Simétrica bihemisférica post-mortem del cerebro de corte para estudiar sana y patológica condiciones cerebrales en humanos

El objetivo general de este procedimiento es recopilar y analizar sistemáticamente una serie constante de regiones cerebrales disecadas simétricamente a partir de ambos hemisferios del cerebro humano, con el fin de evaluar la gravedad, la clasificación clínico-patológica y la distribución hemisférica de diversas enfermedades cerebrales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neuropatología, proporcionando una recopilación sistemática de datos neuropatológicos cualitativos y cuantitativos para realizar correlaciones detalladas entre la clínica y la patología, así como entre imágenes y patología. La principal ventaja de esta técnica radica en que proporciona datos relevantes relacionados con los procesos patológicos en sí mismos, así como con el aspecto histofuncional especializado de cada hemisferio cerebral.

Después de fijar el tejido cerebral humano post mortem según el protocolo descrito, coloque el cerebro sobre una superficie plana con los polos frontales orientados en dirección opuesta al investigador. Oriente el cerebro para permitir una visualización completa y clara de todos los giros y surcos corticales de todo el cerebro. Examine el tejido en busca de anomalías meníngeas, asimetrías hemisféricas macroscópicas, adhesiones macroscópicas del tejido, malformaciones congénitas, anomalías vasculares o cualquier otra anormalidad o presentación inusual de la superficie cerebral.

Con los polos frontales orientados lejos del investigador y las superficies superficiales de los hemisferios enfrentando al investigador, tome tantas imágenes digitales como sean necesarias para documentar posibles anomalías macroscópicas y tener en cuenta consideraciones clínicas, neuronales, anatómicas y posteriores al corte. Tome imágenes digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Luego, utilizando tinta o agujas de colores, marque los giros corticales pre y poscentral.

A continuación, manteniendo aún los polos frontales orientados hacia afuera, gire el cerebro 180 grados y examine cuidadosamente la base del cerebro, prestando especial atención a los sistemas cerebrovasculares y a los nervios craneales en los niveles de salida y entrada del tronco encefálico. Manipule los bulbos y los tractos olfatorios con especial cuidado para evitar laceraciones tisulares debido a su extrema fragilidad. Tome fotografías digitales perpendiculares al cerebro para capturar en su totalidad las superficies corticales y del tronco encefálico.

Frente a la base del cerebro y utilizando un escalpelo, corte transversalmente el tronco encefálico en la porción superior del puente, lo más cerca posible de la base del cerebro. Inspeccione cuidadosamente la sustancia negra en busca de palidez y examine otras estructuras vecinas. Utilizando un dispositivo de grabación de audio, anote cualquier apariencia inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.

Aquí se está diseccionando el bulbo y el tracto olfativo de los hemisferios izquierdo y luego derecho. Gire el cerebro nuevamente y, utilizando un cuchillo afilado, siga una dirección fronto-occipital para separar los dos hemisferios cortando el cuerpo calloso centralmente a través de la fisura longitudinal medial. Inspeccione cada lado de cada hemisferio en busca de posibles anomalías.

Después de tomar todas las fotografías necesarias, incluyendo imágenes perpendiculares al cerebro para capturar toda la superficie cortical, coloque los dos hemisferios planos sobre sus caras mediales con los lóbulos frontales orientados en dirección opuesta al investigador y con sus centros en contacto. Utilizando un cuchillo afilado, corte manualmente a través de ambos hemisferios cerebrales comenzando en los polos frontales y avance hacia los polos occipitales a lo largo de toda la longitud de los hemisferios, obteniendo así dos series de bloques de tejido cerebral de un centímetro de grosor. Coloque los bloques cerebrales en una secuencia anatómicamente organizada y simétrica sobre una superficie plana blanca que incluya una regla impresa para su fotografía.

Asegúrese de que las superficies coronales del bloque estén visibles para la inspección visual directa y la fotografía digital. Utilice superficies de corte con cuadrículas milimétricas impresas en ambos lados para localizar de manera más precisa las estructuras cerebrales, tamaños y posibles anomalías. Con las superficies coronales visibles, tome fotografías digitales perpendicularmente para capturar toda la superficie cortical.

Tome nota de cualquier aspecto inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal. A continuación, utilizando un escalpelo afilado, seccione manualmente pequeños bloques rectangulares de tejido cerebral para cada región cerebral establecida. Siga el esquema propuesto para la recolección de regiones cerebrales descrito en esta tabla.

Cree los códigos identificadores para etiquetar las casetes de histología generando números aleatorios o semi-aleatorios para cada caso, donde AD representa el Estudio de la Enfermedad de Alzheimer, 16 corresponde al año en que se realizó la autopsia y 0001 es un número progresivo de acceso del espécimen. Coloque cada bloque de tejido en casetes de histología separadas. Tome tantas fotografías digitales como se describió anteriormente del cerebro cortado completo y de las casetes de histología asociadas.

Después de tomar un conjunto completo de imágenes, retire fragmentos de tejido de dos a cinco milímetros para la extracción de ADN y el análisis genético. Finalmente, sumerja todas las cassettes histológicas que contienen bloques de tejido cerebral en el mismo tipo de solución fijadora utilizada previamente y procese el tejido según el protocolo descrito en el texto. Esta tabla describe algunos datos preliminares semicuantitativos mediante un procedimiento de corte cerebral biaxial simétrico realizado en una serie de cerebros humanos recolectados en el banco de cerebros.

Los datos preliminares muestran que la mayoría de los cerebros de control de sujetos mayores eran en realidad positivos para placas neuríticas beta-A y ovillos neurofibrilares de tau, y que los niveles de placas neuríticas beta-A insolubles eran más altos en el cortex entorrinal izquierdo y el hipocampo en comparación con las mismas regiones cerebrales del lado derecho. Una vez dominada, esta técnica puede completarse en una hora para cerebros fijados y en dos horas para cerebros frescos si se realiza adecuadamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar seguir el esquema de corte propuesto y recolectar cada región cerebral de ambos hemisferios basándose en un conocimiento preciso de la anatomía humana.

Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la extracción de ADN, ARN o proteínas para responder preguntas adicionales, tales como cuáles son los niveles de activación de un gen específico en una región cerebral específica, en un hemisferio específico y en una enfermedad cerebral específica. Con cada difusión, esta técnica allanará el camino para que los investigadores en el campo de la neuropatología, la patología clínica y la correlación entre patología e imagenología exploren los aspectos patológicos relacionados con el hemisferio en diversas enfermedades neuropsiquiátricas. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo recolectar regiones anatómicas específicas de ambos hemisferios del cerebro humano para evaluar la gravedad de la enfermedad, la etapa patológica de la enfermedad y la distribución hemisférica de diferentes procesos neuropatológicos.

No olvide que trabajar con el cerebro humano implica trabajar con la historia de una persona con circuitos neuroanatómicos complejos y posiblemente con diferentes enfermedades, y que las cuchillas, escalpelos y el formaldehído deben manipularse con extrema precaución.