Intracarotídea inyección de las células del cáncer para Producción de ratón Modelos de metástasis cerebral

El objetivo general de esta inyección microquirúrgica de células cancerosas a través de la arteria carótida es producir modelos experimentales consistentes de metástasis cerebral in vivo en ratones. Por lo tanto, este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la metástasis cerebral, como si una nueva terapia puede mostrar eficacia en el tratamiento de la metástasis cerebral. Por lo tanto, la principal ventaja de esta técnica es que permite la producción de metástasis cerebrales experimentales in vivo con alta reproducibilidad y baja variabilidad.

Por lo general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades al principio porque se necesita una buena cantidad de práctica para mantener una mano firme para inyectar células cancerosas en la arteria carótida de estos ratones bajo el microscopio. Comience este procedimiento sembrando las células cancerosas con medios DMEM F12 suplementados con 10% FPS y cultivándolas durante uno o dos días antes de la inyección. El día de la operación quirúrgica, retire las células de la incubadora y recójalas cuando alcancen el 70% al 80% de confluencia lavándolas con medios sin suero.

A continuación, incube las células con tripsina al 0,25% durante uno o dos minutos a 37 grados centígrados. A continuación, retírelos de la incubadora y añada un 10%FBS que contenga DMEM F12 a las células para apagar la chipsenación. Centrifugar las células a 80 veces G durante tres minutos.

A continuación, retira el medio y lava las células sin suero dos veces para eliminar el suero residual. A continuación, cuente las células con un hemocitómetro y vuelva a suspenderlas en HBSS. Luego, mantenga las células en hielo hasta el momento de la inyección.

En este procedimiento, anestesiar al ratón con un cóctel de ketamina/xilacina mediante inyección intraperitoneal. Confirme la anestesia completa pellizcando las patas del animal y observe la falta de respuesta. A continuación, retira el vello del cuello afeitándote o utilizando una pequeña cantidad de producto depilatorio.

Luego, coloque el mouse en una placa de vidrio y asegúrelo con bandas elásticas. Limpiar la piel aplicando un 70% de alcohol en povidona yodada. Ahora, haz una incisión en la piel de aproximadamente un centímetro de largo con un bisturí quirúrgico.

Luego, diseccione sin rodeos el músculo con pinzas quirúrgicas para exponer la arteria carótida que se encuentra debajo. Separe la arteria carótida del nervio vago adyacente con pinzas quirúrgicas. Después, coloque dos suturas.

Una distal y la proximal a la bola de algodón y hacer nudos sueltos. Apriete el nudo proximal para bloquear el flujo sanguíneo en el lugar de la inyección. Después de eso, humedezca una pequeña bola de algodón con tampón y colóquela debajo de la arteria carótida del sitio de inyección previsto.

Luego, proceda a la inyección de células cancerosas si la arteria carótida en la bola de algodón parece completamente presurizada con sangre roja fresca. En este paso, haga un vórtice y extraiga 100 microlitros de células cancerosas en la jeringa. Bajo el microscopio de disección, inserte lentamente la aguja de calibre 31 con bisel en el lumen de la arteria carótida, colocándola encima de la bola de algodón.

Inyecte lentamente las células de la jeringa en la arteria carótida. El éxito de la inyección se puede observar por el cambio de color de los vasos sanguíneos cercanos y la musculatura cuando las células cancerosas amortiguadas son empujadas a la circulación. Una vez finalizada la inyección, levante suavemente la ligadura distal para evitar la regurgitación.

Luego, apriete rápidamente el nudo distal para completar el proceso de inyección. Después de completar la inyección, apriete las ligaduras y recorte el exceso de sutura de seda con micro tijeras. Mueva hacia atrás el músculo separado para cubrir el sitio de la herida y cierre la piel con dos grapas.

Para la recuperación, transfiera al animal a una almohadilla térmica. A continuación, administrar buprenorfina mediante inyección subcutánea como analgesia postquirúrgica. Una vez que recupere la conciencia y reanude su comportamiento normal, regrese el ratón a su ubicación de alojamiento.

Proporcionar al animal alimento en gel durante varios días después de la cirugía. Estas imágenes muestran que las células de cáncer de mama MDA MB231 modificadas se marcaron con el gen reportero foraise suelto ex-vivo. A partir de las 24 horas posteriores a la inyección de la arteria carótida, el desarrollo de metástasis cerebrales se monitorizó de forma no invasiva mediante imágenes repetidas en vivo con sistemas de imagen.

La cuantificación de los datos de imagen indica una disminución inicial de la carga tumoral después de la inyección de la arteria carótida, seguida de un crecimiento exponencial de la metástasis cerebral hasta que el animal tiene más abundancia. Por lo tanto, lo que se domina es esta técnica, se puede hacer en menos de 10 minutos por cada inyección de ratón si se realiza correctamente. Por lo tanto, al realizar este procedimiento, lo más importante que debe recordar es que debe asegurarse, estudiar y asegurar la colocación de la arteria carótida en la parte superior de la bola de algodón antes de proceder a la inyección de las células cancerosas.

Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como tratamientos terapéuticos, para responder a otras preguntas. Por ejemplo, si un nuevo fármaco sería eficaz para inhibir la metástasis cerebral, se supera. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la metástasis cerebral exploraran cuestiones básicas o traslacionales en modelos experimentales in vivo en ratones.

Por lo tanto, después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo inyectar las células cancerosas en la arteria carótida de ratones para producir un modelo experimental de metástasis cerebral in vivo.