Name: Desarrollo de un sistema reportero virus de la hepatitis B para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Aprende a desarrollar un sistema reportero del virus de la hepatitis B para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación. Este método facilita el cribado de agentes anti-VHB mediante una estrategia de alto rendimiento.

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Este trabajo fue financiado en parte por el Programa de Investigación sobre Hepatitis de la Agencia Japonesa para la Investigación y el Desarrollo Médico (AMED) y por las Subvenciones para la Investigación Científica del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología (MEXT) de Japón.

1. La producción de recombinante de HBV que codifica la proteína Reportero <ol><li> Preparación de células HepG2 <ol><li> Preparar medio de cultivo celular (medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS), 100 U / ml de penicilina, 100 mg / ml de estreptomicina y 100 aminoácidos no esenciales U / ml). </li><li> La placa 4 x 10 6 células HepG2 en una placa de 10 cm revestido con colágeno en 10 ml de medio de cultivo el día antes de la transfección. Se incuban las células HepG2 a 37 ° C en un 5% humidificado incubadora de CO 2. NOTA: Al de aproximadamente 4 x 10 6 células HepG2 se sembraron en una placa de colágeno recubiertas de 10 cm en 10 ml de medio de cultivo, que será 70 a 90% de confluencia el día siguiente. </li></ol></li><li> La transfección <ol><li> Células HepG2 transfectar con 5 g de epsilon pUC1.2HBV delta 15 y 5 g de pUC1.2HBV / NL 15 utilizando una transfecciónreactivo según las instrucciones del fabricante. </li><li> Al día siguiente, retire el medio de cultivo y añadir 10 ml de medio de cultivo fresco. </li><li> Una semana después de la transfección, transferir el medio de cultivo que contiene el VHB recombinante a un tubo de 50 ml, y continúe con el paso 1.3.1. Añadir 10 ml de medio de cultivo fresco a la placa que contiene las células transfectadas. NOTA: La producción del VHB recombinante se mantuvo durante 4 semanas. El medio de cultivo que contiene HBV recombinante se puede almacenar a 4 ° C durante 1 mes. </li></ol></li><li> Purificación de VHB recombinante <ol><li> Eliminar los restos celulares del medio de cultivo que contiene HBV recombinante por centrifugación (2.300 xg durante 5 min). </li><li> Pasar el sobrenadante a través de un filtro de 0,45 micras membrana. </li><li> Añadir un volumen igual de 26% de PEG / 1,5 M NaCl (polietilenglicol 6000: 130 g, NaCl, 49 g, 1 ml de 0,5 M EDTA pH 8,0 y 5 ml de 1 M HEPES pH 7,6 en 500 ml) al medio de cultivo que contiene recombinanteVHB y mezclar suavemente. Incubar toda la noche a 4 ° C. </li><li> Centrifugar a 2300 xg durante 20 min a 4 ° C. </li><li> Descartar el sobrenadante y disolver el precipitado en 0,5 ml de TNE (Tris 10 mM, NaCl 50 mM, EDTA 1 mM). </li><li> Eliminar los restos por centrifugación a 2.300 xg durante 5 min. </li><li> Cargar 0,5 ml de TNE que contiene HBV recombinante en 0,8 ml de 20% de sacarosa en TNE. </li><li> Se centrifuga a 100.000 xg durante 3 horas a 15 ° C. </li><li> Descartar tanto del sobrenadante como sea posible, y guardar el precipitado. Volver a suspender en 1 ml de DMEM libre de suero por 40 ml de medio de cultivo de partida. </li><li> Incubar toda la noche a 4 ° C. </li><li> Filtrar a través de un filtro de 0,45 micras. Preparar alícuotas de 0,5 ml y se almacena a -80 ° C. NOTA: Si se observa contaminación proteína indicadora de la muestra del virus original, purificar el virus mediante gradiente de densidad ultra centrifugación de 5-30% de sacarosa en TNE a 100.000 xg durante 2 horas, o CsCl de densidad equilibrada centrifugación lado a otrom 1,1-1,6 g / ml a 150.000 xg durante 50 h. </li></ol></li></ol> 2. La infección del VHB recombinante <ol><li> Células HepG2 Cultura de forma estable que expresan PNCT (HepG2 / PNCT) 15 que son susceptibles a la infección por VHB en DMEM suplementado con 10% FBS, 100 U / ml de penicilina, 100 mg / ml de estreptomicina, 250 g / ml de G-418 y 100 U / ml aminoácidos no esenciales a 37 ° C en un 5% humidificado incubadora de CO 2. </li><li> Un día antes de la infección, la placa aproximadamente 5 x 10 4 HepG2 / células Ntcp 14 en una placa recubierta de colágeno de 96 pocillos en 0,1 ml de medio de cultivo. </li><li> VHB recombinante deshielo en un baño de agua a 37 ° hasta que haya un poco de hielo que queda en el vial. </li><li> Preparar el medio para la infección mediante la combinación de los siguientes: 10 l de 40% PEG8000 en fosfato 1x solución salina tamponada (PBS), 2 l de sulfóxido de dimetilo (DMSO), 10 l de VHB recombinante y 78 l de medio de cultivo frescopor pocillo de una placa de 96 pocillos. </li><li> Añadir 100 l de solución de VHB recombinante a un pocillo de la placa de 96 pocillos. </li><li> Un día después de la infección, se lavan las células infectadas 3 veces con 300 l de PBS por pocillo para retirar la proteína indicadora contaminante de la fracción de virus. </li><li> Se incuban las células infectadas en 200 l de medio de cultivo que contiene 2% de DMSO durante una semana o menos. </li></ol> 3. Análisis <ol><li> Una semana después de la infección, se lavan las células infectadas 3 veces con PBS. </li><li> Añadir 50 l de tampón de lisis a las células infectadas. </li><li> Roca la placa de cultivo durante 5 minutos, y luego centrifugar a 2000 xg durante 5 min. </li><li> Añadir 50 l de sustrato reportero en la placa de luminómetro. </li><li> Añadir 20 l de lisado celular a una placa de luminómetro que contiene el sustrato indicador. Mezclar mediante agitación brevemente. </li><li> Colocar la placa en el luminómetro e iniciar la lectura de 15. </li></ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.

El genoma HBV tiene cuatro marcos principales de lectura abiertos (ORFs), incluyendo el núcleo, la polimerasa, de superficie y X ORFs (Figura 1). La transcripción de estos cuatro VHB ORFs está estrechamente regulada por cuatro promotores: el promotor precore / núcleo que contiene potenciador II, promotor S1, S2 promotor y X promotor que contiene promotor de I 18. Los ARNm de 3,5 kb y 3,4 kb se traducen en proteínas pre-core y Core, respectivamente. La proteína de la envoltura gra...

La infección crónica por el virus de la hepatitis B (VHB) es un factor de riesgo importante para las enfermedades hepáticas crónicas 1. Aunque las estrategias terapéuticas actuales se basan en análogos de nucleótidos que inhiben la función HBV pol y / o la administración de interferón de tipo I que activa la respuesta inmune en individuos infectados, así como indirectamente la supresión de la proliferación de HBV a través de funciones de genes de interferón-estimulado 2, estos tratamientos no pueden eliminar HBV ADN completo 3. Por otra parte, la aparición de HBVs que son resistentes a los agentes anti-pol es motivo de preocupación 4. La administración de agentes anti-virales combinados dirigidos directamente los diferentes pasos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o el ciclo de vida del virus de la hepatitis C (HCV) se demostró con éxito para suprimir o erradicar el virus (es). Similar a esta idea, el desarrollo de anti-HBV agente (s) que actúan directamente sobre las diferentes etapas de la HBV ciclo de vida es importante para el establecimiento de futuras terapias VHB. En general, el establecimiento de una sencilla en el sistema de cultivo in vitro del virus objetivo facilita el desarrollo de agentes anti-virus. Sin embargo, hay al menos dos barreras para el desarrollo de sistemas de cultivo in vitro para detectar agentes anti-HBV. El primero es la falta de un sistema conveniente in vitro de células de cultivo para el VHB infección / proliferación. A diferencia de otros virus, como el VIH y el VHC, que se propagan en líneas celulares establecidas, es difícil de cultivar HBV in vitro debido a las limitaciones experimentales incluyendo un estrecho rango de huéspedes. El uso de sistemas de cultivo de células específicas, tales como la línea celular de hepatoma humano HepaRG, que es susceptible a la infección por HBV, 5, 6, 7 se han desarrollado para superar estos problemas. Por otra parte, las células PXB, aisladas de uroquinasa-type activador del plasminógeno transgénico / ratones SCID inoculados con hepatocitos humanos primarios (PHH), se demuestra que es susceptible a la infección por HBV y la replicación 8. Sin embargo, los niveles de replicación del VHB en HepaRG dependen del estado de diferenciación celular después del cultivo, lo que puede causar que los resultados inconsistentes e irreproducibles de los niveles de infección / replicación del VHB. PXB se utiliza comúnmente para experimentos de infección de HBV, pero está limitada por su disponibilidad. Una línea celular de expresión VHB inducible de tetraciclina, HepAD38, también ha sido ampliamente utilizado para estudiar la replicación del VHB, pero este sistema sólo permite la evaluación después de la transcripción y no en la etapa de entrada de la infección por HBV 9. Recientemente, la identificación de polipéptido cotransportador de taurocolato de sodio (PNCT) como un receptor funcional para HBV ha permitido el desarrollo de un sistema de cultivo de HBV variable de 10. De hecho, la expresión en células de hepatocarcinoma PNCT no susceptibles tales como Huh7 yHepG2 permite la infección por VHB 10 y por lo tanto, la elección de líneas de células susceptibles de HBV se ha ampliado, la resolución de muchas de las limitaciones experimentales. El segundo problema es la falta de un sistema de ensayo sencillo para evaluar la infección por VHB y la replicación. Evaluación de la infección por VHB se realiza normalmente mediante el análisis VHB ADN, ARN y proteínas. Sin embargo, la cuantificación de estos marcadores de virus es mucho tiempo, a menudo costoso y no siempre es sencillo. Por lo tanto, el desarrollo de un sistema de ensayo simple, como el uso de un gen indicador, podría superar los problemas asociados con sistemas de ensayo de HBV. Sin embargo, debido a que el tamaño del genoma que puede ser empaquetado en una cápside de HBV se limita - menos de 3,7 kb 11 - el tamaño de un gen indicador debe ser tan corto como sea posible. Por otra parte, la presencia de múltiples elementos cis dispersos por todo el genoma, que son esenciales para la replicación viral, limita las posiciones disponibles en el<html> la inserción del gen informador en el genoma. Varios informes han tratado de insertar genes extraños, incluyendo el VIH-1 Tat, proteína fluorescente verde, y DsRed, en el genoma de HBV 11, 12, 13. Sin embargo, estos HBVs recombinantes no son útiles para la detección de HBV infección / replicación, o para el cribado de alto rendimiento de los factores que afectan a la infección por VHB / replicación. Esto es principalmente debido a la baja productividad de virus recombinantes y la reducción de la intensidad de expresión del gen indicador causada por la producción de virus ineficiente. Para superar estos problemas, se construyó un reportero de VHB con un alto rendimiento de la producción de virus. Este virus es altamente sensible para el seguimiento de las primeras etapas del ciclo de replicación de HBV, desde la entrada a la transcripción. Para lograr esto, NanoLuc (NL) fue elegido como un gen marcador, ya que es un pequeño (171 aminoácidos) diseñados reportero luminiscenteclass = &quot;xref&quot;&gt; 14. Además, NL es aproximadamente 150 veces más brillante que la luciérnaga o luciferasa de Renilla, y la reacción luminiscente es independiente de ATP, lo que sugiere que la tasa de éxito falsa será baja para cribado de alto rendimiento. La eficiencia de la producción de la HBV recombinante es de aproximadamente 1/5 de los padres HBV, y similar a los niveles reportados para los virus recombinantes de HBV anteriores; sin embargo, el brillo de NL supera problemas de productividad virus para que pueda ser utilizado para el cribado en masa de agentes anti-HBV. Cribado de agentes anti-HBV utilizando hepatocitos primarios, HepaRG, HepAD38 y hepatocitos PNCT-transducidas podría ser útil para el cribado de agentes anti-VHB por método (s) convencional. Sin embargo, el sistema descrito aquí tiene varias ventajas, tales como el manejo sencillo, alta sensibilidad y bajo costo para el cribado. Estas ventajas son adecuados para ensayos de alto rendimiento para desarrollar e identificar nuevos agentes de HBV con fines terapéuticos.

<table><tbody><tr><td>Ensayo de luciferasa nano-glo Regent</td><td>Promega</td><td>N1110</td><td></td></tr><tr><td>Solución mixta de penicilina-estreptomicina</td><td>Nacalai tesque</td><td>09367-34&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MEM Solución de Aminoácidos No Esenciales</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11995065</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I Medio de suero reducido</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>100 mm/plato recubierto de colágeno</td><td>Iwaki</td><td>4020-010</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000 Reactivo de transfección</td><td>Thermo Fisher Scientific L3000001</td><td>&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenglicol (PEG) 6000&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81255</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenglicol (PEG) 8000&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Nacalai tesque</td><td>31319-45&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0,5 mol/L EDTA Solución</td><td>Nacalai tesque</td><td>06894-14</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Nacalai tesque</td><td>35434-21</td><td></td></tr><tr><td>Millex-HP, 0,45 &mu; m, de polietétersulfona, de filtro</td><td>Merck Millipore</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 pocillos recubierta de colágeno</td><td>Corning</td><td>NO3585</td><td></td></tr><tr><td>Lisis pasiva 5x Tampón</td><td>Promega</td><td>E1941</td><td></td></tr><tr><td>GloMax 96 Microplaca Luminómetro</td><td>Promega</td><td>E6501</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Nacalai tesque</td><td>30403-55</td><td></td></tr><tr><td>Placa luminométrica</td><td>Greiner bio-one</td><td>655075</td><td></td></tr><tr><td>HepG2-NTCP1-myc-clone22</td><td>-</td><td>-</td><td>Referencia 15</td></tr><tr><td>pUC1.2HBV delta epsilon</td><td>-</td><td>-</td><td>Referencia 15</td></tr><tr><td>pUC1.2HBV/NL-</td><td></td><td>-</td><td>Referencia 15</td></tr><tr><td>tubo de 50 ml</td><td>Violamo</td><td>1-3500-02</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Myc anticuerpo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3956</td><td></td></tr><tr><td>HBIG</td> Organización <td>Japonesa de Productos</td> <td>Sanguíneos-IFN</td><td></td></tr><tr><td>-&beta;</td><td>Mochida Pharmaceutical</td><td>14987224005413</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr></tbody></table>

desarrollo de un sistema reportero virus de la hepatitis b para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Actualmente, es posible construir formas recombinantes de varios virus, como el virus de la inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) y el virus de la hepatitis C (VHC), que llevan genes extraños como una proteína reportera o marcador en sus genomas. Estos virus recombinantes suelen imitar fielmente el ciclo de vida del virus original en las células infectadas y muestran la misma dependencia del rango de huéspedes. El desarrollo de un virus recombinante permite el cribado eficaz de inhibidores y la identificación de factores específicos del huésped. Sin embargo, hasta la fecha la construcción del virus recombinante de la hepatitis B (VHB) ha sido difícil debido a varias limitaciones experimentales. La principal limitación es el tamaño compacto del genoma del VHB, y un tamaño de genoma bastante estricto que no supera los 1,3 tamaños de genoma, que deben empaquetarse en viriones. Por lo tanto, el tamaño de un gen extraño que se va a insertar debe ser inferior a 0,4 kb si no se va a realizar una deleción del ADN del genoma. Por lo tanto, para superar esta limitación de tamaño, se requiere la deleción de parte del ADN del VHB. Aquí, reportamos la construcción de un gen reportero recombinante del VHB que codifica para monitorear la etapa temprana del ciclo de replicación del VHB mediante la sustitución de parte de la región codificante del núcleo del VHB con el gen reportero mediante la eliminación de parte de la región codificante pol del VHB. La detección de la infección recombinante por el VHB, monitorizada por la actividad del reportero, fue muy sensible y menos costosa que la detección mediante los métodos convencionales actualmente disponibles para evaluar la infección por el VHB. Este sistema será útil para una serie de aplicaciones, incluido el cribado de alto rendimiento para la identificación de inhibidores del anti-VHB, factores del huésped y células susceptibles al virus.

La Figura 1 muestra un esquema del genoma HBV, los ARN transcritos, proteínas del virus y su región codificante en el genoma. El gen informador y su ubicación en el genoma también se indican. Figura 2 muestra el plásmido reportero y ayudante plásmido HBV que contiene el gen reportero. El reportero pUC1.2HBV / NL se construyó mediante la supresión de las posiciones de nucleótidos 223 a 811 desde el sitio de iniciación de la transcripción del ARNm de preCo...

Aquí se describe un virus de la hepatitis B de nuevo desarrollo sistema indicador (HBV) para supervisar las primeras etapas del ciclo de vida de HBV. Esta simplificado sistema in vitro ayudará en la selección de agentes anti-HBV utilizando una estrategia de alto rendimiento.

Desarrollo de un sistema reportero virus de la hepatitis B para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

El objetivo general de este sistema de reportero de VHB recombinante es facilitar la realización de cribados masivos de agentes antihepatitis B, o VHB. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del VHB, como el cribado de agentes anti-VHB y la identificación de factores del huésped relacionados con el VHB. La principal ventaja de esta técnica es que el sistema de reportero de VHB puede monitorear las etapas iniciales del ciclo de replicación del VHB.Después de preparar el medio de cultivo celular, el día anterior a la transfección, coloque cuatro veces 10 a la seis células HepG2 en medio sobre un plato de 10 cm recubierto con colágeno. Incube las células a 37 grados Celsius en un incubador húmedo con 5 %CO2. Utilizando un agente de transfección según las instrucciones del fabricante, transfecte las células con 5 mcg de pUC1 2HBV delta epsilon y 5 mcg de pUC1 2HBV/NL.Al día siguiente, retire el medio de cultivo y agregue 10 mL de medio de cultivo fresco. Luego, una semana después de la transfección, transfiera el medio de cultivo que contiene el VHB recombinante a un tubo de 50 mL. A continuación, agregue 10 mL de medio de cultivo fresco a la placa que contien

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Nishitsuji, H., et al. Desarrollo de un sistema de reportero del virus de la hepatitis B para monitorear las primeras etapas del ciclo de replicación. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la producción y purificación de partículas recombinantes del virus de la hepatitis B, permitiendo preparaciones virales seguras y deficientes en replicación para estudiar los eventos iniciales de la infección y para aplicaciones de cribado de alto rendimiento de fármacos antivirales.

Producción y purificación de partículas recombinantes del virus de la hepatitis B

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

Este video muestra una técnica in vitro para detectar la infección por el virus de la hepatitis B (VHB) a través de un sistema indicador recombinante del VHB. Al infectar las células huésped, el genoma viral recombinante expresa la enzima reportera luciferasa, que produce bioluminiscencia al oxidar su sustrato, lo que ayuda a detectar la infección viral.

Un sistema de detección de virus recombinante in vitro para la detección de infecciones virales

El virus de la hepatitis C (VHC) es un importante patógeno humano que causa trastornos hepáticos, como cirrosis y cáncer. Un sistema de cultivo de células infecciosas del VHC es esencial para comprender el mecanismo molecular de la replicación del VHC y desarrollar nuevos enfoques terapéuticos. Aquí describimos un protocolo para investigar varias etapas del ciclo de replicación del VHC.

Un protocolo para el análisis de la hepatitis C de replicación del virus

Se describe el uso de un virus vaccinia reportero fluorescente que permite la medición en tiempo real de la infectividad viral y la expresión génica a través de la expresión de etapa específica de fluoróforos espectralmente distintos reportero. Nos detalle un método basado en la placa para identificar con precisión la etapa en la que la replicación del virus se ve afectada en respuesta a la inhibición pequeña molécula.

Vaccinia Virus Reporter para cuantificar la función viral en todas las etapas de la Expresión Génica

Aquí, presentamos un protocolo que examina pasos específicos de la entrada viral para identificar y evaluar nuevos agentes antivirales.

Ensayos pronta entrada virales para la identificación y evaluación de compuestos antivirales

Aquí describimos la generación en vitro de ADN del VHB a través de un sistema de infección de virus de Hepatitis B y la detección altamente sensible de su integración de (1 – 2 copias) con inversa nested PCR.

Detección de copia baja número DNA Viral integradora formada por In Vitro la infección Hepatitis B

El objetivo de este protocolo es proporcionar una guía paso a paso para realizar experimentos 3D "hígado-en-un-chip" infección con el virus de la hepatitis B.

"Hígado-en-un-Chip" cultivos de hepatocitos primarios y células de Kupffer para infección del Virus de la Hepatitis B

Este manuscrito describe un protocolo detallado para la infección por el virus de la hepatitis B (VHB) en células 293T de ingeniería novedosa (293T-NE-3NR, expresando NTCP humano, HNF4, RXR y PPAR) y células hepáticas tradicionales (HepG2-NE, expresando NTCP humano).

Modelado de la infección por el virus de la hepatitis B en células no hepáticas 293T-NE-3R

Presentamos un protocolo para detectar compuestos contra el virus de la hepatitis B (VHB) dirigidos a las etapas del ciclo de vida de entrada pre y post-viral, utilizando calorimetría de titulación isotérmica para medir la afinidad de unión (KD) con el polipéptido cotransportador de taurocolato de sodio del huésped. La eficacia antiviral se determinó a través de la supresión de los marcadores del ciclo de vida viral (formación de ADNcc, transcripción y ensamblaje viral).

Un modelo competente de hepatocitos que examina la entrada del virus de la hepatitis B a través del polipéptido cotransportador de taurocolato de sodio como objetivo terapéutico

La detección y cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B (VHB) basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real es un método sensible y preciso para diagnosticar y controlar la infección por el VHB. Aquí, presentamos un protocolo para la detección de ADN del VHB y la medición de la carga viral de una muestra.

Detección y cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B basada en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real

Aprende a desarrollar un sistema reportero del virus de la hepatitis B para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación. Este método facilita el cribado de agentes anti-VHB mediante una estrategia de alto rendimiento.

Desarrollo de un sistema reportero virus de la hepatitis B para supervisar las primeras etapas del ciclo de replicación

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