Nuevos diagnósticos en artroplastia de revisión: reacción en cadena múltiplex de polimerasa y sonicación del implante

El objetivo general de los procedimientos descritos con aspiración articular, reacción en cadena de la polimerasa múltiple y sonicación es proporcionar resultados microbiológicos rápidos y confiables a los cirujanos ortopédicos en casos de infección sospechosa de articulación próstética periprotésica. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo diagnóstico y terapéutico de la infección de articulación próstética periprotésica, como la detección temprana de patógenos y, por lo tanto, un tratamiento dirigido precoz. La principal ventaja de estas técnicas es la obtención de resultados inmediatos.

Puede acelerar el diagnóstico diferencial en casos de infección sospechosa de articulación prótesica. Coloque al paciente en posición supina sobre una camilla de exploración. Si se va a puncionar la rodilla, coloque un rollo bajo la rodilla del paciente para que esta quede en una posición ligeramente flexionada.

Utilice cortadoras eléctricas para acortar el vello corporal denso o largo. Luego prepare la mesa de instrumentos y vístase para la cirugía según el protocolo descrito en el texto. A continuación, use un desinfectante de la piel para lavar minuciosamente la piel del paciente en el sitio de punción.

Con una gasa estéril fenestrada, cubra el sitio de punción. Luego identifique el sitio de punción a través de la gasa. Utilizando una hoja de bisturí puntiaguda, realice una pequeña incisión punzante a través de la piel en el sitio de incisión.

Conecte la cánula al extremo luer-slip de la jeringa. Luego inserte la cánula a través de la incisión de punción. En el receso superior de la articulación de la rodilla, dirija la cánula en un ángulo de 45 grados hacia dorsal y medial, hacia el receso, por debajo del polo superior de la rótula, e inserte la aguja hasta una profundidad de aproximadamente 5 cm.

Aspire el líquido articular extrayendo el émbolo de la jeringa. Para prevenir la formación de hematomas, coloque un vendaje seguido de una gasa sobre la incisión. Utilice un desinfectante alcohólico para desinfectar la membrana de un frasco pediátrico de cultivo de sangre.

Luego coloque una cánula nueva en la jeringa e inyecte de 1 a 3 mL del líquido articular aspirado en el matraz. Mezcle mediante agitación suave o rotación. Para preparar una muestra nativa de aspirado articular, retire la cánula de la jeringa.

Luego, abra un tubo de recolección de sangre sin aditivos e inyecte 1 mL del aspirado en el tubo de recolección. Coloque y asegure la tapa para el análisis de PCR. Transfiera de 1 a 4 mL del aspirado articular a un tubo de recolección de sangre que contenga EDTA para el recuento y diferenciación celular.

Deshiele el tubo del mezcla maestra dejándolo a temperatura ambiente. Transfiera 180 mcL del espécimen recolectado al tubo de muestra. Cierre el tubo de muestra con la tapa del tubo que contiene la proteína quinasa K y un gen control interno para el control de calidad de todo el flujo de trabajo.

En la cabina, abra el software de operación tocando el botón Nueva Prueba en la esquina inferior izquierda. Utilice la pantalla táctil para ingresar los datos del paciente o un ID de muestra. Para seleccionar la muestra en el menú desplegable, primero elija Cartucho ITI, luego Ortopedia como modo de aplicación y finalmente seleccione Líquido sinovial o Líquido de sonicación como tipo de muestra. A continuación, presione el botón Iniciar.

Escanee el código de barras en la parte inferior del tubo de muestra. Luego inserte el tubo de muestra en el Lysator. A continuación, seleccione la muestra en la pantalla del panel de control para desbloquear el tubo de muestra del Lysator.

Luego, retire el tubo de muestra del Lysator y cierre la tapa superior del Lysator. Transfiera el tubo de muestra al orificio para tubos de muestra del cartucho de PCR. A continuación, inserte el tubo de mezcla maestra descongelado en el orificio para mezcla maestra del cartucho de PCR.

Siga las instrucciones en la pantalla del panel de control para escanear el cartucho de PCR con la mezcla maestra y el tubo de muestra. Inserte el cartucho de PCR en la ranura para cartuchos indicada del analizador. En la pantalla táctil del panel de control, en la esquina inferior izquierda, seleccione Pruebas activas y luego elija el ID de muestra correcto para mostrar los resultados del ensayo.

Guarde los resultados en la memoria de la máquina e imprímalos o expórtelos para futuras referencias. Hable con su microbiólogo y bríndele un resumen de los detalles del caso, para que esté preparado para analizar las muestras de forma inmediata. Bajo una cabina de flujo laminar, abra el recipiente de plástico que contiene la prótesis extraída del quirófano y agregue solución estéril de cloruro de sodio al 0,9 % hasta que el cuerpo extraño extraído quede cubierto al menos en un 80 %. Cierre el recipiente de plástico.

Luego agite o agite vigorosamente el recipiente de plástico durante 30 segundos. Transfiera el recipiente de plástico al baño de sonicación. A continuación, verifique el nivel de líquido en el baño.

Someta la muestra a sonicación durante cinco minutos, con una frecuencia de 40 ± 2 kilohercios y una densidad de potencia de 0,22 ± 0,04 vatios por centímetro cuadrado. Luego, agite o vortexee completamente la muestra durante 30 segundos. Dentro de la cabina de flujo laminar, recoja 50 mL del líquido de sonicación y transfiéralos a un tubo estéril antes de sellar herméticamente el tubo.

Para crear un fluido de sonicación concentrado, centrifugue el tubo a 4200 × g durante 10 minutos, dejando un volumen residual de 10 mL; utilice la pipeta para desechar el sobrenadante restante. Re-suspenda el precipitado mediante pipeteo y vortex. Inocule cada matraz con medio de cultivo adecuado con 0,5 mL de fluido de sonicación concentrado.

Inocule el frasco de hemocultivo pediátrico con 2 mL del líquido concentrado de sonicación, tal como se demostró anteriormente en este video. Luego, transfiera 1 mL del líquido concentrado de sonicación a un tubo estéril sin aditivos para el análisis por PCR. Transfiera el medio de cultivo inoculado al incubador.

Incube las culturas durante 14 días y verifique el crecimiento diariamente. Se consideró confirmada la presencia de una infección articular periprotésica cuando estuviera presente un criterio mayor o al menos tres de los cinco criterios menores. Los criterios mayores incluyen la presencia de una fístula o la detección de un patógeno en dos muestras microbiológicas separadas.

Los criterios menores incluyen recuento positivo de células o diferenciación celular positiva en el aspirado articular, proteína C reactiva positiva y velocidad de sedimentación globular en muestras sanguíneas, histología positiva en las muestras de tejido o detección de un patógeno en tan solo una muestra microbiológica. Los resultados aquí mostraron una sensibilidad moderada para el diagnóstico mediante PCR del líquido de sonicación y del aspirado articular, pero una especificidad muy alta del 100 %. Siempre que la PCR arrojó un resultado positivo en el aspirado articular o en el líquido de sonicación, posteriormente se detectó el mismo patógeno en uno de los cultivos microbiológicos convencionales. La PCR realizada en las diferentes muestras de los casos sin infección no mostró resultados falsos positivos.

Se pasaron por alto seis de los 16 verdaderos patógenos en las muestras de líquido de sonicación y cinco de los 13 patógenos procedentes del cultivo de líquido articular mediante la detección por PCR. El diagnóstico combinado por PCR de ambos materiales, el aspirado articular y el líquido de sonicación, identificó correctamente 12 de los 18 casos de infección. Tras ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo mejorar su trayectoria diagnóstica en la infección de la articulación periprotésica.

Puede observarse cómo los microbiólogos y los cirujanos ortopédicos deben colaborar estrechamente para mejorar tanto como sea posible los diagnósticos diferenciales. Si se realiza correctamente, se obtendrán resultados clínicamente valiosos a partir de la PCR múltiple basada en cartuchos en un plazo de cinco horas tras la artrocentesis. Al realizar este procedimiento, es fundamental recordar trabajar de forma estéril durante todo el proceso.

No olvide que trabajar con especímenes de tejido humano o especímenes microbiológicos puede ser extremadamente peligroso. Siempre se deben tomar todas las precauciones, como el equipo de protección personal, al realizar este procedimiento.