Nuevos diagnósticos en artroplastia de revisión: reacción en cadena múltiplex de polimerasa y sonicación del implante

El objetivo general de los procedimientos descritos con aspiración articular, reacción en cadena de la polimerasa multiplex y sonicación es ofrecer resultados microbiológicos rápidos y fiables a los cirujanos ortopédicos en casos de sospecha de infección articular periprotésica. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo diagnóstico y terapéutico de la infección articular periprotésica, como los hallazgos tempranos de patógenos y, por lo tanto, el tratamiento temprano dirigido. La principal ventaja de estas técnicas es la entrega de resultados rápidos.

Puede acelerar el diagnóstico diferencial en casos de sospecha de infección articular periprotésica. Coloque al paciente en posición supina en una cama de exploración. Si se va a perforar la rodilla, coloque un rodillo debajo de la rodilla del paciente para que la rodilla descanse en una posición ligeramente flexionada.

Use maquinillas eléctricas para acortar el vello corporal denso o largo. A continuación, prepare la mesa de instrumentos y el vestido para la cirugía de acuerdo con el protocolo de texto. A continuación, utilice un desinfectante de la piel para lavar a fondo la piel del paciente en el lugar de la punción.

Con un paño estéril fenestrado, cubra el sitio de punción. A continuación, identifique el lugar de la punción a través de la cortina. Con una hoja de bisturí puntiaguda, haga una pequeña incisión de puñalada a través de la piel en el sitio de la incisión.

Coloque la cánula en el portaobjetos de la jeringa. A continuación, inserte la cánula a través de la incisión de la puñalada. En el receso superior de la articulación de la rodilla, apunte en un ángulo de 45 grados dorsal y medial hacia el receso, por debajo del polo superior de la rótula, e inserte la aguja a una profundidad de aproximadamente 5 cm.

Aspire el líquido articular extrayendo el pistón de la jeringa. Para prevenir la formación de hematomas, aplique un apósito, seguido de un vendaje en la incisión de la puñalada. Use desinfectante alcohólico para desinfectar la membrana de un matraz de hemocultivo pediátrico.

A continuación, coloque una cánula nueva en la jeringa e inyecte de 1 a 3 ml de líquido articular aspirado en el matraz. Mezcle agitando suavemente o girando. Para preparar una muestra nativa de aspirado de articulaciones, retire la cánula de la jeringa.

A continuación, abra un tubo de extracción de sangre sin aditivos e inyecte 1 ml de aspirado en el tubo de recolección. Vuelva a colocar y cierre la tapa para el análisis de PCR. Transfiera de 1 a 4 mL del aspirado articular a un tubo de recolección de sangre que contenga EDTA para el recuento y la diferenciación de células.

Descongele el tubo de mezcla maestra ajustándolo a temperatura ambiente. Transfiera 180 mcL de la muestra recolectada al tubo de muestra. Cierre el tubo de muestra con la tapa del tubo de muestra que contiene la proteína quinasa K y un gen de control interno para el control de calidad de todo el flujo de trabajo.

En la cabina, abra el software operativo tocando el botón Nueva prueba en la esquina inferior izquierda. Utilice la pantalla táctil para ingresar los datos del paciente o una muestra ID.To seleccione la muestra en el menú desplegable, primero elija Cartucho ITI, luego Ortopedia como modo de aplicación y, finalmente, seleccione Líquido sinovial o Líquido de sonicación como tipo de muestra. A continuación, pulse el botón Inicio.

Escanee el código de barras en la parte inferior del tubo de muestra. A continuación, inserte el tubo de muestra en el Lysator. A continuación, seleccione la muestra en la pantalla de la cabina para desbloquear el tubo de muestra del Lysator.

A continuación, retire el tubo de muestra del Lysator y cierre la tapa superior del Lysator. Transfiera el tubo de muestra a la ranura del tubo de muestra del cartucho de PCR. A continuación, inserte el tubo de mezcla maestra descongelado en la ranura de mezcla maestra del cartucho de PCR.

Siga las instrucciones del monitor de la cabina para escanear el cartucho de PCR con la mezcla maestra y el tubo de muestra. Inserte el cartucho de PCR en la ranura de cartucho indicada del analizador. En la pantalla táctil de la cabina, en la esquina inferior izquierda, selecciona Pruebas activas y, a continuación, elige el ID de muestra correcto para mostrar los resultados de la prueba.

Guarde los resultados en la memoria de la máquina e imprímalos o exportarlos para consultarlos más adelante. Hable con su microbiólogo e infórmele sobre los detalles del caso, para que esté preparado para analizar las muestras con prontitud. Debajo de un banco de trabajo de flujo de aire laminar, abra el recipiente de plástico, sosteniendo la prótesis explantada del quirófano y agregue una solución estéril de cloruro de sodio al 0,9% hasta que el cuerpo extraño explantado esté cubierto al menos en un 80%Cierre el recipiente de plástico.

A continuación, agite o agite bien el recipiente de plástico durante 30 segundos. Transfiera el recipiente de plástico al baño de sonicación. A continuación, compruebe el nivel de líquido en el baño.

Sonicar el espécimen durante cinco minutos, con una frecuencia de más o menos 2 kilohercios y una densidad de potencia de 0,22 más o menos 0,04 vatios por centímetro cuadrado. A continuación, agite o agite completamente la muestra durante 30 segundos. Dentro del banco de flujo laminar, recoja 50 mL del líquido de sonicación y transfiéralo a un tubo estéril antes de sellar herméticamente el tubo.

Para crear un fluido de sonicación concentrado, centrifugar el tubo a 4200 veces G durante 10 minutos, dejando un volumen residual de 10 mL, utilizar la pipeta para desechar el sobrenadante restante. Vuelva a suspender el pellet mediante pipeteo y vórtice. Inocular cada matraz de medio de cultivo adecuado con 0,5 mL de líquido de sonicación concentrado.

Inocular el matraz de hemocultivo pediátrico con 2 mL de líquido de sonicación concentrado, como se ha demostrado anteriormente en este vídeo. A continuación, transfiera 1 ml de fluido de sonicación concentrado a un tubo estéril sin aditivos para el análisis de PCR. Transfiera los medios de cultivo inoculados a la incubadora.

Incubar los cultivos durante 14 días y comprobar diariamente el crecimiento. La presencia de una infección articular periprotésica se consideró probada cuando estaba presente uno de los criterios principales o al menos tres de los cinco criterios menores. Los criterios principales incluyen la presencia de una fístula o la detección de un patógeno en dos muestras microbiológicas separadas.

Los criterios menores incluyen recuento de células positivo o diferenciación celular positiva en el aspirado articular, PCR positiva y velocidad de sedimentación en muestras de sangre, histología positiva en las muestras de tejido o detección de un patógeno en una sola muestra microbiológica. Los resultados mostraron una sensibilidad moderada para el diagnóstico por PCR del líquido de sonicación y el aspirado articular, pero una especificidad muy fuerte del 100%Siempre que la PCR mostró un hallazgo positivo en el aspirado articular o en el líquido de sonicación, el mismo patógeno se detectó posteriormente en uno de los cultivos microbiológicos convencionales. La PCR de las diferentes muestras de casos no infectados no mostró resultados falsos positivos.

Seis de los 16 patógenos verdaderos en las muestras de fluido de sonicación y cinco de los 13 patógenos del cultivo de líquido articular no se detectaron en la detección por PCR. El diagnóstico combinado por PCR de ambos materiales, aspirado articular y líquido de sonicación identificó correctamente 12 de los 18 casos de infección. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo mejorar su ruta diagnóstica en la infección de la articulación periprotésica.

Puede ver cómo los microbiólogos y los cirujanos ortopédicos deben trabajar juntos en estrecha colaboración para mejorar el diagnóstico diferencial lo mejor posible. Si se realiza correctamente, obtendrá resultados clínicamente valiosos de la PCR múltiplex basada en cartucho dentro de las cinco horas posteriores a la aspiración articular. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe trabajar de manera estéril durante todo el proceso.

No olvide que trabajar con muestras de tejido humano o muestras microbiológicas puede ser extremadamente peligroso. Siempre se deben tomar todas las precauciones, como el equipo de protección personal, al realizar este procedimiento.