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DOI: 10.3791/54980-v
Snezana Vujicic*1,2, Lanfei Feng*1,2, Angelika Antoni3, Joyce Rauch4, Jerrold S. Levine1,2,5
1Section of Nephrology, Department of Medicine,University of Illinois at Chicago, 2Section of Nephrology, Department of Medicine,Jesse Brown Veterans Affairs Medical Center, 3Department of Biology,Kutztown University of Pennsylvania, 4Division of Rheumatology, Department of Medicine,Research Institute of the McGill University Health Centre, 5Department of Microbiology & Immunology,University of Illinois at Chicago
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí, presentamos un protocolo para la determinación de eventos de señalización intracelular inducidos en células viables por interacción física con células muertas o moribundas adyacentes. El protocolo se centra en los eventos de señalización inducidos por el reconocimiento de las células muertas mediado por receptores, en contraposición a su captación fagocítica o liberación de mediadores solubles.
El objetivo general de este procedimiento es identificar eventos de señalización inducidos y células respondedoras viables después de su interacción física con células muertas cercanas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los campos de la biología celular, la patología y la fisiología, como la influencia que las células muertas o moribundas ejercen sobre sus vecinas vivas. Las principales ventajas de esta técnica son que es sencilla y económica, y que se puede aplicar para estudiar los efectos biológicos inducidos en células vivas tras su interacción con células vecinas en apoptosis.
La demostración de la técnica estará a cargo de Lanfei Feng, un técnico de mi laboratorio. Para comenzar este procedimiento, después de pasar las células BUNPT a placas de cultivo de tejidos tratadas con plasma de gas de vacío de 100 milímetros, cultívelas en medio de cultivo A para confluir y humidificar una atmósfera de dióxido de carbono al 5% a 37 grados Celsius. Después de eso, enjuague la monocapa de células adherentes tres veces con el medio de cultivo B. Luego, induzca la apoptosis incubando las células en el medio de cultivo B, que contiene estaurosporina, un inhibidor no selectivo de la proteína quinasa, durante 3 horas a 37 grados Celsius.
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