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El análisis de la inducida por la materia particulada ambiental aberraciones cromosómicas El uso ...
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Genetics
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JoVE Journal Genetics
Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

El análisis de la inducida por la materia particulada ambiental aberraciones cromosómicas El uso de una In Vitro Sistema

Full Text
9,244 Views
08:48 min
December 21, 2016

DOI: 10.3791/54969-v

Isabelle R. Miousse1, Igor Koturbash1, Marie-Cécile Chalbot2, Martin Hauer-Jensen3, Ilias Kavouras2, Rupak Pathak3

1Department of Occupational and Environmental Health,University of Arkansas for Medical Sciences, 2Department of Environmental Health Sciences,University of Alabama at Birmingham, 3Division of Radiation Health,University of Arkansas for Medical Sciences

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes techniques for the quantification and characterization of chromosomal aberrations in vitro in RAW264.7 mouse macrophages after treatment with ambient air particulate matter. The method allows for direct visualization of chromosomal damage induced by particulate matter exposure.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Toxicology

Background

  • Particulate matter can have detrimental effects on cellular health.
  • Understanding chromosomal damage is crucial for assessing the impact of environmental pollutants.
  • RAW264.7 cells are a widely used model for studying macrophage responses.
  • Direct visualization techniques enhance the understanding of genetic material damage.

Purpose of Study

  • To detect chromosomal damage induced by exposure to ambient air particulate matter.
  • To evaluate the effects of particulate matter on genetic integrity.
  • To provide a reliable method for assessing cellular damage in vitro.

Methods Used

  • Collection and analysis of ambient air particulate matter.
  • Exposure of RAW264.7 cells to the collected particulate matter.
  • Use of trypsin to dislodge cells for analysis.
  • Visualization of chromosomal aberrations post-exposure.

Main Results

  • Identification of chromosomal aberrations in treated cells.
  • Demonstration of the correlation between particulate matter exposure and genetic damage.
  • Validation of the method for future studies on environmental pollutants.
  • Insights into the mechanisms of particulate matter-induced cellular damage.

Conclusions

  • Particulate matter exposure can lead to significant chromosomal damage in macrophages.
  • The described method is effective for studying genetic damage in vitro.
  • Further research is needed to explore the long-term effects of such exposure.

Frequently Asked Questions

What are chromosomal aberrations?
Chromosomal aberrations are structural alterations in chromosomes that can lead to genetic instability and disease.
Why use RAW264.7 cells for this study?
RAW264.7 cells are a well-established model for studying macrophage biology and responses to environmental stressors.
How does particulate matter affect cells?
Particulate matter can induce oxidative stress and inflammation, leading to cellular damage and genetic mutations.
What is the significance of this research?
This research helps to understand the impact of environmental pollutants on genetic integrity, which is crucial for public health.
What techniques are used to visualize chromosomal damage?
Techniques such as fluorescence microscopy and karyotyping are commonly used to visualize chromosomal damage.
Can this method be applied to other cell types?
Yes, the method can be adapted for use with various cell types to study chromosomal damage.

Este protocolo describe las técnicas para la cuantificación y caracterización de aberraciones cromosómicas in vitro en macrófagos de ratón RAW264.7 después del tratamiento con la materia en partículas del aire ambiente.

El objetivo general de este experimento es detectar el daño cromosómico inducido por la exposición de las células a material particulado, extraído del aire ambiente. Este método puede ayudar a responder una pregunta clave en el campo de la materia particulada, y es si la exposición a la materia particulada induce daño cromosómico. La principal ventaja de esta técnica, es que permite la visualización directa del daño inducido en el material genético.

Después de recolectar y analizar partículas de acuerdo con el protocolo de texto, lleve a cabo la exposición a las partículas calentando el medio de crecimiento completo, tripsina al 0,25% y PBS en un baño de agua a 37 grados centígrados, durante al menos 30 minutos antes del inicio del cultivo. Después de lavar 264,7 células crudas, agregue un mililitro de la solución tibia de tripsina a la placa y desaloje las células del fondo del recipiente de cultivo de tejidos raspando. A continuación, recoja las células y haga una suspensión unicelular mediante pipeteo repetido.

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