Simétrica bihemisférica post-mortem del cerebro de corte para estudiar sana y patológica condiciones cerebrales en humanos

El objetivo general de este procedimiento es recolectar y analizar sistemáticamente una serie constante de regiones cerebrales disecadas simétricamente de ambos hemisferios del cerebro humano con el fin de evaluar la gravedad, la estadificación patológica clínica y la distribución hemisférica de diversas enfermedades cerebrales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neuropatología, proporcionando una colección sistemáticamente organizada de datos neuropatológicos cualitativos y cuantitativos para correlaciones patológicas clínicas y de imagen detalladas. La principal ventaja de esta técnica consiste en obtener datos relevantes relacionados con los procesos patológicos per se, así como con el aspecto histofuncional especializado de cada hemisferio cerebral.

Después de fijar el tejido cerebral humano post-mortem de acuerdo con el protocolo de texto, coloque el cerebro en una superficie plana con los polos frontales dirigidos hacia el lado opuesto del investigador. Orientar el cerebro para permitir la visualización completa y clara de todos los giros corticales y surcos de todo el cerebro. Examinar el tejido en busca de anomalías meníngeas, asimetrías macroscópicas hemisféricas, alianza de tejido macroscópico, malformaciones congénitas, anomalías de los vasos o cualquier otra anomalía o presentación inusual de la superficie cerebral.

Con los polos frontales orientados lejos del investigador y los aspectos superficiales de los hemisferios orientados hacia el investigador, tome tantas fotografías digitales como sea necesario para documentar las posibles macroanomalías y tener en cuenta las posibles consideraciones clínicas, neuronales, anatómicas y posteriores al corte. Tome imágenes digitales perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical. Luego, usando tinta o agujas de colores, marque los giros corticales centrales pre y post.

A continuación, con los polos frontales aún hacia afuera, voltee el cerebro 180 grados y luego inspeccione cuidadosamente la base del cerebro prestando especial atención a los sistemas cerebrovasculares y los nervios craneales en los niveles de salida y entrada del tronco encefálico. Manejar los bulbos y tractos olfativos con especial cuidado para evitar la laceración de los tejidos debido a su extrema fragilidad. Tome fotografías digitales perpendicularmente al cerebro para capturar la totalidad de las superficies corticales y del tronco encefálico.

Mirando hacia la base del cerebro y con un bisturí, corte el tronco encefálico transversalmente en la parte superior de la protuberancia lo más cerca posible de la base del cerebro. Inspeccione cuidadosamente la sustancia negra en busca de palidez e inspeccione otras estructuras vecinas. Usando un dispositivo de grabación de audio, tome nota de cualquier apariencia inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal.

Aquí, se disecciona el bulbo olfatorio y el tracto de los hemisferios izquierdo y luego derecho. Voltee el cerebro hacia atrás y, con un cuchillo afilado, siga una dirección fronto-occipital para separar los dos hemisferios cortando el cuerpo calloso centralmente a través de la fisura longitudinal medial. Inspeccione cada lado de cada hemisferio en busca de posibles anomalías.

Después de tomar tantas imágenes como sea necesario, incluso perpendicularmente al cerebro para capturar toda la superficie cortical, coloque los dos hemisferios planos sobre sus aspectos mediales con los lóbulos frontales de espaldas al investigador y con sus centros tocándose. Con un cuchillo afilado, corte manualmente ambos hemisferios cerebrales comenzando en los polos frontales y muévase hacia los polos occipitales a lo largo de toda la longitud de los hemisferios para obtener dos series de losas de tejido cerebral de un centímetro de grosor. Coloque las losas cerebrales en una secuencia anatómicamente organizada y simétrica sobre una superficie blanca plana con una regla impresa en ella para fotografiarlas.

Asegúrese de que las superficies coronales de la losa sean visibles para la inspección visual directa y la fotografía digital. Utilice superficies de corte con cuadrículas milimétricas impresas en ambos lados para localizar las estructuras cerebrales, los tamaños y las posibles anomalías de una manera más precisa. Con las superficies coronales visibles, tome fotografías digitales perpendicularmente para capturar toda la superficie cortical.

Toma notas de cualquier aspecto inusual del cerebro en comparación con un cerebro normal. A continuación, con un bisturí afilado, diseccione manualmente pequeños bloques rectangulares de tejido cerebral para cada región cerebral establecida. Siga el esquema de recolección de la región cerebral propuesto que se describe en esta tabla.

Cree los códigos de identificación para etiquetar los casetes de histo generando números aleatorios o semialeatorios para cada caso, donde AD significa Estudio de la Enfermedad de Alzheimer, 16 representa el año en que se realizó la autopsia y 0001 es un número de muestra de acceso progresivo. Coloque cada bloque de pañuelos en casetes histo separados. Tome tantas fotografías digitales como se describió anteriormente de todo el cerebro cortado y de los casetes histo asociados.

Después de tomar un conjunto completo de imágenes, perfore piezas de tejido de dos a cinco milímetros para la extracción de ADN y el análisis genético. Finalmente, sumerja todos los casetes de histo que contengan bloques de tejido cerebral en el mismo tipo de solución fijadora que se usó anteriormente y procese el tejido de acuerdo con el protocolo de texto. Esta tabla describe algunos datos semicuantitativos preliminares utilizando un procedimiento de corte cerebral bihemisférico simétrico realizado en una serie de cerebros humanos recolectados en el banco de cerebros.

Los datos preliminares muestran que la mayoría de los cerebros de control de sujetos mayores eran en realidad positivos para placas neuríticas beta-A y ovillos tau-neurofibrilares, y que los niveles de placas neuríticas insolubles de beta-A eran más altos en la corteza entorrinal izquierda y el hipocampo en comparación con las mismas regiones cerebrales en el lado derecho. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en una hora para los cerebros fijos y en dos horas para los cerebros frescos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar seguir el esquema de corte propuesto, recolectar cada región cerebral de ambos hemisferios en función del conocimiento anatómico humano preciso.

Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la extracción de ADN, ARN o proteínas para responder preguntas adicionales, como cuáles son los niveles de activación de un gen específico en una región específica del cerebro en un hemisferio específico en una enfermedad cerebral específica. Con cada difusión, esta técnica allanará el camino para que los investigadores en el campo de la neuropatología, la patología clínica y la correlación de la patología de imagen exploren los aspectos patológicos hemisféricos relacionados con diversas enfermedades neuropsiquiátricas. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo recopilar regiones anatómicas específicas de ambos hemisferios del cerebro humano para evaluar la gravedad de la enfermedad, la etapa patológica de la enfermedad y la distribución hemisférica de diferentes procesos neuropatológicos.

No hay que olvidar que trabajar con el cerebro humano es trabajar con la historia de una persona con circuitos neuroanatómicos complejos y posiblemente con diferentes enfermedades y que las cuchillas, los bisturís, el formol deben manipularse con extrema precaución.