-Alta resolución respirometría para evaluar la función mitocondrial en células intactas y permeabilizadas

El objetivo general de este procedimiento es utilizar la respirometría de alta resolución para determinar el consumo de oxígeno mitocondrial. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en los síndromes y enfermedades asociadas con la disfunción mitocondrial como; sepsis, diversas enfermedades neurológicas y trastornos relacionados con la edad. Las principales ventajas de esta técnica es que tiene una mayor sensibilidad y la capacidad de realizar ensayos de titulación de sustratos en inhibidores acoplados con un pequeño número de muestras biológicas, como células intactas o permeabilizadas.

La demostración del procedimiento estará a cargo de Sandra Nansoz, una técnica de mi laboratorio. Antes de comenzar el procedimiento, calibre con aire los sensores polarográficos de oxígeno, luego vuelva a suspender las células en el tampón de respiración a una concentración de una por diez a la sexta celdas por mililitro y reemplace el medio de respiración en una cámara del oxígrafo con 2,1 mililitros de la suspensión celular. Cierre la cámara con el tapón y ajuste la barra de agitación magnética en la cámara a 700 rotaciones por minuto.