas reducidos. Típicamente, sólo uno de estos megasporas sobrevive y divide mitóticamente sin citocinesis, es decir, en un sincitio. Estos son seguidos por mitosis cellularization para formar el gametofito maduro, que normalmente consiste en cuatro tipos de células: tres antípodas, dos células synergid, el huevo, y la célula central. Los óvulos y centrales son los gametos femeninos que consiguen fertilizados por dos espermatozoides durante Doula fertilización ble para dar lugar al embrión y el endospermo de la semilla en desarrollo 1,2. En el sistema modelo Arabidopsis thaliana sexual, sólo ~ 50 semillas se desarrollan por flor, mientras que alrededor de 50 - 80 semillas por flor se desarrollan en el género estrechamente relacionado Boechera. Por lo tanto, la línea germinal femenina consta de sólo unos pocos tipos de células altamente especializadas, por lo que es un excelente modelo para estudiar los procesos de desarrollo, tales como la especificación y diferenciación celular. Por otra parte, una visión de los procesos de regulación de genes que regulan la reproducción de plantas pueden ser de valor aplicada. En las plantas, puede ocurrir tanto en la reproducción sexual y asexual a través de semillas (apomixis). Mientras que la reproducción sexual genera diversidad genética en una población, la apomixis conduce a la formación de la progenie clonal que es genéticamente idéntico a la planta madre. Por lo tanto, la apomixis tiene un gran potencial para aplicaciones en la agricultura y la producción de semillas, como los genotipos maternos incluso complejos puedenmantenerse inalterada durante varias generaciones 3,4,5. Debido a que la apomixis no se produce de forma natural en cualquier especie vegetal importante, la ingeniería de la apomixis en los cultivos es de gran interés 3,4,5. Sin embargo, este objetivo a largo plazo es difícil de lograr debido a que la base genética y molecular subyacente de la apomixis no se entiende con el suficiente detalle 6. Para hacerse una idea de la base de la transcripción que regulan la reproducción apomictic, específica del tipo celular transcripcional de perfiles mediante microdisección asistida por láser (LAM) y la secuenciación de próxima generación (NGS) representa un enfoque muy potente 7,8. LAM primera se ha establecido para los animales y la investigación biomédica. En los últimos años LAM también se ha aplicado a la biología vegetal 6,9,10. En contraste con otros métodos que permiten perfiles de tipos de células y tejidos individuales, LAM no requiere la generación de líneas de marcador 6,9,10. Por lo tanto, puede ser la aplicaciónmentido a cualquier tipo de célula o tejido sin conocimiento previo molecular. Otra ventaja de LAM es que se puede aplicar a cualquier tipo de célula, siempre que la célula se puede reconocer en las secciones secas basada en la posición y / o características estructurales. LAM tiene la ventaja adicional de que se utilizan tejidos fijados, lo que impide cambios del perfil transcripcional durante el procesamiento. El tejido de interés, por ejemplo, tejido floral, se fija en un fijador no reticulante antes de la incrustación en cera de parafina. Incrustación en cera de parafina se puede hacer manualmente, siguiendo los protocolos establecidos 9,11. Sin embargo, el uso de un procesador de tejido automatizado para la deshidratación y la infiltración con la cera generalmente da como resultado una mayor reproducibilidad en términos de la conservación de la calidad del ARN y la morfología del tejido. La estrategia alternativa de la incrustación de tejidos en resina también se ha utilizado con éxito para el análisis de tipos específicos de células por LAM 8. Sin embargo, el uso de un automprocesador de tejidos ado para incrustar en cera es muy eficiente en el tiempo, ya que muchas muestras se pueden procesar a la vez que requiere un mínimo de manos a tiempo. Aunque normalmente no hay pérdida significativa de la calidad del ARN se produce durante la fijación y la incrustación, la preparación de secciones delgadas con el microtomo y, en particular, el montaje en los frameslides utilizados para LAM sigue siendo un paso crítico para la conservación de la calidad del ARN. Esta ha sido previamente señalado y el uso de un sistema de transferencia de la cinta se ha descrito para dar lugar a una mejor calidad de RNA en este paso 12. Sin embargo, esto añade una etapa que consume tiempo adicional durante la preparación de los portaobjetos y también requiere un equipo especial. El protocolo optimizado se describe a continuación de forma reproducible produce ARN que es de calidad suficiente para el perfil transcripcional con GeneChips y Next Generation Sequencing (NGS) se acerca 7,11,13,14. Además, con el microscopio de microdisección láser utilizado, una alta pureza de los tipos de células aisladas es goleadainely produjo 7,11,13,14. El género Boechera es un excelente sistema modelo para el estudio de los pasos clave de la reproducción apomictic. En Boechera, una variedad de diferentes adhesiones sexuales y apomícticas han sido identificados y se puede utilizar para los análisis comparativos 15,16,17. En una comparación de transcriptomes tipo de células específicas de las células de la línea germinal femenina de Arabidopsis sexual y apomictic Boechera, hemos identificado los genes y las vías que son expresados ​​diferencialmente, identificando de este modo nuevos aspectos de los procesos de regulación que rige la apomixis 7. Además, este estudio verificó la idoneidad de LAM para la célula de la transcripción de tipo análisis específicos de tipos de células pequeñas y raras. Ya hemos utilizado este protocolo para el análisis de los diferentes tipos de células en una variedad de especies de plantas, pero en las especies y las modificaciones específicas de tejido en el protocolo pueden ser necesarios en algunos casos.

<table><tbody><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>1.009.861.000</td><td>absoluto EMPROVE Ph Eur,BP,USP</td></tr><tr><td>15 ml tubos de centrífuga falcon</td><td>VWR</td><td>62406-200</td><td></td></tr><tr><td>2100 Bioanalizador</td><td>Agilent</td><td>G2939AA</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Applichem</td><td>A3686,2500</td><td>100% Grado de biología molecular</td></tr><tr><td>Ambion Tecnologías de vida de agua libre de nucleasa</td><td></td><td>AM9932</td><td></td></tr><tr>Procesador de tejidos <td>ASP200 S</td><td>Leica</td><td>14048043624</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>el cartón</td><td></td><td></td> negro <td>se puede comprar en papelerías especiales</td></tr><tr><td>Portaobjetos de marco sin ADN y ARNasa</td><td>Micro Dissect GmbH</td><td></td><td>1, 4 y micro; m Membrana PET; también se puede comprar en Leica</td></tr><tr><td>Dumond Forceps</td><td>Actimed</td><td>0208-5SPSF-PS</td><td></td></tr>, <tr><td>lámpara</td><td></td><td></td><td></td>de etanol</tr><tr><td>exsiccator</td><td>, Sigma-Aldrich</td><td>Z354074-1EA,</td><td>Nalgene Vaccuum Dessicator o equipos similares</td></tr><tr><td>, puntas de filtro 10&nbsp; y micro; l</td><td>Axon Lab AG</td><td>AL60010</td><td>puede ser reemplazado por puntas de filtro similares</td></tr><tr><td>1,000&nbsp; y micro; l</td><td>Axon Lab AG</td><td>AL60010</td><td>puede ser reemplazado por puntas de</td></tr><tr><td>filtro similares 20&nbsp; y micro; l</td><td>Axon Lab AG</td><td>AL60020</td><td>puede ser reemplazado por puntas de filtro similares</td></tr><tr><td>200&nbsp; y micro; l</td><td>Axon Lab AG</td><td>AL60200</td><td>puede ser reemplazado por puntas similares</td></tr><tr><td>pinzas de precisión</td><td>VWE</td><td>232-1221</td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos</td><td>de vidrio Huber & Co.AG</td><td>10.0540.01</td><td>F&auml; rbek&auml; sten nach Hellendahl</td></tr><tr><td>vidriera a través de</td><td>Huber & Co.AG</td><td>10.0570.01</td><td>F&auml; rbekasten</td></tr><tr><td>Módulo de incrustación de parafina calentada Leica Leica</td><td>Leica</td><td>EG 1150</td><td>H estación de bloqueo, dispositivos similares son adecuados</td></tr><tr><td>Mesa de calentamiento y secado</td><td>Medax</td><td>15501</td><td>otros modelos y/o proveedores son adecuados</td></tr><tr><td>cubitera</td><td>cubo de hielo VWR con tapa&nbsp;</td><td>10146-184</td><td>cubos similares igualmente adecuados mesa de</td></tr><tr><td>luz</td><td>UVP An Analytical Jena Company</td><td>TW-26&nbsp;</td><td>Transluminador de luz blanca</td></tr><tr><td>portaobjetos para microscopio</td><td>Thermo Scientific</td><td>10143562CE</td><td>Bordes cortados</td></tr><tr><td>cuchilla de micrótomo</td><td>Thermo Scientific</td><td>FEAHS35</td><td>S35 hoja de micrótomo desechable</td></tr><tr><td>Instrumento MMI Cell Cut Plus MMI</td><td>(Molecular Machines and Industries)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antiadherente, sin ARNasa Tubos de microfuga, 2 ml</td><td>Life Technologies</td><td>AM12475</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast X-TRA</td><td>Roth</td><td>X882.2</td><td>para histología</td></tr><tr><td>Kit de aislamiento de ARN PicoPure</td><td>tecnologías de la vida</td><td>KIT0204</td><td>Arcturus Kit de aislamiento de ARN PicoPure</td></tr><tr><td>bandejas de equilibrado de plástico</td><td>Semadeni AG</td><td>2513</td><td></td></tr><tr><td>caja de plástico</td><td>Semadeni AG</td><td>2971</td><td>Plastikdose PS</td></tr><tr><td>tapa de plástico para placa</td><td></td><td></td> calefactora <td></td></tr><tr><td>aguja de preparación</td> casera <td>VWR</td><td>631-7159</td><td></td></tr><tr><td>ARN 6000 Pico Kit</td><td>Agilent</td><td>5067-1513</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microfuga libres de ARNasa tecnologías</td> de <td>vida</td><td>AM12400</td><td></td></tr><tr><td>Solución de descontaminación de ARNasa ZAP tecnologías</td><td>de vida</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo rotativo semiautomatizado&nbsp;</td>Los dispositivos similares <td>Leica</td><td>RM2245</td><td>son igualmente adecuados</td></tr><tr><td>Tissue Loc Histo Screen Cassettes</td><td>Thermo Scientific</td><td>C-1000_AQ</td><td>casetes similares de otros proveedores son adecuados</td></tr><tr><td>Tubos con tapa adhesiva, sin difusor 500 &; l&nbsp;</td><td>MMI (Máquinas e Industrias Moleculares)</td><td>50204</td><td></td></tr><tr><td>Xilol (Isomere) ROTIPURAN</td><td>VWR</td><td>4436.2</td><td>min. 99%, p.a., ACS, ISO SP</td></tr><tr><td>proceso de incrustación de casetes</td><td>Leica 14039440000</td><td></td><td>Leica Jet Cassette I sin tapa</td></tr><tr><td>Horno universal</td><td>Memmert</td><td>UF55</td><td>otros modelos y/o proveedores son adecuados</td></tr></tbody></table>

asistida por láser microdisección (lam) como herramienta para la transcripción de perfiles de distintos tipos de células

Laser-assisted Microdissection (LAM) as a Tool for Transcriptional Profiling of Individual Cell Types

La comprensión de los procesos de desarrollo a nivel molecular requiere conocimientos sobre la regulación transcripcional y, por lo tanto, el transcriptoma, a nivel de los tipos de células individuales. Si bien los métodos descritos aquí son generalmente aplicables a una amplia gama de especies y tipos de células, nuestra investigación se centra en la reproducción de plantas. El cultivo de plantas y la producción de semillas son de crucial importancia para la nutrición humana y animal. Una comprensión detallada de las redes reguladoras que gobiernan la formación del linaje reproductivo (línea germinal) y, en última instancia, de las semillas es una condición previa para la manipulación dirigida de la reproducción de las plantas. En particular, la ingeniería de la apomixis (reproducción asexual a través de semillas) en plantas de cultivo promete grandes mejoras, ya que conduce a la formación de semillas clonales que son genéticamente idénticas a la planta madre. En consecuencia, los tipos de células de la línea germinal femenina son de gran importancia para la comprensión y la ingeniería de la apomixis. Sin embargo, como las células correspondientes están profundamente incrustadas dentro de los tejidos florales, es muy difícil acceder a ellas para los análisis experimentales, incluida la transcriptómica específica del tipo de célula. Para superar esta limitación, se pueden aislar secciones de células individuales mediante microdisección asistida por láser (LAM). Si bien la LAM en combinación con el perfil transcripcional permite la identificación de genes y vías activas en cualquier tipo de célula con alta especificidad, establecer un protocolo adecuado puede ser un desafío. Específicamente, la calidad del ARN obtenido después de LAM puede verse comprometida, especialmente cuando se dirigen a células pequeñas y únicas. Para eludir este problema, hemos establecido un flujo de trabajo para LAM que da como resultado de manera reproducible una alta calidad de ARN que es muy adecuada para la transcriptómica, como se ejemplifica aquí con el aislamiento de células de la línea germinal femenina en Boechera apomíctica. En este protocolo, se describen los procedimientos para la preparación de tejidos y LAM, también en lo que respecta a la extracción de ARN y el control de calidad.

Preparación de la muestra y LAM se realizan en pasos consecutivos Es necesaria una serie de pasos consecutivos para preparar ARN para el análisis de la transcripción de determinados tipos de células por LAM (Figura 1). Esto comienza con la recolección de las flores y fijación inmediata para asegurar que la población de ARN se mantiene sin cambios después de la cosecha. El tejido está incrustad...

Aquí presentamos un protocolo para la microdisección asistida por láser de tipos específicos de células vegetales para el perfil transcripcional. Si bien el protocolo es adecuado para diferentes especies y tipos de células, la atención se centra en células altamente inaccesibles de la línea germinal femenina importantes para la reproducción sexual y apomíctica en el género de crucíferas Boechera.

Asistida por láser microdisección (LAM) como herramienta para la transcripción de perfiles de distintos tipos de células

The understanding of developmental processes at the molecular level requires insights into transcriptional regulation, and thus the transcriptome, at the ...

El objetivo general de este protocolo para LAM es aislar células vegetales específicas para la obtención de ARN de alta integridad destinado al análisis transcripcional. Se centra en células de difícil acceso, como las células ovulares, en especies sexuales y apomícticas de Boechera. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la genética del desarrollo vegetal, tales como la base transcripcional que subyace a la reproducción sexual y asexual de las plantas mediante semillas.La principal ventaja de esta técnica es que se pueden realizar ciertos estilos específicos. Superando el efecto de enmascaramiento de las transcripciones de tipos celulares raros en el análisis de tejidos de aterogénesis. Para comenzar este procedimiento, utilizando la estación de bloqueo, llene una bandeja plástica de equilibrio precalentada y nueva con parafina fundida a 56 grados Celsius.Levante la tapa del baño de parafina y tome un casete a la vez. Transfiera una muestra a la parafina líquida a 56 grados Celsius en una bandeja de equilibrio. Proceda rápidamente para evitar que la parafina se endurezca alrededor de la muestra mientras manipula el casete.A continuación, coloque la muestra según el diseño experimental utilizando una aguja de preparación. Repita el procedimiento hasta que todas las muestras hayan sido transferidas. Para preparar secciones delgadas para LAM, sobre una mesa iluminada, retire la parafina con la muestra de la bandeja de plástico.Extraiga un bloque de cera que contenga la muestra, como un botón o una flor, utilizando una cuchilla libre de RNasas. A continuación, derrita una pequeña gota de cera de parafina en la punta de una espátula. Y utilice la cera caliente para fijar el bloque con la muestra incrustada sobre el soporte.Retire la cera adicional que rodea la muestra con una hoja de bisturí y asegúrese de que el bloque tenga una superficie cuadrada con bordes paralelos. Luego, ajuste la placa calefactora a 42 grados Celsius. Monte la muestra de forma segura en el microtomo.Prepare secciones de siete micrómetros de grosor para las células del gametofito maduro de Boechera. Posteriormente, transfiera los ribones de parafina de 10 a 15 centímetros de longitud a una caja de plástico con cartón negro en la base antes de colocarlos sobre las laminillas LAM. Para preparar las laminillas para LAM, coloque de cinco a diez laminillas con marco metálico sobre la placa calefactora con las superficies planas hacia arriba.Pipetee uno a dos mililitros de agua libre de RNasa sobre la parte plástica de las laminillas. Con una hoja de bisturí, corte las cintas de parafina en trozos cortos de aproximadamente cuatro a cinco centímetros. Lo suficientemente largos como para cubrir las ventanas plásticas de las laminillas.Luego, utilice un par de pinzas y una aguja de preparación para colocar las tiras de parafina paralelas entre sí sobre la ventana de plástico de los portaobjetos. Levante cuidadosamente los portaobjetos por un extremo para eliminar el agua y colóquelos de nuevo. Cubra la placa calefactora con una tapa de plástico sin tocar los portaobjetos, y asegúrese de que la tapa de plástico permita el intercambio de aire.Deje secar las laminillas a 42 grados Celsius durante la noche. Bajo una campana química, desparafine las laminillas en xilol dos veces durante 10 minutos cada vez. Asegúrese de sumergir solo la parte de plástico de las laminillas y mantenga seco el extremo más ancho del marco metálico de cada laminilla para facilitar su retiro.Deje secar las laminillas durante 10 minutos en la campana química antes de la LAM. En este procedimiento, encienda la computadora y el microscopio para la LAM. Luego, inicie el programa que controla el microscopio y el láser.Encienda la caja de control del láser y active el láser presionando el botón correspondiente en la caja de control. A continuación, coloque un casquete en el portacasquetes. Coloque el portaobjetos LAM sobre un portaobjetos de vidrio para microscopía y asegúrese de que la superficie plana del portaobjetos con los tejidos adheridos quede mirando hacia el portaobjetos de vidrio.Luego, coloque la portaobjetos en el instrumento con la lámina de vidrio por debajo. Finalmente, coloque el portatapas con la cubierta en el instrumento. Seleccione el objetivo 4x.En el programa, mueva la tapa a la posición superior. Posteriormente, realice un escaneo del portaobjetos. Examine el portaobjetos e identifique las estructuras de interés.Localice y guarde sus posiciones en la lámina para poder regresar a la posición exacta durante el paso de corte. Luego, seleccione un objetivo adecuado. Verifique la posición del láser presionando una vez el botón de disparo del láser.Idealmente, en una parte de la membrana sin tejido. Con la tapa en posición hacia abajo, utilice la herramienta de lápiz manual para marcar los bordes del tipo celular o del tejido de interés. Por ejemplo, la célula del huevo.Diséquelo con el láser presionando Cortar. Con el fin de aislar células individuales, es fundamental identificarlas claramente en las secciones adecuadas. Además, las células deben tener un diámetro de al menos ocho micrómetros para que sea factible un análisis de transcripción específico por tipo celular.Tenga en cuenta que es necesario repetir el corte si el borde alrededor de la célula no se ha disecado por completo, lo cual generalmente puede observarse en la pantalla. En este caso, se recomienda configurar el software para que ejecute automáticamente dos repeticiones del corte como procedimiento estándar. Después de eso, levante la tapa y muévase a la siguiente posición guardada con una estructura de interés y diseque la siguiente sección celular hasta que se hayan recolectado todas las células de interés de una portaobjetos.Asegúrese de que la tapa esté colocada de manera que la nueva sección se adhiera a una posición vacía en la tapa. Después de haber aislado los tipos celulares de interés de todos los portaobjetos, retire el portaobjetos del instrumento. Coloque el soporte de la tapa en la posición inferior e inspeccione visualmente la superficie de la tapa.Y utilice el objetivo 4x para excluir contaminaciones inespecíficas de la muestra. Luego cierre la tapa y congele las secciones secas a menos 80 grados Celsius hasta su uso posterior.Aquí se muestra el dibujo esquemático del gametofito femenino maduro. Estas son secciones delgadas de óvulos que albergan gametofitos femeninos en boechera divaricarpa, en las cuales las células ovulares son claramente identificables debido a la morfología característica del gametofito femenino. Se obtuvo una calidad de ARN similar, según el análisis realizado en las secciones de células ovulares en comparación con las áreas de tejido más grandes recolectadas de las mismas láminas como controles.La calidad del ARN obtenida fue adecuada para la secuenciación de ARN específica por tipo celular, lo que permitió la identificación de 236 genes expresados en la célula ovular apomíctica, pero no en la célula central apomíctica, la célula sinérgida ni la célula inicial apomíctica, ni tampoco en las células del gametofito sexual maduro de Arabidopsis thaliana. Otros tipos celulares y de tejidos de diferentes especies pueden analizarse para responder a preguntas adicionales en genética del desarrollo.Como la base molecular de la impronta genética en el endospermo y los embriones de semillas de plantas. Tras su desarrollo, esta técnica allana el camino para que los investigadores en el campo de la genética del desarrollo y la reproducción vegetal exploren la base transcripcional de la reproducción apomíctica en el género Boechera. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo obtener ARN de alta calidad para análisis transcripcionales específicos de tipo celular utilizando microdisección asistida por láser.

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Biología

Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

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