Name: Audacia, la agresión y ensayos para formar bancos de pez cebra de comportamiento Síndromes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Aprende a estandarizar ensayos de audacia, agresión y formación de bancos en Danio rerio para estudiar síndromes conductuales. Esta metodología facilita comparaciones entre estudios de neurociencia y ecología.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por una beca educativa del Instituto Médico Howard Hughes y una subvención interna del capítulo de Sigma Xi de la Universidad de San José. También nos gustaría agradecer a los tres revisores anónimos que ayudaron a fortalecer el protocolo y las interpretaciones.

Las siguientes metodologías para la vivienda, la atención, y el estudio de pez cebra han sido aprobados por la Universidad CICUAL de San José. 1. El pez cebra vivienda, la asistencia <ol><li> Obtener el pez cebra objeto de un proveedor local, o de poblaciones silvestres capturados. Tenga en cuenta que el pez cebra vivienda está sujeta a las directrices del IACUC y permisos adicionales son necesarios para las poblaciones silvestres capturados vivienda. </li><li> Identificar y pez cebra por separado en función del sexo. Alternativamente, omita este paso o reemplazar con un método diferente de la separación basada en la hipótesis de estudio. NOTA: Las características sexuales son difíciles de determinar en el pez cebra, sobre todo en las mujeres. Consulte estas directrices 10 o manuales en línea útiles para distinguir el sexo. </li><li> Aleatoriamente separar las poblaciones más lejos en la proporción adecuada de peces focal a los estímulos de pescado. Nota: los peces focal son los sujetos de prueba siguieron a través de la serie de behavioLos ensayos ral, y peces de estímulo son las personas que van a ocupar las cámaras de estímulo en los ensayos de la agresión y los cardúmenes. NOTA: Tradicionalmente, entre el 1 y el 5 de estímulo peces por peces focal en ensayos shoaling y una mezcla 1: 1 de estímulo: se usa una relación focal de pescado en los ensayos de agresión 14,17. Sin embargo, el investigador necesita diseñar específicamente el estudio con la hipótesis en mente (es decir, debe estímulo pescado se mantiene constante para mantener la consistencia en el comportamiento de los peces focal, o debería estímulo puede girar peces entre cada ensayo para asegurar la aleatorización adecuada). </li><li> Almacenar todos los peces en bastidores de vivienda de pez cebra (27,5-28,5 ° C) bajo una estricta 12:12 ciclo luz / oscuridad. Alimentar a todos los alimentos focal y estímulo peces de escamas diario y semanal artemia, en días no investigación. </li><li> Asegúrese de que todas las pruebas se realiza entre ZT1 y ZT5 (tiempo zeitgeber) para evitar los efectos del ritmo circadiano 26. </li></ol> 2. La asignación al azar y del tanque de instalación <ol><li> Real academia de bellas artesndomize todas las personas a priori a una secuencia específica de ensayos de comportamiento. Establecer un sistema de aleatorización coherente utilizando un generador de secuencia aleatoria línea 27 o un generador de secuencias al azar de un paquete de software estadístico (R). <ol><li> Etiqueta de cada ensayo de 1 a 3 y mantener esta asignación consistente. Asignar una secuencia aleatoria de cada individuo y un mapa de la secuencia de acuerdo con la etiqueta de ensayo de conducta. Por ejemplo, para los tres ensayos totales (1 asignadas a Shoaling, 2 asignada a la audacia, y 3) asignados a la agresión, un individuo dado puede tener una secuencia aleatoria de &#39;2,3,1&#39;, lo que les obligará a realizar la específica ensayos de comportamiento en la secuencia especificada. </li></ol></li><li> Configurar los tanques de ensayo (audacia, la agresión y shoaling) en el laboratorio en lugares que reduzcan al mínimo la posibilidad de que los estímulos externos adversos y asegúrese de tener suficiente espacio para una cámara de vídeo para capturar todo el tanque. Asegúrese de que la videocámara ha enough claridad para ver etiquetas en los tanques, así como ser capaz de distinguir los comportamientos sutiles de los peces focal y la configuración de la videocámara en esta posición. </li><li> Registrar todos los ensayos de comportamiento con la cámara se mantiene en la misma posición con una vista completa del depósito especificada para minimizar las diferencias no intencionadas en la puntuación de comportamiento como resultado de las grabaciones diferenciales. NOTA: Evite colocar los tanques en zonas de tráfico pesado y por puertas como el movimiento y el sonido afectará el comportamiento del pez cebra. </li><li> Establecer protocolos únicos JWatcher 24 al eliminar cada ensayo conductual. Consulte el manual de JWatcher para aprender cómo crear archivos maestros focales para asignar comportamientos a las pulsaciones del teclado y los ficheros de análisis focales para resumir los datos recogidos. NOTA: JWatcher es un software que permite scoring de comportamiento para la puntuación del comportamiento fiable y repetible personalizado 24. </li><li> Definir un sistema de etiquetado para realizar un seguimiento de la fecha, el número de peces, y el número de ensayo para todos los ensayos de comportamiento (por ejemplo,Fish 5, ensayo Audacia, &#39;F5-B-123115 &quot;, sugiriendo que en el 31 de Diciembre de 2015) y la etiqueta de la parte exterior del tanque con cinta adhesiva a la vista y en el enfoque de la cámara. Mantener y registrar esta información en un cuaderno de laboratorio para una referencia rápida y el control de calidad futura. </li><li> Establecer un tanque de aclimatación que se utilizará entre todos los ensayos, así como directamente después de que los individuos se quitan del bastidor de la vivienda. NOTA: Los tanques de aclimatación y tanques terminales son pequeños acuarios (40 cm x 20 cm x 25 cm) con grava y un filtro que se parecen mucho a la rejilla de la vivienda. </li><li> Después de los ensayos se encuentren todos completos, transferir al individuo en un tanque de terminal separada, que servirá como el tanque de destino final para todos los individuos focales utilizados. Utilice un tanque que es lo suficientemente grande para alojar un grupo de individuos para el resto de su vida (por ejemplo, 25 galones). NOTA: Es muy importante para mantener la temperatura y las condiciones del agua consistentes y similares Across todos los tanques. Esto incluye la vivienda, la aclimatación, y todos los tanques de prueba. </li></ol> 3. Llevar a cabo el ensayo de Agresión <ol><li> Llevar a cabo el ensayo de la agresión en un tanque rectangular 19 L medir 30 cm x 15 cm x 10 cm. Equipar el tanque en particiones opacas externo que rodea tres lados del tanque agresión, dejando la parte delantera expuesta para la visión, para reducir los estímulos externos indeseables. Se divide el tanque con marcas externas en cuatro cuadrantes rectangulares iguales y fijar un espejo de forma permanente (con masilla de silicona) en el cuadrante inferior izquierdo, inclinada a 22,5 ° formando un triángulo rectángulo contra el extremo izquierdo de la cisterna. </li><li> Asegúrese de que la temperatura del agua en el tanque de depósito de aclimatación y la agresión está dentro de 2 ° C de la cremallera de la vivienda. Para ello, se han pre-calentado, agua fresca edad de 27,5 a 28,5 ° C listo para añadir al tanque de agresión. Tenga en cuenta que es importante cambiar el agua entre cada ensayo para eliminar injustificadaseñales olfativas. </li><li> Transferencia, ahuecando, un pez focal del bastidor vivienda a un tanque de aclimatación separada donde se aclimaten durante 10 min. NOTA: Es importante reducir el estímulo introducidas a los peces a través de una manipulación incorrecta. Individuos transferencia descritos anteriormente 27. <ol><li> En concreto, manualmente y con cuidado coloque un vaso de plástico pequeña y transparente en el tanque de interés. Sin interrumpir el pescado tanto como la transferencia mediante el uso de una red, cucharada lentamente por el pescado en la taza. </li></ol></li><li> Asegúrese de que la cámara de vídeo está listo para grabar al confirmar que el depósito de ensayo de la agresión (véase el paso 3.1) está en el foco e inmediatamente antes de la transferencia de la persona en el tanque de la agresión, registro de prensa en el dispositivo. Transferir peces focal a través de ventosas del tanque de depósito de aclimatación a la agresión. NOTA: Es importante registrar antes de que el pescado que entra en el tanque de la agresión para controlar el tiempo exacto de la entrada. </li><li> Registre el aggrtanque ESIÓN de 10 min y 30 seg y luego taza el pescado focal desde el tanque de la agresión de nuevo en el tanque de aclimatación. </li><li> Cuando se ve la grabación, espere 30 segundos después de que el pescado ha sido introducido en el tanque como un período de aclimatación adicional antes de comportamientos de puntuación. </li><li> Usando el sistema de puntuación JWatcher definido para los comportamientos agresivos, cuantificar los siguientes comportamientos durante 10 minutos: El tiempo pasado cerca de espejo, serie de enfoques espejo, número de dardos, número de intentos de picaduras (boca de apertura en la dirección del espejo), y el número de pantallas laterales (dorsal, pectoral, anal, y la erección de la aleta caudal) 9. </li><li> Anotar un solo ensayo de la agresión al menos dos veces, hasta que el ensayo se anotó con un alto acuerdo entre iteraciones. </li></ol> 4. Llevar a cabo el ensayo de Audacia <ol><li> Llevar a cabo el ensayo de confianza en un pequeño tanque trapezoidal de 1,5 l, que mide 15 cm de alto x 26.5 cm x 22.5 cm de la parte superior de ancho de fondo x 6 cm. Envuelve el papel opaco alrededor de todos los lados of del tanque, pero dejan la parte delantera expuesta para su visualización. Colocar una sola pieza, delgada de cinta externa al tanque para demarcar la parte superior de la parte inferior del tanque. </li><li> Asegúrese de que la temperatura del agua en el tanque de la audacia es de 2 ° C de la cremallera de vivienda (véase el paso 3.2) </li><li> Transferir el pescado focal del bastidor vivienda al tanque de aclimatación (véase el paso 3.3) y dejar que se aclimaten durante 10 min. </li><li> Asegúrese de que la videocámara está lista para grabar el ensayo audacia y, una vez listo para transferir los peces focal, registro de prensa en el dispositivo. Transferir el pescado focal desde el tanque de aclimatación al tanque de audacia y grabar durante 8 min y 30 seg. </li><li> Cuando se ve la grabación, permitirá por un período adicional de aclimatación de 30 segundos después de que el pescado se introduce en el tanque antes de anotar. </li><li> El uso de software JWatcher, cuantificar los comportamientos audacia durante 8 minutos. En concreto, cuantificar los siguientes comportamientos: Tiempo cerca de la superficie, la latencia para entrar en la parte superior, el número de transitions en la parte superior, y el número de movimientos erráticos (dardos) 29. </li><li> Anotar un solo ensayo osadía al menos dos veces, hasta que el ensayo se anotó con un alto acuerdo entre iteraciones. </li></ol> 5. Llevar a cabo el ensayo Shoaling <ol><li> Llevar a cabo el ensayo de los bancos de arena en un tanque de 76 L que tiene tres compartimientos divididos por dos divisores de vidrio sellado con masilla de silicona (los tres compartimentos resultantes consisten en dos zonas de estímulo y un compartimiento central). Externamente, marcar dos zonas designadas de preferencia de 6,35 cm de cada una de divisor de vidrio de las zonas de estímulo &#39;, indicativo de dos largos de cuerpo 30. Aplicar tabiques opacos externamente en torno a tres lados del tanque de los bancos de arena, pero dejando la parte delantera expuesta para su visualización. NOTA: Esta zona de preferencia se puede personalizar para probar la hipótesis específicas para las diferentes especies de tamaño. </li><li> Dependiendo de la naturaleza del estudio, seleccione Shoals de estímulo que se aclimaten durante al menos 12 horas se acabene probar y permanecer en el tanque de shoaling durante todo el curso del experimento. NOTA: bancos de arena de estímulo son colecciones de peces individuales que se utilizan para evaluar cómo los peces focal se comporta de la presencia o ausencia de estos bancos de arena. Las diferentes combinaciones de estímulo bajío se pueden seleccionar para probar un número de diversas hipótesis shoaling. Asegúrese de que los bancos de arena de estímulo se rotan entre cada zona de estímulo para evitar el sesgo lateral y también se dejan aclimatar durante al menos 12 horas antes de la prueba. </li><li> Transferir el pescado focal en el tanque de aclimatación como se describe anteriormente (véase el paso 3.3) </li><li> Transferir, ahuecando, el pescado focal desde el tanque intermedio para la aclimatación del compartimiento central en el depósito de los bancos de arena. </li><li> Permitir un periodo de aclimatación de 10 minutos antes de un periodo de observación en vivo de puntuación 10 min. Como alternativa, registrar los ensayos shoaling y la puntuación más tarde usando JWatcher. Los peces se determinó que los bancos de arena cuando están dentro de la zona de preferencia en la cámaraque alberga el bajo fondo blanco. </li><li> Cuantificar el tiempo empleado en cada zona de preferencia y el tiempo invertido en el volumen central. </li><li> Como una medida descriptiva adicional, calcular &#39;fuerza de los bancos de arena&#39; (SOS). Asignar un valor entre -1 y +1, donde la magnitud describe cómo a menudo una bancos de peces individuales. </li><li> Calcular la relación entre los bancos de arena tiempo empleado dividido por el área de las zonas shoaling y restar la proporción de tiempo dedicado no shoaling y el área de las zonas no shoaling. Coloque esta cantidad sobre la suma del tiempo transcurrido en cada zona dividida por el volumen de cada zona individualmente. Más información acerca de este cálculo se puede encontrar en un estudio previo 14. </li></ol> 6. Control de Calidad de los Datos <ol><li> Analizar los datos utilizando los datos tradicionales herramientas de análisis de 31-32. </li><li> Prueba de homogeneidad de varianza utilizando la prueba no paramétrica de Levene para todos los comportamientos. Si un comportamiento es no homogénea realizar una transformación logarítmica33. </li><li> Confirman que no hay efectos de secuencia (es decir, que la orden de asignación al azar no afectó el comportamiento de los individuos) utilizando un ANOVA de Kruskal-Wallis en los datos homogéneos 34. </li><li> Confirman que no hay sesgos laterales para el ensayo de los bancos de arena mediante la creación de modelos lineales generales en los índices univariados SoS con la cara como un factor fijo 35. NOTA: Si hay poco que no hay problemas con los datos, los análisis posteriores se pueden realizar. Si hay problemas, reconciliarse con transformaciones y racionalizar con explicaciones plausibles biológicamente, y / o aumentar el tamaño de las muestras. </li></ol> 7. Análisis de datos <ol><li> Rangos de Spearman calcular las correlaciones de dos colas 36 para todos los comportamientos por separado dentro de los ensayos de audacia y agresividad. </li><li> Calcular los coeficientes de correlación intraclase (CCI) como un modelo mixto de dos vías con coherencia para los ensayos de comportamiento que se llevaron a cabo más de un time para un determinado individuo 36. En esta configuración, la CPI es una medida de qué tan consistentemente un pez comportado de un mismo ensayo mide más de una vez. </li><li> Preprocess audacia y agresividad comportamientos de centrado y normalizar todos los comportamientos que se preparan para la entrada a un análisis de componentes principales (ACP) 25. NOTA: Preprocesamiento de las mediciones realizadas por el centrado y normalizar es un paso vital. Sin este paso de preprocesamiento de los comportamientos que se producen con más frecuencia y más variable influirá en exceso las interpretaciones de los componentes extraídos. El proceso de centrado y normalizar eliminará este sesgo. </li><li> Realizar un PCA con una matriz de correlación para determinar si la audacia y la agresión están unidos entre sí como un síndrome conductual. Interpretar cargas de comportamiento de cada componente significativo en&gt; 0,6. Ver Budaev 2010 24 para una guía completa para informar PCA para los estudios de comportamiento. Un gráfico de sedimentación será informativo en el que eigenvectors deben mantenerse para la interpretación. </li><li> El uso de software estadístico, como SPSS o R 31,32, extraer las puntuaciones para cada componente para cada individuo. Las puntuaciones representan la cantidad de comportamiento del individuo dado puede ser explicada por el componente particular. </li><li> Calcular correlaciones de rangos de Spearman entre las puntuaciones de regresión de los factores y la fortaleza de los bancos de arena 36. NOTA: Un síndrome conductual se considera presente si la audacia y la agresión comportamientos se cargan en el mismo componente o, si algún componente con cargas significativas interpretables se correlaciona con la fuerza de los bancos de arena. Además, tenga en cuenta que la fuerza de los bancos de arena no está incluido en el PCA para dar mejores interpretaciones de las cuantificaciones de comportamiento más complejos (audacia y la agresión). El PCA ortogonalmente colapsar audacia y agresividad características en vectores propios para maximizar la cantidad de variación explicada y es muy adecuado para estas mediciones complejas. Interpretaciónla resultante vectores propios y la regresión de nuestra fuerza de las mediciones de agrupamiento que en cada uno de ellos da una interpretación mucho más intuitiva de cómo cada uno de los comportamientos complejos (audacia y agresión) se refieren a una medida shoaling binaria más bien definido (es decir, los peces se shoaling o no shoaling). </li></ol>

<ol><li>Huntingford, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+anti-predator+behaviour+and+aggression+among+conspecifics+in+the+three-spined+stickleback%2C+Gasterosteus+aculeatus%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Behav%22%5BJournal%5D)">The relationship between anti-predator behaviour and aggression among conspecifics in the three-spined stickleback, Gasterosteus aculeatus.</a> Anim Behav. 24, 245-260 (1976).</li>
<li>Réale, D., Reader, S. M., Sol, D., McDougall, P. T., Dingemanse, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+animal+temperament+within+ecology+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Rev%22%5BJournal%5D)">Integrating animal temperament within ecology and evolution.</a> Biol Rev. 82 (2), 291-318 (2007).</li>
<li>Sih, A., Bell, A., Johnson, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+syndromes%3A+an+ecological+and+evolutionary+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Behavioral syndromes: an ecological and evolutionary overview.</a> Trends Ecol Evol. 19 (7), 372-378 (2004).</li>
<li>Conrad, J. L., Weinersmith, K. L., Brodin, T., Saltz, J. B., Sih, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+syndromes+in+fishes%3A+a+review+with+implications+for+ecology+and+fisheries+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioural syndromes in fishes: a review with implications for ecology and fisheries management.</a> J Fish Biol. 78 (2), 395-435 (2011).</li>
<li>Wolf, M., Weissing, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+personalities%3A+consequences+for+ecology+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Animal personalities: consequences for ecology and evolution.</a> Trends Ecol Evol. 27 (8), 452-461 (2012).</li>
<li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+a+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: a new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li>
<li>Dai, Y. -J., Jia, Y. -F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+system+to+study+toxicology%3A+Zebrafish+toxicology+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Chem%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model system to study toxicology: Zebrafish toxicology monitoring.</a> Environ Toxicol Chem. 33 (1), 11-17 (2014).</li>
<li>Norton, W., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+zebrafish+as+a+model+organism+for+behavioural+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics.</a> Neuroscience. 11 (1), 90(2010).</li>
<li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebra+fish%3A+an+uncharted+behavior+genetic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Genet%22%5BJournal%5D)">Zebra fish: an uncharted behavior genetic model.</a> Behav Genet. 33 (5), 461-468 (2003).</li>
<li>Dzieweczynski, T. L., Campbell, B. A., Marks, J. M., Logan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+exposure+to+17%CE%B1-ethinylestradiol+alters+boldness+behavioral+syndrome+in+female+Siamese+fighting+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Acute exposure to 17α-ethinylestradiol alters boldness behavioral syndrome in female Siamese fighting fish.</a> Horm Behav. 66 (4), 577-584 (2014).</li>
<li>Miklòsi, Á, Andrew, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Zebrafish+as+a+Model+for+Behavioral+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">The Zebrafish as a Model for Behavioral Studies.</a> Zebrafish. 3 (2), 227-234 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Zebrafish+protocols+for+neurobehavioral+research%22">Zebrafish protocols for neurobehavioral research</a>. , Humana Press. New York. (2012).</li>
<li>Moretz, J. A., Martins, E. P., Robison, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+syndromes+and+the+evolution+of+correlated+behavior+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ecol%22%5BJournal%5D)">Behavioral syndromes and the evolution of correlated behavior in zebrafish.</a> Behav Ecol. 18 (3), 556-562 (2007).</li>
<li>Way, G. P., Kiesel, A. L., Ruhl, N., Snekser, J. L., McRobert, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+a+shoaling-boldness+behavioral+syndrome%2C+but+no+link+with+aggression%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Process%22%5BJournal%5D)">Sex differences in a shoaling-boldness behavioral syndrome, but no link with aggression.</a> Behav Process. 113, 7-12 (2015).</li>
<li>Toms, C. N., Echevarria, D. J., Jouandot, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+methodological+review+of+personality-related+studies+in+fish%3A+Focus+on+the+shy-bold+axis+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Psychol%22%5BJournal%5D)">A methodological review of personality-related studies in fish: Focus on the shy-bold axis of behavior.</a> J Comp Psychol. 23, 1-25 (2010).</li>
<li>Rowland, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+visual+cues+in+fish+behavior%3A+A+review+of+ethological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Biol+Fish%22%5BJournal%5D)">Studying visual cues in fish behavior: A review of ethological techniques.</a> Environ Biol Fish. 56 (3), 285-305 (1999).</li>
<li>Way, G. P., Ruhl, N., Snekser, J. L., Kiesel, A. L., McRobert, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparison+of+Methodologies+to+Test+Aggression+in+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A Comparison of Methodologies to Test Aggression in Zebrafish.</a> Zebrafish. 12 (2), 144-151 (2015).</li>
<li>Moss, S., Tittaferrante, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+aggression%2C+boldness+and+shoaling+within+a+brood+of+convict+cichlids+%28Amatitlania+nigrofasciatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Process%22%5BJournal%5D)">Interactions between aggression, boldness and shoaling within a brood of convict cichlids (Amatitlania nigrofasciatus).</a> Behav Process. 121, 63-69 (2015).</li>
<li>Ruhl, N., Kiesel, A. L., McRobert, S. P., Snekser, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+syndromes+and+shoaling%3A+connections+between+aggression%2C+boldness+and+social+behaviour+in+three+different+Danios%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Behavioural syndromes and shoaling: connections between aggression, boldness and social behaviour in three different Danios.</a> Behaviour. 149 (10-12), 1155-1175 (2012).</li>
<li>Larson, E. T., O'Malley, D. M., Melloni, R. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+and+vasotocin+are+associated+with+dominant-subordinate+relationships+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Aggression and vasotocin are associated with dominant-subordinate relationships in zebrafish.</a> Behav Brain Res. 167 (1), 94-102 (2006).</li>
<li>McRobert, S., Bradner, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+body+coloration+on+shoaling+preferences+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Behav%22%5BJournal%5D)">The influence of body coloration on shoaling preferences in fish.</a> Anim Behav. 56 (3), 611-615 (1998).</li>
<li>Ruhl, N., McRobert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sex+and+shoal+size+on+shoaling+behaviour+in+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">The effect of sex and shoal size on shoaling behaviour in Danio rerio.</a> J Fish Biol. 67 (5), 1318-1326 (2005).</li>
<li>Snekser, J., Ruhl, N., Bauer, K., McRobert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+sex+and+phenotype+on+shoaling+decisions+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Psychol%22%5BJournal%5D)">The influence of sex and phenotype on shoaling decisions in zebrafish.</a> J Comp Psychol. 23, 70-81 (2010).</li>
<li>Blumstein, D. T., Evans, C. S., Daniel, J. C. JWatcher. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.jwatcher.ucla.edu/">http://www.jwatcher.ucla.edu/</a> (2006).</li>
<li>Budaev, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Principal+Components+and+Factor+Analysis+in+Animal+Behaviour+Research%3A+Caveats+and+Guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Ethology%22%5BJournal%5D)">Using Principal Components and Factor Analysis in Animal Behaviour Research: Caveats and Guidelines.</a> Ethology. 116 (5), 472-480 (2010).</li>
<li>Paciorek, T., McRobert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+variation+in+the+shoaling+behavior+of+zebrafish+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Zool%22%5BJournal%5D)">Daily variation in the shoaling behavior of zebrafish Danio rerio.</a> Curr Zool. 58 (1), 129-137 (2012).</li>
<li>Haahr, M. Sequence randomiser. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.random.org/lists/">http://www.random.org/lists/</a> (1998).</li>
<li>Wright, D., Krause, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+measures+of+shoaling+tendency+in+zebrafish+%28Danio+rerio%29+and+other+small+teleost+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Repeated measures of shoaling tendency in zebrafish (Danio rerio) and other small teleost fishes.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1828-1831 (2006).</li>
<li>Cachat, J., Stewart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+behavioral+and+endocrine+responses+to+novelty+stress+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measuring behavioral and endocrine responses to novelty stress in adult zebrafish.</a> Nat Protoc. 5 (11), 1786-1799 (2010).</li>
<li>Croft, D. P., Krause, J., Couzin, I. D., Pitcher, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+fish+shoals+meet%3A+outcomes+for+evolution+and+fisheries%5BTitle%5D)+AND+%22Fish+Fish%22%5BJournal%5D)">When fish shoals meet: outcomes for evolution and fisheries.</a> Fish Fish. 4, 138-146 (2003).</li>
<li>IBM Corp. IBM SPSS Statistics for Mac OS. , IBM Corp. Armank, NY. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.ibm.com/analytics/us/en/technology/spss/spss.html">http://www.ibm.com/analytics/us/en/technology/spss/spss.html</a> (2011).</li>
<li>R: A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.R-project.org">http://www.R-project.org</a> (2013).</li>
<li>Brown, M. B., Forsythe, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+Tests+for+the+Equality+of+Variances%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Robust Tests for the Equality of Variances.</a> J Am Stat Assoc. 69 (346), (1974).</li>
<li>Kruskal, W. H., Wallis, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Ranks+in+One-Criterion+Variance+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Use of Ranks in One-Criterion Variance Analysis.</a> J Am Stat Assoc. 47 (260), 583-621 (1952).</li>
<li>Nelder, J. A., Wedderburn, R. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generalized+Linear+Models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Roy+Stat+Soc+A+Sta%22%5BJournal%5D)">Generalized Linear Models.</a> J Roy Stat Soc A Sta. 135, 370-384 (1972).</li>
<li>Iman, R. L., Conover, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distribution-free+approach+to+inducing+rank+correlation+among+input+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Stat+Simulat%22%5BJournal%5D)">A distribution-free approach to inducing rank correlation among input variables.</a> Commun Stat Simulat. 11 (3), 311-334 (1982).</li>
<li>Fleiss, J. L., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Equivalence+of+Weighted+Kappa+and+the+Intraclass+Correlation+Coefficient+as+Measures+of+Reliability%5BTitle%5D)+AND+%22Educ+Psychol+Meas%22%5BJournal%5D)">The Equivalence of Weighted Kappa and the Intraclass Correlation Coefficient as Measures of Reliability.</a> Educ Psychol Meas. 33 (3), 613-619 (1973).</li>
<li>Ruhl, N., McRobert, S. P., Currie, W. J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shoaling+preferences+and+the+effects+of+sex+ratio+on+spawning+and+aggression+in+small+laboratory+populations+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Shoaling preferences and the effects of sex ratio on spawning and aggression in small laboratory populations of zebrafish (Danio rerio).</a> Lab Animal. 38 (8), 264-269 (2009).</li>
<li>Bell, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+differences+between+individuals+and+two+populations+of+stickleback+%28Gasterosteus+aculeatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Evolution+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioural differences between individuals and two populations of stickleback (Gasterosteus aculeatus).</a> J Evolution Biol. 18 (2), 464-473 (2005).</li>
<li>Wilson, A. D. M., Godin, J. -G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boldness+and+behavioral+syndromes+in+the+bluegill+sunfish%2C+Lepomis+macrochirus%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ecol%22%5BJournal%5D)">Boldness and behavioral syndromes in the bluegill sunfish, Lepomis macrochirus.</a> Behav Ecol. 20 (2), 231-237 (2009).</li>
<li>Brodin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+syndrome+over+the+boundaries+of+life--carryovers+from+larvae+to+adult+damselfly%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Ecol%22%5BJournal%5D)">Behavioral syndrome over the boundaries of life--carryovers from larvae to adult damselfly.</a> Behav Ecol. 20 (1), 30-37 (2008).</li>
<li>Noldus, L. P., Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EthoVision%3A+a+versatile+video+tracking+system+for+automation+of+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Res+Methods+Instrum+Comput%22%5BJournal%5D)">EthoVision: a versatile video tracking system for automation of behavioral experiments.</a> Behav Res Methods Instrum Comput. 33 (3), 398-414 (2001).</li>
<li>Cote, J., Fogarty, S., Weinersmith, K., Brodin, T., Sih, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personality+traits+and+dispersal+tendency+in+the+invasive+mosquitofish+%28Gambusia+affinis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">Personality traits and dispersal tendency in the invasive mosquitofish (Gambusia affinis).</a> Proc R Soc B. 277 (1687), 1571-1579 (2010).</li>
<li>Fraser, D. F., Gilliam, J. F., Daley, M. J., Le, A. N., Skalski, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explaining+leptokurtic+movement+distributions%3A+intrapopulation+variation+in+boldness+and+exploration%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Nat%22%5BJournal%5D)">Explaining leptokurtic movement distributions: intrapopulation variation in boldness and exploration.</a> Am Nat. 158 (2), 124-135 (2001).</li>
<li>Dingemanse, N. J., Wright, J., Kazem, A. J. N., Thomas, D. K., Hickling, R., Dawnay, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+syndromes+differ+predictably+between+12+populations+of+three-spined+stickleback%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Ecol%22%5BJournal%5D)">Behavioural syndromes differ predictably between 12 populations of three-spined stickleback.</a> J Anim Ecol. 76 (6), 1128-1138 (2007).</li>
</ol>

Los autores (GW y SPM) no tienen intereses financieros contrapuestos ni conflictos de intereses.

El protocolo determinará si existen asociaciones consistentes en la audacia, la agresión y los comportamientos de agrupamiento que en el pez cebra. Si hay asociaciones consistentes en una población dada entre cualquiera de estos comportamientos, a continuación, un síndrome de comportamiento está presente. Mediante el estudio de síndrome de comportamiento natural de una población, los investigadores pueden tener una comprensión más completa de su dinámica de comportamiento, estructura de la población, y, posiblemente, la...

Hay un creciente cuerpo de literatura que investiga las asociaciones entre los comportamientos distintos dentro de cada animal a partir de una población determinada. Estas asociaciones se denominan síndromes de comportamiento, y las mediciones suelen incluir la audacia, la agresión, la conducta exploratoria, y la sociabilidad 1-5. síndromes conductuales son valiosos por razones tanto directos como indirectos. Directamente, el conocimiento de los síndromes del comportamiento pueden dar una visión más completa de la teoría de la evolución, estructura de la población, y la dinámica de la población 3. Indirectamente, el conocimiento en relación con las asociaciones de comportamiento puede informar a los campos que cuantifican el comportamiento tales como la farmacología 6, 7 toxicología, genética del comportamiento 8,9, 10 y endocrinología. Debido a estos beneficios directos e indirectos, un mayor conocimiento de los síndromes de comportamiento es especialmente valiosa en organismos modelo de uso común como el pez cebra. Los estudios que utilizan el pez cebra se encuentran ina variedad de disciplinas, incluyendo el análisis de los síndromes conductuales 11-13. Para avanzar en el conocimiento en la investigación síndrome conductual, y debido a otras disciplinas también utilizan mediciones de comportamiento para las pruebas de hipótesis, se requieren descripciones sucintas fiables y de comportamiento para los análisis y las interpretaciones válidas y protocolos normalizados que facilitará las comparaciones entre los estudios dentro de las especies. El protocolo fue desarrollado para medir un síndrome conductual audacia-agresión-bancos de arena en una población de pez cebra criados en el laboratorio 14. Sin embargo, la base del protocolo (seguimiento de peces individuales, asegurando la asignación al azar adecuada y análisis apropiados) puede ser modificado fácilmente para una variedad de medidas alternativas de comportamiento. Además, los ensayos de la audacia, la agresión, o de agrupamiento que se pueden ejecutar de forma individual para la verificación de hipótesis distintas. Por lo tanto, si bien es nuestro objetivo para describir cómo llevar a cabo un estudio síndrome conductual y el protocolo para el éxito de l individuoLa medición del comportamiento evel, cada faceta de este procedimiento puede estar solo. La literatura sobre los síndromes conductuales abarca varios grupos taxonómicos, de artrópodos para los seres humanos y 4, con el fin de medir un síndrome de comportamiento, por lo menos dos contextos de comportamiento deben ser cuantificados. Desafortunadamente, a menudo hay poca consistencia en los ensayos que se utilizan para cuantificar la medición del comportamiento a través de los ejes de comportamiento. Por ejemplo, en los peces, teniendo libertad se puede medir utilizando ensayos de laberinto en T, ensayos de campo abierto, o la introducción de una novela o estímulo exterior 15. Los estudios de agresión en el pescado podrían implicar interacciones diádicas, ensayos de estímulo de vídeo, o ensayos de modelo de arcilla 12,16,17. Del mismo modo, el análisis de comportamiento shoaling, que implica típicamente la medición de preferencia shoalmate, se puede realizar en diferentes tipos de tanques, con diferentes métodos para determinar el tiempo de asociación 21-23. En este protocolo un subconjunto específico de la overase presenta ll repertorio ensayo conductual. En concreto, este protocolo presenta una metodología para realizar un seguimiento de los individuos a través de la audacia, la agresión, y los ensayos de agrupamiento que de una manera que facilita las comparaciones dentro de los individuos para determinar si las comparaciones son coherentes en todos los individuos dentro de una población. Hemos llevado a cabo este protocolo con el pez cebra y cíclidos convictos (Amatitlania nigrofasciata) en estudios previos 14,18, y funcionará con cualquier pez de agua dulce de tamaño similar. ensayos de Intrepidez se llevan a cabo en un tanque trapezoidal 1,5 L que tiene una línea horizontal delimitar las zonas de igual tamaño en las partes superior e inferior del tanque. comportamientos cuantificados incluyen el número de transiciones por los peces del ensayo entre la parte superior e inferior del tanque, el tiempo de cada porción, el número de dardos, y la latencia para entrar en la parte superior. El ensayo se lleva a cabo la agresión en un tanque rectangular 19L que incluyeun espejo de 3 pulgadas x 5 pulgadas inclinada en unos 22 ° situados en la esquina inferior izquierda del depósito 19. Cuantificados comportamientos incluyen la cantidad total de tiempo dedicado por los peces objetivo interactuar con el espejo 20, junto con los indicadores específicos agresivos - número de picaduras, pantallas laterales, dardos entre los peces del ensayo y su reflejo. Para estos indicadores específicos, las picaduras se definen como estocadas rápidas hacia el espejo con la boca abierta, pantallas laterales se definen como el aleteo de las aletas laterales, pectorales, dorsal y anal en la dirección del espejo, y dardos son los movimientos erráticos que son no se dirige hacia el espejo. Por último, el ensayo shoaling cuantifica el comportamiento de un pez de ensayo en cámara central de un tanque de tri-cámaras. Las cámaras laterales del tanque son o vacío, o contienen una &quot;diana de bajo fondo&quot; de los peces, y el tiempo de los peces del ensayo pasa cerca de cada cámara lateral se mide 21-23. Una puntuación compuesta única, conocida como StrenGTH de Shoaling (SOS), se calcula para cada pez de ensayo individual, específica a los estímulos, y se puede utilizar en los análisis de aguas abajo 14. Todos los comportamientos son calificadas por un solo espectador, o múltiples espectadores utilizando el software de cuantificación del comportamiento libre conocido como JWatcher 24. Prueba de la presencia de un síndrome conductual es ante todo un esfuerzo estadístico, y es aconsejable seguir las pautas que se presenta por Budeav 2010 25. En concreto, se recomienda realizar un análisis de componentes principales (PCA) en los datos centrados y normados en la que el insumos son los vectores de los comportamientos de un individuo en ensayos con las mediciones de comportamiento múltiples (es decir, la audacia y la agresión). La PCA, se realiza en una matriz de correlación, reduce la dimensionalidad de las mediciones de comportamiento, y por lo tanto extrae el conocimiento más importante que explica la mayoría de la variación. Los componentes extraídos a continuación, pueden ser interpretados based en altas cargas de factor para el comportamiento individual de las puntuaciones de interés y de regresión se puede extraer para cada individuo sobre la base de los componentes explicativas. Estas puntuaciones de regresión pueden ser comparados con la medición de SOS y otras diversas mediciones no conductuales tales como el tamaño del pez o el sexo. Este flujo de trabajo se ha aplicado en un estudio de los síndromes de comportamiento del pez cebra en el que se descubrió un síndrome específico de comportamiento sexual que existe entre la audacia y bancos de arena 14. En esta situación, más audaz machos de pez cebra son más propensos a asociarse con una especie más grande, más agresivos (D. albolineatus), pero esta asociación se pierde en las mujeres. Este flujo de trabajo también se llevó a cabo en un estudio de convicto familiares menores de cíclidos (Amatitlania nigrofasciata) 18 en la que no fue descubierto un síndrome conductual, lo que podría indicar la plasticidad de comportamiento de la especie. Por lo tanto, el siguiente protocolo se presenta won un objetivo de delinear la naturaleza de tres ensayos específicos (audacia, la agresión y shoaling) en el marco del estudio de un síndrome de comportamiento a nivel individual.

<table><tbody><tr><td>Sistema de bastidor de pez cebra</td><td>Aquaneering Inc</td><td>Cat. # ZS550</td><td></td></tr><tr><td>Pet Valu Alimento para Peces Tropicales, 224.0 g</td><td>Pet Valu</td><td>Cat. # 31700</td><td></td></tr><tr><td>Huevos de camarones en salmuera de primera calidad, 16 oz</td> Tanque trapezoidal directo <td>de camarones</td><td></td><td></td>en salmuera</tr> de <tr><td>1.5 L</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>Cat. # itsts-Un</td><td></td></tr><tr><td>tanque rectangular de 19 L</td><td>que los peces colocan</td><td></td><td></td>211932</tr><tr><td>Tanque rectangular de 76 L</td><td>That Fish Place</td><td>212180</td><td></td></tr><tr><td>Cámara CCD Hitachi KP-D20A</td><td>Prescott's, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s Lente MACRO</td><td>Nikon Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ArtMinds Espejo Cuadrado, Paquete Económico 3" x 3"</td><td></td> <td>Michaels Cat. # 10334162</td><td></td></tr><tr><td>Jwatcher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS Base de estadísticas</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R</td><td>La Fundación R</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

audacia, la agresión y ensayos para formar bancos de pez cebra de comportamiento síndromes

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

Existe un síndrome de comportamiento cuando los comportamientos específicos interactúan en diferentes contextos. El pez cebra han sido sujetos de prueba en estudios recientes y es importante para estandarizar los protocolos para asegurar análisis e interpretaciones adecuadas. En nuestros estudios anteriores, hemos medido la audacia mediante el control de una serie de comportamientos (tiempo cerca de la superficie, la latencia en las transiciones, el número de transiciones y dardos) en un tanque trapezoidal de 1,5 l. Del mismo modo, se cuantificó la agresión por las picaduras de observación, pantallas laterales, dardos, y el tiempo cerca de un espejo inclinado en un tanque de 19 l rectangular. Al dividir un tanque de 76 L en tres partes, que también examinó las preferencias shoaling. El ensayo de los bancos de arena es un ensayo altamente personalizable y se puede adaptar para las hipótesis específicas. Sin embargo, los protocolos para este ensayo también debe ser estandarizada, pero lo bastante flexible para la personalización. En estudios previos, cámaras extremas eran o vacío, contenían 5 ó 10 peces cebra, o 5 Danios perla (D. albolineatus). En el folLowing manuscrito, se presenta un protocolo detallado y datos representativos que acompañan a las aplicaciones exitosas del protocolo, lo que permitirá la replicación de experimentos síndrome conductual.

Dependiendo de la naturaleza del estudio, y el protocolo específico empleado, varios resultados diferentes son posibles en un experimento de síndromes del comportamiento. Las siguientes tablas y figuras, donde se indica, son una adaptación de nuestro estudio anterior publicado en la revista Behavioural Processes 14 y 17 de la revista de pez cebra. Cuando la propuesta (como se describió anteriormente) se lleva a cabo en su totalidad, dos conjuntos de resultados, &#39...

Este manuscrito describe la configuración, implementación y análisis de la audacia, la agresión y el cardumen en el pez cebra y las pruebas para detectar la presencia de un síndrome conductual. Un enfoque estandarizado para la cuantificación del comportamiento permitirá una comparación más fácil entre los estudios. Es posible modificar este protocolo, ya que cada ensayo se puede ejecutar individualmente.

Audacia, la agresión y ensayos para formar bancos de pez cebra de comportamiento Síndromes

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

El objetivo general de este protocolo es estandarizar la metodología utilizada para observar, analizar e interpretar los síndromes conductuales de osadía, agresión y agrupamiento en el pez cebra. Directamente, este método puede responder preguntas en teoría evolutiva, estructura de poblaciones y dinámica de poblaciones. Cuando se combina con técnicas interdisciplinarias, puede aplicarse a campos como la farmacología, la toxicología, la genética del comportamiento y la endocrinología. La principal ventaja de esta técnica es que la combinación de conductas como la audacia, la agresividad y el agrupamiento abarca muchos comportamientos bien estudiados y fácilmente cuantificables en el pez cebra. Y cada ensayo puede modificarse para responder preguntas experimentales alternativas. Comience separando aleatoriamente los peces cebra en la proporción adecuada de peces focales a peces estímulo.Almacene todos los peces en estantes de alojamiento para pez cebra bajo un ciclo estricto de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Alimente a todos los peces focales y estímulos con alimento en escamas todos los días. Y solo alimente con camarones de salmuera una vez por semana en días no destinados a la investigación.A continuación, prepare tres tanques de ensayo en el laboratorio: uno para evaluar la agresión, la audacia y el agrupamiento, ubicados en lugares que minimicen la posibilidad de estímulos externos adversos, y que permitan suficiente espacio para que una cámara de video capture todo el tanque.Configure la cámara de video de manera que tenga suficiente claridad para ver las etiquetas del tanque, así como para distinguir comportamientos sutiles del pez focal. Mantenga la cámara en la misma posición, con una vista completa del tanque durante todas las grabaciones del ensayo conductual, con el fin de minimizar diferencias no intencionadas en la puntuación conductual debidas a grabaciones desiguales. A continuación, defina un sistema de etiquetado para registrar la fecha, el número de pez y el número de ensayo para todos los ensayos conductuales.Etiquete el exterior del tanque con cinta a la vista de la cámara. Registre esta información en un cuaderno de laboratorio para referencia rápida y control de calidad futuro. Finalmente, prepare un tanque de aclimatación que se utilizará entre todos los ensayos, así como inmediatamente después de que los individuos sean retirados del estante de alojamiento.Comience obteniendo un tanque rectangular de 19 litros, que mide 30 por 15 por 10 centímetros. Equipe el tanque con particiones opacas externas que rodeen tres de sus lados, dejando el frente expuesto para la observación, con el fin de reducir estímulos externos indeseables. Divida el tanque mediante marcas externas en cuatro cuadrantes rectangulares iguales.Utilice silicona para fijar un espejo dentro del cuadrante inferior izquierdo, inclinado a 22,5 grados, formando un triángulo rectángulo contra el lado izquierdo del tanque. Tenga agua fresca envejecida, precalentada a entre 27,5 y 28,5 grados Celsius, lista para agregar al tanque de agresión con el fin de garantizar que la temperatura del agua en el tanque de aclimatación y el tanque de agresión no difiera en más de dos grados Celsius respecto a la del sistema de alojamiento. Capture un pez focal del sistema de alojamiento y transfiera este a un tanque de aclimatación separado, donde se aclimatará durante 10 minutos.Confirme que la cámara de video esté enfocada en el tanque del ensayo de agresión y presione grabar. Luego, transfiera inmediatamente el pez focal mediante copa desde el tanque de aclimatación al tanque de agresión. Grabe el tanque de agresión durante 10 minutos y 30 segundos.Luego, traslade con cuidado el pez focal desde el tanque de agresión de vuelta al tanque de aclimatación. Al observar la grabación después de finalizar el ensayo, espere 30 segundos tras la introducción del pez en el tanque como período adicional de aclimatación antes de puntuar los comportamientos. Finalmente, puntúe un solo ensayo de agresión al menos dos veces hasta que el ensayo sea puntuado con un alto grado de concordancia entre las iteraciones.Para configurar el ensayo de audacia, primero obtenga un pequeño tanque trapezoidal de 1,5 litros, que mida 15 centímetros de altura con una parte superior de 26,5 centímetros y una base de 22,5 centímetros, y un ancho de 6 centímetros. Envuelva papel opaco alrededor de tres lados del tanque y deje el frente descubierto para su observación. Coloque una sola tira delgada de cinta en la parte externa del tanque para delimitar la sección superior de la inferior.A continuación, asegúrese de que la temperatura del agua en el tanque de audacia esté dentro de dos grados centígrados respecto al estante de alojamiento. Transfiera el pez focal desde el estante de alojamiento al tanque de aclimatación y déjelo aclimatarse durante 10 minutos. Asegúrese de que la cámara de video esté enfocada en el ensayo de audacia y presione grabar en el dispositivo.Transfiera inmediatamente el pez focal desde el tanque de aclimatación al tanque de audacia y registre durante ocho minutos y 30 segundos. Al ver la grabación después de que finalice el ensayo, permita un período adicional de aclimatación de 30 segundos después de que el pez sea introducido en el tanque antes de puntuar. Finalmente, puntúe un solo ensayo de audacia al menos dos veces, hasta que el ensayo sea puntuado con un alto grado de concordancia entre las repeticiones.Para configurar el ensayo de agrupamiento, obtenga un tanque de 76 litros que tenga tres compartimentos divididos por dos separadores de vidrio sellados con silicona. Exteriormente, use cinta para marcar dos zonas de preferencia que estén a 6,35 centímetros de cada uno de los separadores de vidrio, que delimitan cada zona de estímulo. Coloque particiones opacas externas alrededor de tres lados del tanque de agrupamiento y deje el frente expuesto para su observación.A continuación, seleccione bancos de estímulo para aclimatar durante al menos 12 horas antes de la prueba y manténgalos en el tanque de agrupamiento durante todo el transcurso del experimento. Transfiera el pez focal desde el estante de alojamiento a un tanque de aclimatación separado mediante copa, donde permanecerá durante 10 minutos. Luego, transfiera, mediante copa, el pez focal desde el tanque de aclimatación al compartimento central del tanque de agrupamiento.Permita un período de aclimatación de 10 minutos antes de un período de observación activa de 10 minutos, en el cual los peces que forman bancos se definen como aquellos que se encuentran dentro de la zona de preferencia en la cámara que alberga el banco objetivo. A continuación, cuantifique el tiempo gastado en cada zona de preferencia, así como el tiempo pasado en el volumen central. Finalmente, tras completar los ensayos, transfiera los peces a un tanque terminal separado que servirá como tanque de destino final para todos los individuos focales utilizados.Este protocolo analizó las asociaciones constantes en los comportamientos de agresión, audacia y agrupamiento en cardúmenes de pez cebra para determinar si existía un síndrome conductual. Aquí, el componente uno representa los comportamientos de agresión, mientras que el componente dos está asociado con los comportamientos de audacia. Dado que los comportamientos de agresión y audacia no están representados por el mismo componente, se puede concluir que no existe un síndrome conductual de agresión-audacia en el pez cebra.Una vez dominado, todo el protocolo para un pez focal puede realizarse en 70 minutos. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que usted y su equipo deben familiarizarse con cada comportamiento objetivo para minimizar el sesgo del observador. Calificar la misma grabación de video varias veces también aumentará la confianza en sus resultados.Después de seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos en los campos farmacológico, genético o fisiológico para responder preguntas adicionales sobre qué factores internos y externos afectan los síndromes conductuales. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo observar, analizar e interpretar la audacia, la agresión y los síndromes conductuales de agrupamiento en el pez cebra. ¡Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos!

boldness-aggression-shoaling-assays-for-zebrafish-behavioral

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Hemos desarrollado la respuesta de Visual-Motor para cuantificar la potencia del motor de larvas de pez cebra en respuesta a incrementos de la luz y disminuye. También se examinaron el pez cebra mutantes de visión, incluyendo la no respuesta optocinético (NRC) de los mutantes, lo que se pensaba que eran completamente ciegos cuando se probó por otro ensayo de la visión, el reflejo de optocinético.

Un ensayo de conducta para medir la capacidad de respuesta de pez cebra a cambios en la intensidad de luz

El video describe el ensayo de evitación y tigmotaxis de las larvas de pez cebra. El video examina el comportamiento de las larvas de pez cebra en respuesta a estímulos aversivos visuales.

Ensayo de evitación y tigmotaxis del pez cebra: un método de alto rendimiento para examinar el comportamiento de las larvas en respuesta a estímulos visuales aversivos

El artículo describe un ensayo para estudiar la agresión del pez cebra. El método utiliza un simple espejo y observa la respuesta conductual del pez cebra hacia su propio reflejo en el espejo.

Ensayo de agresión: un método para estudiar el comportamiento agresivo del pez cebra en respuesta a un espejo

Nuestro laboratorio ha desarrollado un sistema automatizado de imágenes de alto rendimiento novedoso que es útil para la detección de varios comportamientos diferentes en-7 días de edad, las larvas de pez cebra. El sistema se puede utilizar para detectar cambios sutiles en el comportamiento después de las larvas han sido expuestos a sustancias tóxicas ambientales o productos farmacéuticos.

Automatizados análisis de comportamiento de alto rendimiento en larvas de pez cebra

Se describe el uso de un sistema de video automático 3D que puede rastrear individuos y grupos de peces cebra. Como ejemplo de aplicación, exploramos los efectos del antagonista del receptor NMDA MK-801 en cardúmenes de pez cebra.

El uso de un sistema de seguimiento 3D Automatizado de Registro Individual y bajíos de adultos de pez cebra

Este manuscrito describe un método simple para medir el estrés de forma oral en el pez cebra adulto. El enfoque aprovecha la tendencia innata que el pez cebra prefiere la mitad inferior de un tanque cuando está en un estado estresante. También describimos métodos para acoplar el ensayo con farmacología.

Enfoques conductuales para estudiar el estrés innato en el pez cebra

Presentamos una cámara conductual diseñada para evaluar el rendimiento cognitivo. Proporcionamos datos que muestran que una vez adquirido, el pez cebra recuerda la tarea 8 semanas después. También mostramos que el pez cebra hiperglucémico ha alterado el rendimiento cognitivo, lo que indica que este paradigma es aplicable a los estudios que evalúan la cognición y la memoria.

La tarea de comportamiento de elección de tres cámaras utilizando el pez cebra como sistema modelo

El objetivo del protocolo actual es esbozar los pasos necesarios para establecer y utilizar un ensayo de preferencia social para el pez cebra adulto y demostrar que puede utilizarse para caracterizar los defectos sociales inducidos por el etanol.

Modelado de trastornos del espectro alcohólico fetal en pez cebra para caracterizar el impacto de un entorno embrionario adverso en el comportamiento social adulto

Aquí, presentamos una batería integral de pruebas de comportamiento, que incluye el nuevo tanque, Shoaling y pruebas de preferencia social, para determinar de manera efectiva los posibles efectos neurotóxicos de los productos químicos (por ejemplo, metanfetamina y glifosato) en el pez cebra adulto utilizando un solo tanque. Este método es relevante para la neurotoxicidad y la investigación ambiental.

Evaluación de la Neurotoxicidad en Danio rerio Adulto mediante una Batería de Pruebas de Comportamiento en un Tanque Único

Este protocolo establece un paradigma de fenotipado conductual en larvas de pez cebra tratadas con MPTP para evaluar déficits motores y no motores similares a la enfermedad de Parkinson.

Perfilado fenotípico de fenotipos conductuales tipo parkinsoniano inducidos por MPTP en larvas de pez cebra basado en un experimento conductual

Las tareas de preferencia social multicámara se han adaptado de roedores a pez cebra, facilitando el estudio del comportamiento social en organismos modelo. Este protocolo valida una tarea de bajo coste de 3 cámaras en tanque abierto utilizando cámaras web y software de código abierto para medir la preferencia social de los peces cebra, haciéndola accesible para la investigación y la docencia de estudiantes de grado.

Alternativa de bajo coste para examinar la preferencia social en peces cebra (Danio rerio) utilizando la tarea de 3 cámaras de nadar libre en acuario abierto

Aprende a estandarizar ensayos de audacia, agresión y formación de bancos en Danio rerio para estudiar síndromes conductuales. Esta metodología facilita comparaciones entre estudios de neurociencia y ecología.

Audacia, la agresión y ensayos para formar bancos de pez cebra de comportamiento Síndromes

Explorar más videos