Name: Murino de grosor completo Trasplante de Piel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Aprende el trasplante de piel de espesor completo en ratones para estudiar respuestas aloinmunes y rechazo de injertos. Este modelo reproducible permite evaluar la tolerancia donante-específica mediante inspección directa.

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Este trabajo fue financiado por el NIH subvención R01AI077610.

Todos los procedimientos se realizaron de conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio del Instituto Nacional de Salud (NIH) y fueron aprobados por el Comité de la Universidad Johns Hopkins y Uso Animal Care (JHUACUC). Los procedimientos específicos se realizaron bajo la MO13M292 protocolos ACUC aprobado y MO13M370. 1. Donantes de la cosecha de la piel <ol><li> Anestesiar el ratón donante con isoflurano (vaporizador de inducción en el 4%, el mantenimiento con un 1 - 2% a través del cono del ratón). Utilice el dedo del pie retirada pizca reflejo para controlar la profundidad de la anestesia. </li><li> El uso de una máquina de afeitar eléctrica, afeitarse la parte posterior del animal y desinfectar con 10% de yodo de povidona (por ejemplo, Betadine). </li><li> Con unas tijeras estériles, guantes y una técnica aséptica, piel de la espalda de los donantes de la cosecha desde la cadera hasta el cuello, con disección roma a nivel del tejido conjuntivo laxo. </li><li> La eutanasia a los animales por dislocación cervical después de cosechar elinjerto de piel. </li><li> Bajo el microscopio, separar el tejido conjuntivo, tejido graso, y panículo carnoso de la piel de la espalda con unas tijeras finas tenotomía. El panículo carnoso es un músculo delgado, transparente responsable de los movimientos espasmódicos de la piel. </li><li> Utilizando una técnica estéril instrumentos, cortar los injertos de 15 mm x 15 mm de la piel de la espalda para una de 10 mm x 10 mm a 15 mm x 15 mm lecho del injerto. </li><li> Guarde los injertos sobre gasas empapadas con solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS) en una placa de Petri en hielo. NOTA: 8 - 10 injertos se puede obtener de un ratón donante. </li></ol> 2. receptor de trasplante de piel <ol><li> Anestesiar al ratón receptor con isoflurano (vaporizador inducción a 4%, el mantenimiento con un 1 - 2% a través del cono del ratón). Utilice el dedo del pie retirada pizca reflejo para controlar la profundidad de la anestesia. </li><li> Administrar 0,02 mg / kg de peso corporal de buprenorfina para el alivio del dolor postoperatorio. </li><li> Afeitar el lado de la espalda del animal en el que el wi injertoll ser insertada y desinfectar con povidona yodada al 10%. </li><li> Con unas tijeras, corte a 10 mm x 10 mm a 15 mm x 15 mm cuadrado de piel. El tamaño del defecto debe ser ligeramente mayor (10%) que el injerto. Cortar tan superficialmente como sea posible. Tenga cuidado de preservar el panículo carnoso y vasos. El panículo carnoso puede ser distinguida de la fascia subyacente por su movilidad y los vasos sanguíneos que se ejecutan superficial a ella. </li><li> Coloque el injerto en el lecho del injerto, evitando pliegues a lo largo de los bordes. </li><li> Coloque 8 puntos de sutura en las esquinas y en el centro de cada borde. Para cada sutura, pasar la aguja a través del injerto y luego a través del panículo carnoso del injerto cama debajo de la piel destinatario circundante. </li><li> Retire la máscara anestésica y dejar que el animal se recupere de la anestesia parcialmente antes de aplicar el vendaje adhesivo. </li><li> Envolver el ratón receptor con una venda adhesiva con una gasa doblada sobre el injerto. Hacer el vendaje mediante la combinación de dos vendajes, cortandola parte adhesiva de una y la colocación de las dos almohadillas absorbentes juntos. </li><li> Vigilar estrechamente el ratón durante la recuperación para asegurar que el vendaje no está restringiendo la excursión del tórax y la respiración. Quitar el vendaje si el ritmo respiratorio disminuye o el animal empieza a jadear o respirar superficialmente. </li></ol> 3. Cuidado posoperatorio <ol><li> Administrar enrofloxacina 5 mg / kg después de la cirugía para la profilaxis de infección. </li><li> Coloque el ratón trasplantado en una jaula limpia sobre una almohadilla térmica para microondas hasta que se recupere completamente de la anestesia. </li><li> Observar el ratón durante 1 hora después de la operación antes de devolverlo a la instalación de la vivienda. </li><li> Siete días después de la cirugía, anestesiar el ratón como en el paso 2.1. Retire el vendaje cortando sólo a través de la parte ventral de la venda. </li><li> Observar y palpar el injerto al día siguiente en busca de signos de formación de costras, la contracción, o dureza. Si está presente, el injerto puede no haber logrado vasculariza adecuadación y debe ser considerado como un fallo técnico. </li><li> Supervisar diariamente para detectar signos de rechazo. Considere injertos rechazado cuando ≥90% del tejido de injerto se vuelve necrótico. </li><li> La eutanasia a los animales rechazados y les cosechar para su análisis. </li></ol>

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<li>Oh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Microsurgical+Model+for+Heterotopic%2C+En+Bloc+Chest+Wall%2C+Thymus%2C+and+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice.</a> J Vis Exp. , (2016).</li>
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<li>Lee, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+Allograft+Rejection+by+Targeting+Immune+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism.</a> Cell reports. 13, 760-770 (2015).</li>
<li>Pollizzi, K. N., Powell, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+canonical+and+metabolic+signalling+programmes+in+the+regulation+of+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses.</a> Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).</li>
<li>Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fueling+immunity%3A+insights+into+metabolism+and+lymphocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function.</a> Science. 342, 1242454(2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Desde su introducción por Medawar, primero en estudios humanos y luego en conejos y ratones, el trasplante de piel ha sido un modelo inestimable para el estudio de las respuestas inmunes alogénicas 6,7. En este manuscrito, se presenta un modelo de gran escala, no vascularizado, el trasplante de piel de grosor usando de nuevo la piel superior e inferior. Varios métodos alternativos, incluyendo el uso de la piel de la cola o piel de la oreja del ratón como fuente de tejido de injerto, se ha informado hasta la f...

El trasplante de órganos es el tratamiento de elección para pacientes con insuficiencia orgánica terminal, y los resultados han mejorado notablemente con los avances en procedimientos quirúrgicos y protocolos de inmunosupresión. Sin embargo, la inmunosupresión a largo plazo se asocia con efectos secundarios significativos, y el desarrollo de nuevas estrategias que promueven la tolerancia sigue siendo el objetivo de la investigación trasplante moderna. Numerosos modelos animales se han desarrollado para la investigación básica en el trasplante, para el estudio de los mecanismos de rechazo de aloinjertos y para poner a prueba la inmunosupresión se aproxima a la prevención del rechazo del injerto y para promover la tolerancia a largo plazo 1-3. Los modelos de ratón han convertido en el pilar de la investigación inmunológica debido a la disponibilidad exclusiva y extensa de anticuerpos terapéuticos y de diagnóstico y cepas puras y transgénicos bien definidos. El trasplante de piel es un procedimiento simple que no requiere conocimientos especiales de microcirugía y puedemonitorizar fácilmente después de la operación. En conjunto, el trasplante de piel de ratón ha sido una herramienta excepcional para estudiar muchos aspectos implicados en la respuesta aloinmune, incluyendo la entrega de antígeno, el tráfico de células y la destrucción del tejido durante el rechazo de injerto 4,5. Aquí, se muestra el procedimiento paso a paso para el trasplante de piel de espesor total usando el modelo de ratón, y se describen los pasos son importantes y necesarias para un éxito del injerto de la piel trasplantada.

<table><tbody><tr><td>Micropinzas rectas</td><td>Sigma</td><td>F4017</td><td></td></tr><tr><td>Micropinzas curvas</td><td>Aesculap</td><td>BD333R</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de tenotomía Stevens curvas</td><td>Aesculap</td><td>BC905R</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de disección Mayo Sigma</td><td></td><td>S3146</td><td></td></tr><tr><td>Micro portaagujas</td><td>Aesculap</td><td>BM563R</td><td></td></tr><tr><td>Gasa estéril</td><td>Covidien</td><td></td><td></td>441218</tr><tr><td>6-0 Sutura de nylon</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>Banda de tiras de plástico&#45; Ayuda</td><td>Johnson & Johnson</td><td></td><td>Obtenido de la farmacia</td></tr><tr><td>10 cm Placa de Petri</td><td>Fisherbrand</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Calidad Biológica 119069131</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Número DEA requerido; Obtenido de la farmacia del hospital</td></tr><tr><td>Enrofloxacina</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr></tbody></table>

murino de grosor completo trasplante de piel

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murino de trasplante de todo el espesor de la piel es un modelo in vivo bien establecido para estudiar la respuesta aloinmune y rechazo del trasplante. A pesar de su aplicación limitada a los seres humanos, el trasplante de piel en ratones ha sido ampliamente empleado para la investigación del trasplante. El procedimiento es fácil de aprender y realizar, y que no requiere técnicas de microcirugía delicada ni una amplia formación. Además, el rechazo del injerto en este modelo se produce en una reacción inmunológica muy reproducible y se monitoriza fácilmente mediante la inspección directa y palpación. Además, el trasplante de piel secundaria con injertos de donantes emparejados o de la piel de otro fabricante puede llevar a cabo en modelos de trasplante más complejos como un método alternativo y sin complicaciones para evaluar la tolerancia específica del donante. Las complicaciones son bajos y son, en general, limitada a una sobredosis de anestesia o dificultad respiratoria después del procedimiento. El fracaso del injerto, por el contrario, se produce habitualmente como resultado de una mala preparación de la grpopa, posicionamiento incorrecto en el lecho del injerto, o la colocación inadecuada de la venda. En este artículo, se presenta un protocolo para el trasplante de piel de espesor completo en ratones y describimos los pasos son importantes y necesarias para el éxito del procedimiento.

La colocación del vendaje en el ratón receptor es un paso importante del procedimiento. El injerto de piel se coloca en el tronco receptor, entre el hombro, cadera y columna vertebral (Figura 1). El vendaje se hace con una gasa plegada y la combinación de dos vendas adhesivas de plástico. El ratón receptor se coloca con el injerto hacia abajo sobre la gasa en el centro de la venda. El uso de dos pinzas de micro curvas, el extremo inferior del vendaje se tira primero, y l...

Murino de trasplante de todo el espesor de la piel es un modelo bien establecido para estudiar el rechazo en un entorno aloinmune. A continuación, ofrecemos un tutorial de cada paso que participan en la realización de un c BALB / -&gt; C57BL 6 trasplante de piel / de espesor total.

Murino de grosor completo Trasplante de Piel

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

El objetivo general de este artículo en video es realizar un trasplante de piel de espesor total y describir los pasos importantes necesarios para un procedimiento exitoso. El trasplante de piel de espesor total en ratones es un modelo bien establecido para estudiar las respuestas aloinmunes y el rechazo del injerto. El procedimiento es fácil de realizar y no requiere técnicas microquirúrgicas delicadas.El rechazo del injerto, en este modelo, ocurre como una reacción inmunológica muy reproducible y se puede monitorear fácilmente mediante inspección directa y palpación. Además, se pueden realizar trasplantes cutáneos secundarios con injertos de piel compatibles con el donador o de terceros para crear modelos de trasplante más complejos, como un método alternativo y sencillo para evaluar la tolerancia específica al donador. Después de anestesiar un ratón donador según el protocolo descrito, utilice una maquinilla eléctrica para afeitar la espalda del animal.Y, con povidona- yodo al 10 %, desinfecte la piel. Mediante tijeras y disección romo, obtenga la piel dorsal donante desde la cadera hasta el cuello a nivel del tejido conectivo areolar. Coloque la piel dorsal bajo un microscopio

murine-full-thickness-skin-transplantation

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Investigación

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Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Alogénico de piel el trasplante es un modelo estándar de ensayo de las respuestas de acogida de las células T a los antígenos MHC-donantes dispares. Este vídeo-artículo proporciona un tutorial visual de cada paso involucrado en la realización de un trasplante de BALB/c--&gt; C57BL / 6 la piel.

Trasplante de piel murina

En este informe se describe la piel en tres dimensiones reconstruir el modelo que imita la piel humana en la arquitectura y la composición. Fisiología de los melanocitos, la progresión del melanoma y el destino de las células madre dérmicas han sido investigados con la piel reconstruir el modelo. El modelo es también útil como una herramienta para la evaluación preclínica de medicamentos.

La piel humana tridimensional Reconstrucción del modelo: una herramienta para estudiar la piel normal y la progresión del melanoma

Este video muestra un método para injertar piel humana en un ratón inmunodeficiente con una respuesta de neutrófilos suprimida. El método consiste en aplicar piel humana de espesor dividido al lecho de injerto del ratón, sellarlo y cubrirlo para su recuperación. Eventualmente, la piel humana se adhiere a la piel del ratón, estableciendo la vascularización y la circulación, lo que resulta en un xenoinjerto de piel exitoso.

Una técnica para el injerto de piel humana en un modelo de ratón

La vascularización es clave para enfoques en la ingeniería de tejidos éxito. Por lo tanto, se requieren tecnologías fiables para evaluar el desarrollo de las redes vasculares en los tejidos-construcciones. Aquí presentamos un método simple y rentable para visualizar y cuantificar la vascularización in vivo.

Una piel llena de defectos modelo para evaluar la vascularización de Biomateriales<em&gt; En Vivo</em

El trasplante de piel de cola es un poderoso modelo para estudiar el rechazo dependiente de las células T y la inducción de tolerancia durante las respuestas inmunes alogénicas en ratones. Las ventajas de este protocolo son la cirugía invasiva menor y la facilidad de seguimiento sin necesidad de sacrificar el ratón receptor.

El trasplante de la cola de la piel para el Estudio alogénico de células T CD4 respuestas en ratones

Durante el desarrollo de los mamíferos, las heridas tempranas de la piel durante la gestación se curan sin cicatriz. Aquí detallamos un modelo fiable y reproducible de cicatrización de heridas fetales sin cicatrices en el dorso cutáneo de embriones de ratón E16.5 (sin cicatrices) y E18.5 (cicatrizantes).

Un ratón fetal Modelo de la piel de la reparación de heridas sin cicatrices

El objetivo de este estudio fue desarrollar un modelo murino de cicatrización de la quemadura. Se indujo una quemadura térmica en la piel dorsal de los ratones utilizando una plantilla de latón precalentada. El tejido quemado fue desbridado y superpuesto con un injerto de piel cosechado de la cola de un ratón donante genéticamente similar.

Un modelo murino de una herida de quemadura reconstruida con un injerto de piel alogénico

El presente protocolo describe cómo injertar piel humana en ratones diabéticos no obesos (NOD)-scid receptor de cadena gamma (NSG) con interleucina-2. En el informe se incluye una descripción detallada de la preparación de la piel humana para el trasplante, la preparación de ratones para el trasplante, el trasplante de piel humana de espesor dividido y el procedimiento de recuperación posterior al trasplante.

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El presente trabajo describe una técnica modificada para el trasplante cardíaco vascularizado heterotópico con técnica aséptica actualizada, analgesia y anestesia.

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