Audacia, la agresión y ensayos para formar bancos de pez cebra de comportamiento Síndromes

El objetivo general de este protocolo es estandarizar la metodología utilizada para observar, analizar e interpretar los síndromes conductuales de audacia, agresión y cardumen en el pez cebra. Directamente, este método puede responder a preguntas de la teoría evolutiva, la estructura de poblaciones y la dinámica de poblaciones. Cuando se combina con técnicas interdisciplinarias, se puede aplicar a campos como la farmacología, la toxicología, la genética del comportamiento y la endocrinología.

La principal ventaja de esta técnica es que la combinación de audacia, agresión y cardumen abarca muchos comportamientos bien estudiados y fácilmente cuantificables en el pez cebra. Y cada ensayo puede modificarse para responder a preguntas experimentales alternativas. Comience por separar aleatoriamente el pez cebra en la proporción adecuada de peces focales y peces estímulo.

Almacene todos los peces en las rejillas de los alojamientos de los peces cebra bajo un ciclo estricto de luz / oscuridad de 12 a 12 horas. Alimente con comida en escamas a todos los peces focales y estímulos todos los días. Y solo alimente a los camarones en salmuera una vez a la semana en los días que no sean de investigación.

A continuación, instale tres tanques de ensayo en el laboratorio. Uno para la agresión, la audacia y el cardumen en lugares que minimicen la posibilidad de estímulos externos adversos. Y deje suficiente espacio para que una cámara de video capture todo el tanque.

Configure la cámara de video para que tenga suficiente claridad para ver las etiquetas del tanque, así como para distinguir los comportamientos sutiles de los peces focales. Mantenga la cámara en la misma posición con una vista completa del tanque durante todas las grabaciones de los ensayos de comportamiento, para minimizar las diferencias no deseadas en la puntuación de comportamiento como resultado de las grabaciones diferenciales. A continuación, defina un esquema de etiquetado para rastrear la fecha, el número de peces y el número de ensayo para todos los ensayos de comportamiento.

Etiquete el exterior del tanque con cinta adhesiva a la vista de la cámara. Registre esta información en un cuaderno de laboratorio para una referencia rápida y un control de calidad futuro. Por último, instale un tanque de aclimatación que se utilizará entre todos los ensayos, así como directamente después de que los individuos se retiren del bastidor de la carcasa.

Comience obteniendo un tanque rectangular de 19 litros, que mide 30 por 15 por 10 centímetros. Equipe el tanque con particiones opacas externas que rodeen tres lados del tanque de agresión, dejando la parte delantera expuesta a la vista para reducir los estímulos externos indeseables. Divida el tanque con marcas externas en cuatro cuadrantes rectangulares iguales.

Use masilla de silicona para fijar un espejo dentro del cuadrante inferior izquierdo, inclinado a 22.5 grados, formando un triángulo rectángulo contra el extremo izquierdo del tanque. Tenga agua dulce y envejecida, precalentada a 27,5 a 28,5 grados centígrados, lista para agregar al tanque de agresión para garantizar que la temperatura del agua en el tanque de aclimatación y el tanque de agresión esté dentro de los dos grados centígrados del bastidor de la carcasa. Saca un pez focal de la rejilla de la carcasa y transfiérelo a un tanque de aclimatación separado donde se aclimatará durante 10 minutos.

Confirme que la cámara de vídeo está enfocada en el tanque de ensayo de agresión y pulse grabar. Luego, transfiera inmediatamente el pez focal a través de ventosas desde el tanque de aclimatación al tanque de agresión. Graba el tanque de agresión durante 10 minutos y 30 segundos.

Luego, lleve a los peces focales del tanque de agresión al tanque de aclimatación. Al ver la grabación después de que se complete el ensayo, espere 30 segundos después de que los peces hayan sido introducidos en el tanque como un período de aclimatación adicional antes de anotar los comportamientos. Por último, puntúe un solo ensayo de agresión al menos dos veces hasta que el ensayo se puntúe con una alta concordancia entre las iteraciones.

Para configurar el ensayo de audacia, primero obtenga un pequeño tanque trapezoidal de 1,5 litros, que mide 15 centímetros de alto con una parte superior de 26,5 centímetros y una parte inferior de 22,5 centímetros, y un ancho de 6 centímetros. Envuelve papel opaco alrededor de tres lados del tanque y deja el frente expuesto para que lo veas. Coloque un solo trozo delgado de cinta adhesiva externo al tanque para demarcar la parte superior de la parte inferior del tanque.

A continuación, asegúrese de que la temperatura del agua en el tanque de audacia esté dentro de los dos grados centígrados del estante de la carcasa. Transfiera el pez focal del estante de la carcasa al tanque de aclimatación y deje que se aclimate durante 10 minutos. Asegúrese de que la cámara de video esté enfocada en el ensayo de audacia y presione grabar en el dispositivo.

Transfiera inmediatamente el pez focal del tanque de aclimatación al tanque de audacia y registre durante ocho minutos y 30 segundos. Al ver la grabación después de que se complete el ensayo, permita un período de aclimatación adicional de 30 segundos después de que el pez se introduzca en el tanque antes de calificar. Por último, puntúe un solo ensayo de audacia al menos dos veces, hasta que el ensayo se puntúe con una alta concordancia entre las iteraciones.

Para configurar el ensayo de cardúmenes, obtenga un tanque de 76 litros que tiene tres compartimentos divididos por dos divisores de vidrio sellados con masilla de silicona. Externamente, use cinta adhesiva para marcar dos zonas de preferencia que están a seis punto tres cinco centímetros de cada uno de los divisores de vidrio que designan cada zona de estímulo. Aplique particiones opacas externas alrededor de tres lados del tanque de cardumen y deje el frente expuesto para su visualización.

A continuación, seleccione los cardúmenes de estímulo para aclimatarse durante al menos 12 horas antes de la prueba y hágales permanecer en el tanque de cardúmenes durante todo el transcurso del experimento. Transfiera el pez focal del estante de la carcasa a un tanque de aclimatación separado a través de ventosas donde se aclimatará durante 10 minutos. A continuación, transfiera, mediante ventosas, los peces focales del tanque de aclimatación al compartimento central del tanque de cardúmenes.

Permita un período de aclimatación de 10 minutos antes de un período de observación de puntuación en vivo de 10 minutos, en el que los peces de cardumen se definen como aquellos que se encuentran dentro de la zona de preferencia en la cámara que alberga el banco de arena objetivo. A continuación, cuantifique el tiempo empleado en cada zona de preferencia, así como el tiempo empleado en el volumen central. Finalmente, una vez completados los ensayos, transfiera los peces a un tanque terminal separado que servirá como tanque de destino final para todos los individuos focales utilizados.

Este protocolo analizó las asociaciones consistentes en los comportamientos de agresión, audacia y cardumen del pez cebra para determinar si había un síndrome conductual. Aquí, el componente uno representa los comportamientos de agresión, mientras que el componente dos se asocia con los comportamientos de audacia. Dado que las conductas de agresión y audacia no están representadas por el mismo componente, se puede concluir que hay una ausencia de síndrome conductual de agresión y audacia en el pez cebra.

Una vez dominado, todo el protocolo de un pez focal se puede hacer en 70 minutos. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe familiarizarse y familiarizarse con cada comportamiento objetivo para minimizar el sesgo del observador. Puntuar la misma grabación de video varias veces también aumentará la confianza en sus resultados.

Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos en el campo farmacológico, genético o fisiológico con el fin de responder preguntas adicionales sobre qué factores internos y externos afectan a los síndromes conductuales. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo observar, analizar e interpretar los síndromes conductuales de audacia, agresión y cardúmenes en el pez cebra. ¡Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos!