Transitoria de la arteria cerebral media oclusión Modelo de accidente cerebrovascular neonatal en ratas P10

El accidente cerebrovascular neonatal es una causa significativa de lesión cerebral temprana que requiere un modelo traslacional con patrones de lesión focal consistentes y alta reproducibilidad para permitir el estudio. Este estudio describe el procedimiento quirúrgico detallado para crear una lesión focal no hemorrágica, unilateral por isquemia-reperfusión en roedores equivalentes a término.

El objetivo general de la oclusión transitoria de la arteria cerebral media en ratas neonatas es proporcionar un modelo traslacional del accidente cerebrovascular en neonatos a término. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la lesión cerebral isquémica neonatal al comprender los mecanismos de lesión y reparación en el cerebro en desarrollo, y cómo podemos modificarlos con diferentes estrategias terapéuticas. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona un modelo fisiológicamente preciso del accidente cerebrovascular isquémico arterial focal en neonatos, y también incluye un componente de reperfusión, que es una parte importante de la progresión de la lesión en neonatos humanos.

La demostración visual de este modelo es fundamental, porque los pasos de esta cirugía pueden ser muy difíciles de aprender. Las representaciones bidimensionales de la anatomía arterial no siempre demuestran adecuadamente la naturaleza compleja de la ramificación tridimensional en la rata. Comience pesando al cachorro para asegurarse de que pesa entre 19 y 21 gramos.

Después de anestesiar al cachorro con isoflurano inhalado de acuerdo con los protocolos aprobados, asegúrese de que no haya respuesta a un pellizco en el pie. Mantenga la temperatura de la superficie corporal con el uso de una almohadilla térmica debajo de la etapa quirúrgica. Asegure al animal en posición supina con cinta adhesiva en las regiones de los hombros.

Utilice hisopos de algodón estériles para frotar el área cervical anterior con etanol al 70%, seguido de un hisopo de solución de povidona yodada. A continuación, infiltre localmente bupivacaína al 0,25% en el sitio de la incisión planificada. Luego, mientras trabaja a través de un estereoscopio, haga una incisión cervical anterior en la línea media de cinco a siete milímetros para exponer la arteria carótida común.

Coloque de dos a cuatro retractores para mantener la cavidad abierta y la arteria expuesta. A continuación, localice la arteria carótida interna, la arteria occipital y la arteria carótida externa. Retire el tejido conectivo y la grasa de las arterias para obtener una visión clara.

Después de cortar 1,5 centímetros de hilo de sutura trenzado de seda 6-0, destrenza la sutura, sacando las hebras individuales. Asegúrate de que las hebras individuales estén limpias y no deshilachadas. Mientras sostiene la tira de sutura dentro de unas pinzas de 45 grados, barra las pinzas en un arco debajo del ICA para que las puntas emerjan entre el ICA y el OA. A continuación, agarre el extremo de la hebra de sutura y tire de él para que el extremo sea de fácil acceso.

Suelte la hebra de las pinzas y retroceda hacia afuera desde debajo de la ICA, invirtiendo el movimiento anterior. Ate una ligadura temporal alrededor del ACI en la base más cercana a donde se separa del ACC. Retraiga con cuidado el ICA lateralmente, luego use un clip para asegurar el mechón retráctil al exceso de piel cerca de la región de la axila en el lado opuesto a la incisión.

Asegúrese de que la hebra retráctil esté lo suficientemente tensa como para detener el flujo sanguíneo antes de continuar con el siguiente paso. La arteria debe ser plana y pálida. Use un fórceps de 45 grados para agarrar otra hebra de sutura sin trenzar y enróllela debajo y alrededor del ICA como antes.

Coloque esta hebra lateral a la hebra de retracción. A continuación, corte una arteriotomía de 0,2 milímetros a medio camino entre las ligaduras atadas y desatadas, errando más cerca de la ligadura atada. Ahora, usando una regla métrica, mida 10 milímetros de sutura de nailon recubierta de silicona como sutura de oclusión.

Corte la sutura con un margen adicional de dos a tres milímetros para retirarla durante la reperfusión. Sostenga la sutura oclusiva con pinzas de 45 grados y use pinzas rectas para crear una curva, marcando el punto de parada del avance. Introduzca la sutura oclusiva en la arteriotomía, apuntándola paralelamente al ECA y hacia la cabeza.

Avance suavemente la sutura hasta alcanzar la curva. A continuación, utilice la hebra colocada lateralmente a la hebra de retracción para atar una ligadura temporal y asegurar la sutura de oclusión. Retire el clip retractor, luego recorte las hebras de ambas ligaduras temporales, dejando la hebra que se usará para quitar el nudo más larga que la hebra utilizada para apretarlo.

Retire los retractores y cierre la cavidad con seda trenzada 6-0 para crear tres o cuatro suturas interrumpidas. Retire al cachorro de la anestesia y colóquelo sobre una almohadilla térmica en el aire ambiente. Monitoree al cachorro hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener el decúbito esternal, y asegúrese de que esté completamente recuperado antes de devolverlo a la madre.

Durante la oclusión, se pueden utilizar imágenes de resonancia magnética ponderadas por difusión para verificar la inducción adecuada de la lesión. Estas imágenes muestran una lesión isquémica en curso, indicada por la flecha, detectada por DW-MRI durante el MCAO. Aproximadamente dos horas y 50 minutos después de la oclusión de la ACM, prepare los materiales quirúrgicos y luego comience el procedimiento de reperfusión anestesiando como antes.

Retire las suturas interrumpidas y localice la unión, que está marcada por las dos ligaduras y el extremo de la cola de la sutura oclusiva. Desate con cuidado el nudo más lateral de la ligadura temporal tirando de la hebra más larga y retire la hebra de sutura de la cavidad. Exactamente tres horas después de la oclusión de la ACM, retire lentamente la sutura oclusiva de la arteria.

No debe haber resistencia. Use fórceps para aplicar presión a la arteriotomía y luego desate con cuidado el nudo medial para restaurar el flujo sanguíneo. Después de retirar la hebra de sutura del cuerpo, aplique un agente hemostático a la arteriotomía para detener el sangrado.

El retorno de la forma original de la arteria y el color rojo confirma que se ha restablecido el flujo sanguíneo de la ICA. Retire los retractores y cierre la cavidad con seda trenzada 6-0 para crear tres o cuatro suturas interrumpidas. Retire al cachorro de la anestesia y permita que se recupere con monitoreo como antes antes de devolverlo a la jaula de la casa.

Inspeccione a los cachorros diariamente durante cinco días. Registre sus pesos e inspeccione de cerca los sitios de las incisiones para verificar una cicatrización adecuada. Estas secciones posteriores a anteriores del cerebro teñidas con violeta de cresilo de 50 micras extraídas de animales P-38 demuestran una lesión bastante grave después de un TMCAO de tres horas en P-10.

La flecha indica la formación de quistes ipsilaterales y la reducción del volumen cortical y estriatal. El orificio redondo en el lado izquierdo representa un identificador de hemisferio contralateral. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que, si bien este procedimiento es conceptualmente simple, el éxito y el dominio pueden llevar horas de optimización y práctica.

Una vez dominada, la oclusión puede completarse en menos de 10 minutos, mientras que la reperfusión puede completarse en menos de cinco minutos.