Name: El modelo de roedor de la anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (rNAION) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprende a crear el modelo rNAION en roedores para estudiar mecanismos de respuesta al ictus del nervio óptico. Esta técnica indolora permite evaluar agentes neuroprotectores y analizar edema e inflamación post-ictus.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a los muchos estudiantes y compañeros que han trabajado en este modelo para mejorar su eficacia, y para comprender sus mecanismos. Un agradecimiento especial al Dr de. Mary Johnson (Universidad de Maryland-Baltimore), Nitza Goldenberg-Cohen (Hospital Schneiderman niños, Petah-Tikva, Israel), Charles Zhang (Einstein Medical College, Bronx, Nueva York), y Valerie Touitou (Hopital Salpetrie, París, Francia). Este estudio fue financiado en parte por SR1 EY015304 al SLB.

Este protocolo fue aprobado por la Universidad de Maryland Institucional Cuidado de Animales y el Utilización (IACUC; Baltimore, MD, EE.UU.) 1. Estructura del ensayo <ol><li> Hacer una lente de contacto personalizado diseñado a partir de un claro grado óptico circulares 7 mm de diámetro, de plexiglás de 3 mm de espesor. Cortar las lentes circulares con un taladro de columna. Utilice una broca estándar para hacer la curva interna, y finalmente pulir las curvas exteriores e interiores utilizando un pulidor de lentes de contacto de grano ultrafino (1000/3000). </li><li> Preparar 2,5 mM Rosa de Bengala (RB) de pH 7,4 buffer fosfato salino (PBS) con antelación, esterilizar por filtración con un filtro de jeringa de 0,45 micras y almacenar en alícuotas de 1 ml -20 ° C en un recipiente hermético a la luz durante un máximo de 6 meses. NOTA: El uso de animales machos outbred albinos, tales como Sprague Dawley minimiza las diferencias de respuesta dependientes de la tensión, permite una mayor facilidad de inducción y reduce la variabilidad que puede ocurrir con cycli estrohembra ng. </li><li> Configurar la frecuencia del doble de neodimio-itrio-aluminio-granate (FD-YAG) médica oftalmológica, que genera una luz láser de 532 nm. Montar el láser en una lámpara de hendidura Haag-Streit oftálmica utilizando un adaptador de láser oftálmico estándar. Este dispositivo disponible comercialmente permite la visualización simultánea de la aplicación de puntos de ojo y el láser del animal. El láser médico también tiene un haz de encuadre de enfoque apropiado y centrado usando el mismo tamaño de punto como la inducción láser. los parámetros de potencia del láser son los siguientes: <ol><li> Para la inducción rNAION rata: utilizar 500 micras punto de tamaño / 50 mW de potencia de láser / 1.000 mseg de duración / 1.000 intervalo de milisegundos. </li><li> Para la inducción rNAION ratón: cambiar el tamaño de punto de 300 micras de disco óptico más pequeño y dejar otros parámetros el mismo que el ajuste de la rata. </li><li> utilizan habitualmente un medidor de potencia de láser para asegurar la potencia de salida del láser. </li></ol></li></ol> 2. Procedimiento experimental <ol><li> Encienda la potencia del lásery establecer el parámetro de láser apropiado. Calentar el láser durante al menos cinco minutos antes de su uso. </li><li> Pesar el animal para determinar la dosis apropiada para la ketamina / xilazina y colorante RB. Anestesiar al animal mediante inyección intraperitoneal de una mezcla de 1 ml / kg de 80 mg / ml de ketamina y 4 mg / ml de xilazina. </li><li> Dejar al animal en una jaula calienta hasta que esté completamente anestesiado. Compruebe si no hay respuesta a los estímulos aversivos (o cola de arrastre del dedo del pie). Compruebe animales para la profundidad de la anestesia cada 10 min. </li><li> Dilatar los alumnos del animal con tropicamida al 1% y anestesiar la superficie del ojo con un 0,5% proparacaına. Si el uso de animales pigmentados, tales como Long Evans, un 2,5% gotas oculares neosinefrina aumentarán dilatación de la pupila. </li><li> Use las tijeras para cortar los bigotes cerca de la boca del cañón en el lado para ser inducidas para evitar el bloqueo de la vista. </li><li> Ponga una gota de metilcelulosa al 1% u otra gota oftálmica de acoplamiento en el interior de la lente de contacto a medida, y luego aplicar la lente en tque los ojos de rata. </li><li> Colocar el animal sobre una plataforma ajustado a la altura de la lámpara de hendidura. Ajuste la cabeza del animal en un ángulo de 45 °, de modo que el ojo es perpendicular a la lámpara de hendidura y el rayo láser. </li><li> Visualizar el ojo a través de la lámpara de hendidura oftálmica. Asegúrese de que la orientación de los faros es el tamaño adecuado, así como centrado y centrado directamente en el nervio óptico visualizado. Fotografiar el fondo de la retina utilizando una cámara digital con una alta ASA (1,200 - 2,000) Velocidad montado en una de las piezas de ojo de la lámpara de hendidura con un adaptador hecho a medida. NOTA: La capacidad de ver los vasos coroideos revela la transparencia de la retina. Esta es una señal importante con el fin de ser capaz de detectar la isquemia de retina, que puede confundir la interpretación si se produce. rNAION es la isquemia del nervio óptico, lo que resulta en la pérdida de RGC aislado, mientras que los resultados de isquemia de la retina en daño en la retina que afecta a todas las células de las capas de la retina interna. </li><li> Opcionalmente, aún más la imagen de la retina ynervio óptico utilizando un dominio de coherencia óptica espectral tomógrafo (SD-OCT 8) para evaluar el ojo no-inducida. Escanear en face (Figura 3B), así como 7 exploraciones de sección transversal a través de la retina (Figura 3C). La OCT-SD de imagen utiliza la misma lente de contacto utilizado para la inducción láser. </li><li> Se inyecta 1 ml / kg por vía intravenosa a través de RB vena de la cola, y esperar durante 30 segundos, a continuación, activar la potencia del láser. Este retardo de tiempo permite que el RB para distribuir uniformemente a través de la circulación. Utilizamos un pulso láser de 50 mW a uno seg / pulso. Energías mayores (≥ 60 mW) pueden dañar la retina o causar isquemia vascular de la retina. Precaución: Asegúrese de que todo el mundo tiene un par de gafas de filtrado de seguridad del láser de la longitud de onda apropiada para evitar el bloqueo de la luz láser que entren por los ojos del investigador. NOTA: La administración láser se debe dar rápidamente después de la inyección IV RB ya que el colorante se elimina rápidamente de la circulación. Cuanto más larga sea la inducción láser, el más grave es la isquemia del nervio óptico. En general, los animales se les da 7 - 12 pulsos por segundo en una sucesión rápida. El contacto de la luz láser con el colorante circula da los vasos del nervio óptico un hermoso brillo dorado que se puede ver a través de la lámpara de hendidura (Figura 4B). Esto demuestra que el colorante se inyectó por vía sistémica y se distribuye en la corriente sanguínea. Si la luz es débil, o ninguna en absoluto (Figura 4A), el colorante no se inyectó por vía intravenosa. En este caso, no se dé una segunda inyección inmediatamente, ya que el animal tendrá que recuperar durante al menos dos días antes de la reinyección. </li><li> Inmediatamente después de la inducción, retirar la lente de contacto. Cubra ambos ojos con antibiótico oftálmico triple (Neosporin / polimixina / bacitracina) ungüento con dexametasona, y colocar al animal en un cojín de calentamiento de 37 ° C en una sola jaula alojado en observación hasta la recuperación completa. <ol><li> Limpiar la lente de contacto con agua destilada water y secar con un paño de limpieza no abrasivo para su uso futuro. </li><li> Dos días después de la inducción evaluar el edema del nervio óptico por tanto la fotografía del fondo de color y SD-OCT análisis 8. NOTA: comparar el grado de edema del nervio óptico da una estimación de la gravedad de la isquemia del nervio óptico. A los dos días, el margen de disco del nervio óptico es borrosa, y las venas de la retina están ligeramente dilatado, en comparación con el ojo contralateral (no inducida). Realizar el electrorretinograma (ERG) y flash potenciales evocados visuales (VEP 11) a los dos y cuatro semanas después de la inducción para el análisis electrofisiológico. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Banik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%3A+An+Update+on+Demographics%2C+Clinical+Presentation%2C+Pathophysiology%2C+Animal+Models%2C+Prognosis%2C+and+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Experimental+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy: An Update on Demographics, Clinical Presentation, Pathophysiology, Animal Models, Prognosis, and Treatment.</a> J. Clin. Experimental Ophthalmol. 10, 1-5 (2013).</li>
<li>IONDT study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+with+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+eligible+for+the+Ischemic+Optic+Neuropathy+Decompression+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients with nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy eligible for the Ischemic Optic Neuropathy Decompression Trial.</a> Arch Ophthalmol. 114, 1366-1374 (1996).</li>
<li>Tesser, R. A., Niendorf, E. R., Levin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphology+of+an+infarct+in+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The morphology of an infarct in nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Ophthalmology. 110, 2031-2035 (2003).</li>
<li>Bernstein, S. L., Johnson, M. A., Miller, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28NAION%29+and+its+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) and its experimental models.</a> Prog Retin Eye Res. 30, 167-187 (2011).</li>
<li>Nicholson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGJ2+Provides+Prolonged+CNS+Stroke+Protection+by+Reducing+White+Matter+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">PGJ2 Provides Prolonged CNS Stroke Protection by Reducing White Matter Edema.</a> PLoS One. 7 (12), (2012).</li>
<li>Goldenberg-Cohen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+Dysfunction+Following+Induction+of+Experimental+Anterior+Optic+Nerve+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte Dysfunction Following Induction of Experimental Anterior Optic Nerve Ischemia.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 2716-2725 (2005).</li>
<li>Bernstein, S. L., Guo, Y., Kelman, S. E., Flower, R. W., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+cellular+responses+in+a+novel+rodent+model+of+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and cellular responses in a novel rodent model of anterior ischemic optic neuropathy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44, 4153-4162 (2003).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-Domain+Optical+Coherence+Tomography+of+the+Rodent+Eye%3A+Highlighting+Layers+of+the+Outer+Retina+Using+Signal+Averaging+and+Comparison+with+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-Domain Optical Coherence Tomography of the Rodent Eye: Highlighting Layers of the Outer Retina Using Signal Averaging and Comparison with Histology.</a> PLoS One. 9 (5), (2014).</li>
<li>Huang, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+systemic+treatment+with+methylprednisolone+in+a+rodent+model+of+non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28rNAION%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effects of systemic treatment with methylprednisolone in a rodent model of non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION).</a> Exp Eye Res. 131, 69-76 (2015).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental+Model+of+Optic+Nerve+Head+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental Model of Optic Nerve Head Injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, 6222(2014).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Evoked+Potential+Recording+in+a+Rat+Model+of+Experimental+Optic+Nerve+Demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination.</a> J. Vis. Exp. (101), e52934(2015).</li>
<li>Templeton, J. P., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+optic+nerve+crush+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A practical approach to optic nerve crush in the mouse.</a> Mol Vis. 18, 2147-2152 (2012).</li>
<li>Magharious, M. M., D'Onofrio, P. M., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+Nerve+Transection%3A+A+Model+of+Adult+Neuron+Apoptosis+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System.</a> J Vis Exp. (51), e2241(2011).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Rodent+Model+of+Posterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A Novel Rodent Model of Posterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> JAMA Ophthalmol. 131 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Huang, T. L., Chang, C. H., Chang, S. W., Lin, K. H., Tsai, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Intravitreal+Injections+of+Antivascular+Endothelial+Growth+Factor+Agents+in+a+Rat+Model+of+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22IOVS%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Intravitreal Injections of Antivascular Endothelial Growth Factor Agents in a Rat Model of Anterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> IOVS. 56, 2290-2296 (2015).</li>
</ol>

Los autores tienen nada que revelar.

Mientras que hay un número de modelos de lesión del nervio óptico (óptica aplastamiento del nervio 12, óptica transección del nervio 13, y PION 14), el modelo rNAION es humano, adaptable a ratas y ratones. Se asemeja más a la condición clínica humana de NOINA. Esta condición incluye anterior progresiva edema del nervio óptico, un síndrome compartimental del nervio óptico anterior, isquemia focal axonal, aislado daño axonal de la retina de células ganglionares y la pérdida durante un tran...

Anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (NOINA) es una lesión isquémica focal de la porción anterior del nervio óptico (NO) 1. NOIA-NA es la causa más común de pérdida repentina de la visión relacionada nervio óptico en individuos de más de 50 años 2. El mecanismo se cree que es un síndrome compartimental que da lugar a un edema intraneural, y provoca la compresión de los capilares que irrigan los axones en el nervio óptico 3. Dado que el EN es en realidad un tracto del sistema nervioso central (CNS), el NOINA roedor modelo (rNAION) se puede utilizar para estudiar los mecanismos y las respuestas a aislados del SNC trazos materia blanca. Por consiguiente, el modelo rNAION puede ser útil en la disección de muchos de los problemas asociados con el daño relacionado con accidente cerebrovascular a la sustancia blanca. Se puede usar para evaluar distintas estrategias y agentes neuroprotectores en el accidente cerebrovascular materia blanca. Una de las características más atractivas del modelo es que esun procedimiento indoloro, no invasivo. La potencia del láser se puede ajustar para producir diversos grados de daño isquémico. Otra característica es que se basa en inducida por láser radicales superóxido dañar el endotelio capilar, produciendo una disfunción capilar progresiva. Es esta disfunción progresiva y edema que se cree que es muy similar al mecanismo que causa NOINA. La investigación ha demostrado que no causa la coagulación capilar directa, pero funciona a través de al menos dos mecanismos: la muerte inducida superóxido y de extracción de algunas de las células endoteliales capilares 4, y NFkB (factor nuclear de cadena kappa-light-potenciador de células B activadas ) asociado regulación inflamatoria en el endotelio restante, con el aumento de transporte de fluido a través de las membranas celulares en el intersticio 5. El cierre de los capilares del nervio óptico y de compresión causadas por resultado la acumulación de líquido intersticial en óptica isquemia cabeza del nervio. Una imagen esquemática se muestra en laLa Figura 2. El modelo rNAION se puede utilizar en ambas especies 6,7 rata y ratón, y se puede variar en el nivel de su gravedad, de una lesión leve a una destrucción completa, pero sin dolor del nervio óptico y la retina, tales como la oclusión de la arteria central de la retina (OACR).

<table><tbody><tr><td>Láser de 50 mW 532 nm</td><td>Láser oftálmico estándar</td><td>Iridex</td><td></td> 0</tr><tr><td>- 100 mW Láser de 532 nm</td> Tecnologías <td></td> de <td>luminiscencia láser</td><td>Sustituto de iridex</td></tr><tr><td>Adaptador de lámpara de hendidura láser</td><td>Iridex</td><td></td><td>SMA Adaptador acoplado para salida láser</td></tr><tr><td>Medidor láser Fieldmate coherente con sensor de termopila</td><td>Otros</td><td></td><td>coherentes también apropiados</td></tr><tr><td>Examen oftálmico Biomicroscopio de lámpara de hendidura</td><td>Varios</td><td></td><td>Haag-Streit es el mejor; versiones más baratas disponibles en eBay</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>330000-1G</td><td>Agente fotoinductor</td></tr><tr><td>Fondo de ojo Lente de contacto o cubreobjetos de vidrio</td><td>personalizado/Cantor y Nissel (Reino Unido)</td><td></td><td>Lente de plástico planoconvexa diseñada a medida para examen ocular e inducción</td></tr><tr><td>Tropicamida 1%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compuesto pulidor Tamiya</td><td>Tamiya, INC</td><td>87068</td><td>lente de contacto pulidora</td></tr><tr><td>2.5% Hipromelosa (Goniovisc)/1% Metilcelulosa</td> HUB <td>Agente de acoplamiento de lentes de contacto</td><td>farmacéuticos</td><td></td></tr><tr><td>2.5% Neosinefrina Gotas oftálmicas Agente</td><td>dilatador</td><td>de pupila de Alcon labs</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamida 1%</td><td>Agente dilatador</td> <td>de pupila de Alcon labs</td><td></td></tr><tr><td>0.5% Proparacaína</td><td></td><td>Anestésico tópico</td>de <td></td> Alcon labs</tr><tr><td>Jeringa de insulina de aguja fusionada de 30 G</td><td>Varios</td><td>Varios</td><td>para inyección intravenosa de rosa bengala</td></tr><tr><td>Pomada antibiótica oftámica con dexametasona añadida (Ungüento antibiótico triple)</td><td>Varios</td><td>Varios</td><td>Aplicar después de la inducción para minimizar la cicatrización de la córnea</td></tr><tr><td>Heidelberg Corporation Dominio espectral-Tomógrafo de coherencia óptica</td><td>Heidelberg Corporación</td><td></td><td>para las mediciones de coherencia óptica de referencia y post-inducción; no esencial para la inducción</td></tr></tbody></table>

el modelo de roedor de la anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (rnaion)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

La neuropatía óptica isquémica anterior no arterítica (NAION) es una lesión isquémica focal del nervio óptico que afecta a 1/700 individuos a lo largo de su vida. NAION produce edema del nervio óptico, pérdida selectiva de las neuronas de las células ganglionares de la retina (RGC) y atrofia del nervio óptico. Se ha desarrollado un modelo de roedor de NAION que expresa la mayoría de las características y secuelas de NAION, que es aplicable tanto a ratas como a ratones. Este modelo utiliza una aplicación láser focal de 532 nm de longitud de onda para iluminar un tinte fotoactivo, la rosa de Bengala (RB), para causar daño capilar y fugas en el nervio óptico anterior objetivo (la región laminar). Después de la inducción de rNAION, hay una isquemia temprana del nervio óptico, edema del nervio óptico e inflamación intraneural, seguida de RGC selectivo y pérdida axonal. Dado que el nervio óptico es un tracto de sustancia blanca del SNC, el modelo rNAION es aplicable a los estudios mecanicistas de la isquemia selectiva de la sustancia blanca, así como a los análisis neuroprotectores y a corto y largo plazo de la respuesta glial y neuronal a la isquemia.

<html> La visualización de lentes de contacto permitido central de la retina (Figura 1). El punto focal con láser ilumina el disco óptico en la parte posterior de la retina (Figura 2). La retina normal un-inducido se muestra fotografiada por lámpara de hendidura bio-microscopio (Figura 3A) y por SD-OCT (Figura 3B y 3C). Durante la inducción láser, cuando no hay colorante está presente en la circulación, la luz láser no da...

El siguiente informe describe cómo replicar el modelo de roedores de la neuropatía óptica isquémica anterior no arterítica (rNAION), utilizando los parámetros apropiados de tinte, lente de contacto y láser. También revelamos los pasos apropiados para evaluar la lesión rNAION in vivo.

El modelo de roedor de la anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

El objetivo general de este procedimiento es producir un modelo de neuropatía óptica isquémica anterior en roedores, para utilizarlo en la caracterización de los mecanismos de respuesta al accidente cerebrovascular. Y para analizar la eficacia de agentes neuroprotectores en el tratamiento del accidente cerebrovascular del nervio óptico. Esta medida puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del accidente cerebrovascular del nervio óptico.Incluyen mecanismos del edema, la inflamación postaccidente cerebrovascular y las vías de protección y reparación. La principal ventaja de esta técnica es que el daño isquémico se limita a la porción anterior del nervio óptico. Sin cirugía, la técnica es indolora.Y la gravedad del daño puede variarse de forma reproducible a voluntad. Este método evita el dolor asociado con muchos modelos de daño nervioso, incluyendo la compresión o el corte del nervio óptico.Asimismo, permite un análisis detallado de los efectos de la isquemia exo aislada sobre una sola clase de neuronas in vivo. Comience por obtener una lente de contacto personalizada diseñada según las especificaciones indicadas. Además, prepare 2,5 milimolar de verde de rosa bengal en solución salina tamponada con fosfatos a pH 7,4.Los rellenos se esterilizan con un filtro de jeringa de 0,5 micrones. Prepare alícuotas de un mililitro, coloque las alícuotas en un recipiente hermético y opaco, y almacénelas a menos 20 grados Celsius durante hasta seis meses. El día del procedimiento, configure el láser médico oftálmico de neodimio-yag con frecuencia duplicada.Que genera una luz láser de 532 nanómetros. Monte el láser en una lámpara de hendidura oftálmica Haag-Streit, utilizando un adaptador láser oftálmico estándar, para permitir la visualización simultánea del ojo del animal y la aplicación del punto láser. Encienda el láser y déjelo calentar durante al menos cinco minutos antes de usarlo.Establezca los parámetros adecuados de potencia del láser para el animal experimental utilizado. Monte una cámara digital de alta velocidad ASA en uno de los oculares de la lámpara de hendidura, utilizando un adaptador hecho a medida. Después de anestesiar adecuadamente al animal experimental y asegurar el nivel adecuado de anestesia mediante la ausencia de respuesta a un pellizco en el dedo del pie.Diluya las pupilas de los animales con tropicamida al uno por ciento. Y anestesie la superficie del ojo con proparacaína al 0,5 por ciento. Luego, use las tijeras para cortar los bigotes cerca del hocico en el lado de la inducción, para permitir una vista clara del ojo.A continuación, coloque una gota de metilcelulosa al uno por ciento, u otra gota oftálmica acopladora, en el interior de la lente de contacto hecha a medida. Luego aplique la lente sobre el ojo de la rata. Coloque el animal sobre una plataforma ajustada a la altura del biomicroscopio de hendidura.Coloque la cabeza del animal en un ángulo de 45 grados, de modo que el ojo quede perpendicular a la lámpara de hendidura y al haz láser. Luego, visualice el ojo mediante la lámpara de hendidura oftálmica. En un ojo sano, la cabeza del nervio óptico presenta un borde definido y un entorno rojizo. Además, los vasos retinianos son delgados y están distribuidos uniformemente.Asegúrese de que el haz de alineación tenga el tamaño correcto, y de que esté enfocado y centrado directamente sobre el nervio óptico visualizado. Luego, fotografíe el fondo de la retina utilizando la cámara digital.A continuación, inyecte un miligramo por kilogramo de verde de rosanilina por vía intravenosa a través de la vena de la cola. Y espere 30 segundos. Una inyección suave, continua e intervaneosa de verde de rosanilina debe ir seguida, tras 30 segundos, por la exposición láser de la cabeza del nervio óptico.La variación en el tiempo entre estos dos pasos da como resultado un aumento en la variabilidad del grado de daño por accidente cerebrovascular en el nervio óptico, lo cual puede sesgar sus resultados. Después de 30 segundos, active la potencia del láser.El nervio óptico muestra un brillo dorado dentro de los vasos, que emerge del disco en el punto de impacto del láser. Esto indica la presencia de rojo de bengala en la corriente sanguínea, iluminado por la luz láser verde. Inmediatamente después de la inducción, retire la lente de contacto y cubra ambos ojos con una pomada oftálmica triple antibiótica y dexametasona.Mantenga al animal individualmente en una jaula sobre una plataforma calefactora a 37 grados Celsius, bajo observación estrecha hasta la recuperación completa. Esta imagen de fondo en color muestra hinchazón del nervio óptico y palidez de la papila óptica, con pérdida del enrojecimiento coroideo circundante.Las venas están agrandadas y curvadas. Esta imagen de SDOCT de la cara n, posterior a la inducción, muestra edema del disco y dilatación venosa. La dirección del escaneo se indica con una flecha verde; la sección transversal en la siguiente imagen se genera a partir del interior del cuadro verde.Aquí, una sección transversal muestra edema del disco del nervio óptico, evidenciado por una intensidad gris reducida y un aumento en el grosor de la capa de fibras nerviosas retinianas. Coherente con un mayor contenido de agua. El diámetro del nervio óptico intrarretiniano, indicado entre las flechas negras, está aumentado.Al realizar este procedimiento, es importante recordar contar con una lente de contacto limpia y pulida, o cubreobjetos, que permita una buena visualización del nervio y un enfoque preciso de la luz láser sobre el nervio. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como inmunohistoquímica, análisis de citoquinas o análisis de expresión génica para responder preguntas adicionales.Como las respuestas inflamatorias tras un accidente cerebrovascular, o los cambios en los tejidos diana.

the-rodent-model-nonarteritic-anterior-ischemic-optic-neuropathy

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este protocolo indica cómo etiquetar retrógradamente las células ganglionares de la retina, y cómo hacer posteriormente una lesión del nervio óptico aplastar con el fin de analizar la supervivencia de células ganglionares retinianas y apoptosis. Se trata de un modelo de enfermedad experimental para los diferentes tipos de neuropatía óptica, incluyendo el glaucoma.

Un aplastamiento del nervio óptico Lesiones modelo murino para estudiar la supervivencia de células ganglionares retinianas

El objetivo de este protocolo es inducir fotoquímicamente lesión isquémica en el nervio óptico posterior, en la rata. Este modelo es fundamental para los estudios de la fisiopatología de la neuropatía óptica isquémica posterior, y los enfoques terapéuticos para esta y otras neuropatías ópticas, así como de otras enfermedades isquémicas del SNC.

Rata Modelo de neuropatía óptica isquémica posterior inducida por Fotoquímicamente

Aquí, presentamos el protocolo de neovascularización coroidea (CNV) inducida por láser en ratones, un modelo experimental que recrea las características vasculares de la degeneración macular relacionada con la edad (DMAE) neovascular. Una vez dominado, puede inducir de forma fiable y eficaz la CNV como sistema modelo para probar diversas medidas experimentales.

Un modelo de ratón para inducida por láser neovascularización coroidea

El glaucoma se caracteriza por daño a las células ganglionares de la retina. La inducción de glaucoma en modelos animales puede proporcionar información sobre el estudio de esta enfermedad. Aquí, describimos un procedimiento que induce la pérdida de RGCs en un modelo de rata in vivo y demostramos la preparación de retinas de montaje completo para el análisis.

Glaucoma de inducir en un Procedimiento<em&gt; En Vivo</em&gt; Modelo de rata y Todo el montaje-Retina Preparación

Degeneración secundaria de las células ganglionares de la retina (RGCs) ocurre comúnmente en glaucoma. Este estudio describe un enfoque innovador de la operativo de transección parcial del nervio óptico. El uso de este acercamiento operativo de ahorro de espacio amplía la gama de aplicación y permite la exploración de los mecanismos de lesión secundaria en RGCs en una nueva forma.

Transección parcial del nervio óptico en ratas: un modelo con un nuevo enfoque operativo para evaluar la degeneración secundaria de las células ganglionares de la retina

Aquí, presentamos un protocolo para inducir hipertensión ocular y neurodegeneración glaucomatosa en los ojos del ratón por inyección intracameral de aceite de silicona y el procedimiento para la eliminación de aceite de silicona de la cámara anterior para devolver la presión intraocular elevada a Normal.

Un modelo de hipertensión ocular inducida por aceite de silicio reversible en ratones

La retinopatía inducida por oxígeno (OIR) se puede utilizar para modelar enfermedades retinianas isquémicas como la retinopatía de la prematuridad y la retinopatía diabética proliferativa y para servir como modelo para estudios de prueba de concepto en la evaluación de fármacos antiangiogénicos para enfermedades neovasculares. OIR induce neovascularización robusta y reproducible en la retina que se puede cuantificar.

Modelo de retinopatía inducida por oxígeno para enfermedades retinianas isquémicas en roedores

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

Este artículo presenta instrucciones detalladas para realizar el aplastamiento del nervio óptico en un modelo de conejo utilizando técnicas quirúrgicas oftálmicas estándar.

Un enfoque quirúrgico para el aplastamiento del nervio óptico en un modelo de conejo

Este protocolo describe una técnica única que utiliza un abordaje transconjuntival para acceder al nervio óptico de rata para inyecciones.

Abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata

Aprende a crear el modelo rNAION en roedores para estudiar mecanismos de respuesta al ictus del nervio óptico. Esta técnica indolora permite evaluar agentes neuroprotectores y analizar edema e inflamación post-ictus.

El modelo de roedor de la anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (rNAION)

Explorar más videos