Name: Preservación de los nervios de mitad de obstrucción uretral (NEMO) en femenino pequeños roedores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Aprende la técnica quirúrgica NEMO para crear obstrucción uretral parcial en roedores femeninos preservando la inervación vesical. Este método minimiza la morbilidad y mortalidad animal permitiendo evaluar remodelación vesical y patrones de expresión génica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

El trabajo fue financiado por una subvención operativa de CHIR (DJB).

El siguiente protocolo experimental fue aprobado por el comité de cuidado de los animales de la institución. 1. Nemo en ratas hembras <ol><li> Preparación <ol><li> Coloque una hembra de rata Sprague-Dawley que pesaban alrededor de 200 g bajo 3% anestesia con isoflurano, pesar el animal, y afeitar y desinfectar el área prepúbico 3 veces usando un lavado quirúrgico de yodo. </li><li> En una almohadilla de calefacción, extremidades traseras de cinta y la cola hacia abajo y cateterizar la vejiga con un angiocatéter de calibre 20, que también se grabó suavemente hacia abajo para evitar el deslizamiento. </li></ol></li><li> Disección <ol><li> Utilice un bisturí para realizar una incisión en la piel longitudinal 8 mm de la sínfisis púbica palpable hacia el meato uretral. Levante la piel en cualquiera de los lados para facilitar el cierre de la herida más tarde. </li><li> Diseccionar para identificar la uretra con stent por difusión longitudinal con tijeras finas. Coloque los ganchos de la piel auto-retención de finos para mejorar la exposiciónde la uretra. </li><li> Realizar algunas suave longitudinal difusión usando tijeras curvas dorsal a la uretra para desarrollar el plano entre la uretra y la vagina. Entonces, sin rodeos pasar una sutura de seda 4-0 detrás de la uretra y preparar el doble tiro de un nudo de cirujano. </li></ol></li><li> La obstrucción parcial de la uretra <ol><li> Retire el angiocatéter, coloque un 0,9 mm varilla metálica paralela a la uretra, y luego apretar el nudo alrededor de la uretra y el metal de varilla, de manera que éste todavía se desliza hacia fuera fácilmente a partir de entonces. </li><li> Asegurar el nudo con 3 más tiros usando tensión suave antes de retirar la varilla. Cortar el extremos de sutura alrededor de 3 mm de largo, o 4 mm si la liberación posterior de obstrucción es parte del experimento. </li></ol></li><li> cierre de la herida <ol><li> Aproximar las glándulas parauretrales utilizando una sola puntada enterrado de absorbible de sutura trenzado 4-0. </li><li> Cierre la piel con una sutura de colchonero horizontal enterrada utilizando el mismo SUT absorbibleUre. Nota: Si bien puede parecer poco convencional de usar una sutura absorbible para una puntada de penetración de la piel, no nos encontramos con complicaciones tales como infecciones de la herida, y que la eliminación de la sutura puede ser evitado. </li></ol></li><li> después de la atención <ol><li> Inyectar buprenorfina 0,1 mg / kg por vía subcutánea antes de colocar la rata en una jaula de recuperación. </li><li> Ofrecer algunas dieta de recuperación suave durante las primeras 24 h a la rata alojados individualmente. Después de este período, los animales casa otra vez en los mismos pares como antes del procedimiento, siempre que lo están haciendo bien y pertenecen al mismo grupo de tratamiento. </li><li> Compruebe las ratas diarias para tamaño de la vejiga y el bienestar general; registrar su peso al menos semanalmente. </li></ol></li></ol> 2. Nemo en ratones hembra <ol><li> Preparación <ol><li> Coloque una hembra C57BL / 6 mouse peso de alrededor de 18 g y proceder como se detalla en el paso 1.1.1. </li><li> Proceder como se detalla en el paso 1.1.2, excepto utilizar un ang calibre 24iocatheter. </li></ol></li><li> Disección <ol><li> Utilice un bisturí para realizar una incisión en la piel longitudinal 6 mm desde la sínfisis púbica palpable hacia el meato uretral. </li><li> Diseccionar para identificar la uretra con stent por difusión longitudinal con tijeras finas. Levantar el haz neuro-vascular ejecutando ventralmente en la uretra mediante disección roma análoga. </li><li> Realizar algunas suave longitudinal difusión usando tijeras curvas dorsal a la uretra para desarrollar el plano entre la uretra y la vagina. Entonces, sin rodeos pasar una sutura 5-0 trenzado no absorbible detrás de la uretra y preparar el doble tiro de un nudo de cirujano. </li></ol></li><li> La obstrucción parcial de la uretra <ol><li> Conectar el angiocatéter con una jeringa de 1 ml y se inyecta 0,1 ml de solución salina normal en la vejiga. </li><li> Colocar un calibre 26 de la cánula en paralelo a la uretra. apriete suavemente el nudo alrededor de la uretra y la cánula mientras que tirando hacia atrás el angiocaXX. </li><li> Asegurar el nudo con 3 más tiros usando tensión suave antes de retirar la cánula. </li><li> Prueba de orina que aparece en el meato a una suave presión sobre la vejiga del animal; aflojar el lazo si es incapaz de expresar la orina. De lo contrario, cortar la sutura termina aproximadamente 3 mm de largo. </li></ol></li><li> cierre de la herida <ol><li> Cierre la piel con una sutura de colchonero horizontal enterrado usando una sutura absorbible 5-0 trenzado. </li></ol></li><li> después de la atención <ol><li> Inyectar 0,1 mg / kg de buprenorfina por vía subcutánea antes de colocar el ratón en una jaula de recuperación. </li><li> Ofrecer algunas dieta de recuperación suave durante las primeras 48 h al ratón alojados individualmente. Después de este período, los animales casa otra vez en los mismos grupos que antes del procedimiento, siempre que lo están haciendo bien y pertenecen al mismo grupo de tratamiento. NOTA: Los ratones con una palpable distendido vejiga 24 h después del procedimiento que no anule cuando se maneja están sobre-obstruido y morirán dentro de la next 1 - 2 días a menos tomada de nuevo bajo anestesia para la eliminación de la ligadura de obstrucción. </li><li> Compruebe los ratones diarias de tamaño de la vejiga y el bienestar general; registrar su peso al menos semanalmente. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Storage+and+voiding+symptoms%3A+pathophysiologic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects.</a> Urology. 62 (5), 3-10 (2003).</li>
<li>Boyle, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+in+men+and+women+in+four+centres.+The+UrEpik+study%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study.</a> BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).</li>
<li>Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+burden+of+urgency+urinary+incontinence+in+the+United+States%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Manag+Care+Pharm%22%5BJournal%5D)">Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review.</a> J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).</li>
<li>Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bladder+outlet+obstruction+and+molecular+insights+into+the+basis+for+the+development+of+bladder+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction.</a> Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).</li>
<li>Mattiasson, A., Uvelius, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+contractile+properties+in+hypertrophic+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder.</a> J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).</li>
<li>Chang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+PKC-mediated+signaling+pathway+for+smooth+muscle+contraction+in+obstruction-induced+hypertrophy+of+the+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder.</a> Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).</li>
<li>Moore, J. A., Brading, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+bladder+outlet+obstruction+incorporating+radio-telemetered+cystometry%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry.</a> BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).</li>
<li>Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sildenafil+citrate+on+bladder+outlet+obstruction%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Inte%22%5BJournal%5D)">The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model.</a> BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).</li>
<li>Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+evaluation+of+bladder+function+in+non-anesthetized+mice+with+and+without+bladder+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction.</a> J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).</li>
<li>Kang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Sequential+Changes+in+Bladder+Function+after+Partial+Bladder+Outlet+Obstruction+in+Awake+Sprague-Dawley+Rats%3A+Focus+on+the+Decompensated+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder.</a> Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+an+oral+endothelin+converting+enzyme+inhibitor+on+rat+detrusor+function+after+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction.</a> J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).</li>
<li>Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. <a target="_blank" href="http://www.jurology.com/article/S0022-5347(16)01357-4/abstract">"sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment.</a> J Urol. 195 (4), e379(2016).</li>
<li>Jin, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+detrusor+overactivity+in+rats+after+relief+of+partial+urethral+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La mortalidad de los animales es una de las principales preocupaciones de la modelo tradicional de pBOO en la uretra proximal, en 15% o más en muchos informes 10, 11, 13. Nemo parece tener un mínimo de mortalidad cuando se aplica en las ratas hembras. obstrucción uretral proximal en ratones es técnicamente más difícil que en ratas y por lo tanto incluso más propensos a complicaciones. El uso de una cánula de ca...

Obstrucción de la salida de la vejiga parcial (pBOO) tiene una alta prevalencia y puede resultar en disfunción de la vejiga severa 1; El espectro va desde malformaciones congénitas tales como válvulas de uretra posterior o hipospadias, más de estenosis uretrales adquiridos a la hiperplasia benigna de próstata. Este último afecta a más del 30% de los hombres mayores de sesenta años y 2. Gran carga paciente y los costos de salud asociados con inmensas pBOO justifican el esfuerzo de investigación considerable puesto en el estudio de la remodelación de la vejiga en respuesta al aumento de la resistencia de salida 3. Desde 2006 hasta 2015, más de 220 PubMed indexado artículos fueron publicados sobre el efecto de pBOO sobre la vejiga urinaria. Aunque los modelos animales para pBOO se han ideado en varias especies de 4, tales como la rata 5, el conejo 6, cerdo 7, y mouse 8, 9, podría decirse que el modelo animal más utilizado sin embargo son ratas hembras sometidos a una obstrucción parcial de la uretra proximal; el acceso a abdomen de los animales, exteriorizar de la vejiga, y la disección alrededor del cuello de la vejiga son inevitables con esta técnica tradicional de obstrucción de la uretra proximal. La variabilidad en el grado de obstrucción y la mortalidad en animales son sólo algunas de las preocupaciones asociadas con este procedimiento 10, 11; demostramos que en los animales operados de forma simulada, la disección alrededor de la uretra proximal conduce a cambios fisiológicos que se correlacionan con la pérdida de fibras nerviosas en el cuello de la vejiga 12. Este hallazgo indica que el pBOO modelo animal más utilizado, que implica el acceso a la uretra proximal en roedores hembra, conduce a una lesión de la denervación con cambios estructurales y funcionales asociados de la vejiga, lo que afectafarsa y animales obstruidos. Por lo tanto, se necesita un enfoque evitar lesiones denervación alternativo. Nuestro laboratorio desarrolló y evaluó un enfoque nervio ahorradores de obstrucción del medio-uretral (NEMO), eficaz en la inducción de cambios de obstrucción asociada esperados en la vejiga, tales como aumento de la masa de órganos y la orina residual, mientras que los animales con operación simulada fueron indistinguibles de los animales de control no operados . También, el esfínter uretral estriado se mantuvo intacta ya que se encuentra proximal al nivel de la disección. Además, la variabilidad en aumento obstrucción inducida en la masa de la vejiga fue significativamente menor que en la obstrucción tradicional uretral proximal y la mortalidad de los animales fue cero. También se aplica con éxito NEMO en ratones hembra con una mortalidad inferior al 10% en los animales obstruidos, mientras que todos los modelos pBOO para los ratones descritos hasta la fecha se asociaron con una mortalidad alrededor de 50%. El estudio de la remodelación de la vejiga en el contexto de pBOO en ratones se beneficiará de applicabildad de todo el espectro de modificaciones transgénicas. La disección alrededor de la uretra media en roedores hembra no induce los cambios estructurales o funcionales indeseables y de confusión en la vejiga urinaria se observa en el modelo tradicional obstrucción proximal. Sin embargo, la inducción de una obstrucción parcial a nivel de mediados de uretral todavía induce la hipertrofia de la vejiga y el aumento de la orina residual, como se espera de un modelo animal para pBOO. Es importante destacar que la realización de NEMO en ratones abre una investigación de la remodelación de la vejiga en pBOO a métodos transgénicos, que son virtualmente no disponible en los roedores más grandes.

<table><tbody><tr><td>Rata hembra&nbsp;</td><td>Charles-River Canada</td><td>Sprague Dawley Rata (Crl:SD); Código de cepa: 400</td><td>alrededor de 200 g</td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflorano</td><td>Benson medical industries inc.</td><td>TEC III Isoflurano; código de producto: 53-T3ISO&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isoflorane</td><td>Fresenius Kabi Animal Health</td><td>Isoflorane; código de producto CP0406V2</td><td>&nbsp; Frasco de 250 ml</td></tr><tr><td>Bisturí desechable</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>#15 Bisturíes estériles de acero inoxidable; número de catálogo 549-9-15S Pinzas</td><td></td></tr> de <tr><td>microscopía</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Pinzas de microscopía Aesclap, Finepoint, 115 mm; número de producto 5443</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Adson</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Pinzas de disección Aesculap Adson, curvas, 120 mm; número de producto 5002-9</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas curvas</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Tijeras quirúrgicas, curvas, acero inoxidable, 105 mm; Número de catálogo 1376</td><td></td></tr><tr><td>Varilla de metal inoxidable de 0,9 mm</td><td>goodfellow.com</td><td>Acero inoxidable - AISI 316L Diámetro del alambre: 0,9 mm; código de pedido 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>Ganchos de piel - Fabricación propia de acero inoxidable</td><td>goodfellow.com</td><td>Acero inoxidable - AISI 316L Diámetro del alambre: 0,9 mm; código de pedido 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Sutura de seda</td><td>esutures.com</td><td>4-0 Sofsilk negro de 98" hebra; número de producto LS640</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Sutura Vicry</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Vicryl sin teñir 27" cono RB-1; número de producto J213H</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Medsupplier.com</td><td>Integra Miltex Carb-N-Sert Portaagujas Baumgartner - 5 1/2"; código de producto SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (Buprenorfina)</td><td>primer suministro veterinario</td><td>Buprenex 0.3MG/ml inj amperios; artículo #075701</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 1 mL con aguja de 27 G</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Jeringa de tuberculina, BD 309623</td><td></td></tr><tr><td>20 g Angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Andwin Scientific&nbsp; ANGIOCATH 20 GA; Nº de catálogo. </td><td></td>NC9561906</tr><tr><td>Dieta de recuperación</td><td>clearh2o</td><td>DietGel 31M; 72-08-5022</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 ratones</td><td>hembra Charles-River Canada</td><td>C57BL/6 ratón (C57BL/6NCrI); Código de cepa: 027</td><td>alrededor de 18 g</td></tr><tr><td>24 g angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc.&nbsp;IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Nº de catálogo. </td><td></td>NC9814340</tr><tr><td>5-0 Ethibond</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Ethibond verde 30" RB-1 cónico; número de producto X550H</td><td></td></tr><tr><td>26 G aguja de jeringa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BD Precisionglide aguja, calibre 26; z192392</td><td></td></tr><tr><td>Inyección de cloruro de sodio Baxter 0.9% de solución salina normal, USP, minibolsa de 100 ml; código de producto 2B0043</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preservación de los nervios de mitad de obstrucción uretral (nemo) en femenino pequeños roedores

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

obstrucción del tracto urinario parcial (pBOO) tiene una alta prevalencia, las causas carga significativa del paciente, y los costos de salud inmensas. El modelo animal más común para investigar la remodelación de la vejiga en pBOO son roedores hembra sometidos a una obstrucción parcial de la uretra proximal. La variabilidad en el grado de obstrucción y la mortalidad de los animales son las principales preocupaciones con obstrucción proximal. Además, la disección alrededor de la uretra y la vejiga cuello proximal pone en peligro la inervación de la vejiga. Hemos desarrollado un modelo de obstrucción uretral mediados de preservación de nervios (NEMO) para pBOO evitando las desventajas del modelo tradicional. Nos acercamos a la uretra justo por debajo de la sínfisis del pubis, lo que evita la necesidad de laparotomía, así como para la disección en esta área; También, el esfínter uretral estriado se mantuvo intacta. Se realizó NEMO en ratas hembra Sprague-Dawley (12 obstrucciones, 6 animales sham), así como en ratones hembra C57 / BL6 (20 obstruccións, 18 animales sham). Después de dos semanas, se evaluó la función vesical, la masa de la vejiga, y la masa corporal. No tuvimos mortalidades entre ratas hembra obstructed- o con operación simulada; como se describe para el proximal tradicional pBOO-método, atamos la sutura alrededor de la uretra proximal y un coloca temporalmente varilla de metal 0,9 mm. NEMO indujo un aumento del 85% en masa de la vejiga después de dos semanas, el volumen promedio de orina residual fue de 0,4 ml en ratas parcialmente obstruidos mientras que sólo el 0,03 ml en animales de simulación. En ratones, probamos 3 tamaños de cánulas que colocan a lo largo de la uretra al atar la sutura. Encontramos que el uso de una cánula de calibre 27 resultó en más de mortalidad de los animales 50%; la colocación de la cánula de calibre 25 no dió la respuesta deseada en el aumento de masa de la vejiga; la utilización de una cánula de calibre 26 produjo resultados favorables con la mortalidad mínima de animales (1/8) sin embargo, un aumento significativo de 2 veces en masa vejiga.

Conservadora de nervios de mediana-uretral obstrucción (NEMO) en ratas hembra Mortalidad Se realizó una obstrucción uretral en mediados de más de 40 ratas hembras hasta el momento y no tenía mortalidades. masa vesical <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page=...

modelado tradicional de obstrucción del tracto urinario parcial en roedores está plagado de mortalidad de los animales. Una lesión en la denervación de la disección alrededor de la uretra y la vejiga cuello proximal también es de gran preocupación. Hemos desarrollado y evaluado un modelo de obstrucción uretral mediados de seguro y fiable, evitando las deficiencias del modelo tradicional.

Preservación de los nervios de mitad de obstrucción uretral (NEMO) en femenino pequeños roedores

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

El objetivo general de esta técnica es crear quirúrgicamente una obstrucción parcial de la salida de la vejiga en roedores hembra pequeños, preservando la inervación de la salida de la vejiga, con baja morbilidad animal, prácticamente ninguna mortalidad y poca variabilidad en el grado de obstrucción. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la remodelación de la vejiga inducida por obstrucción, como, ¿cuáles son los patrones de expresión génica y los cambios epigenéticos asociados con la obstrucción de la salida? Las principales ventajas de esta técnica son su fiabilidad y el hecho de que evita la necesidad de disección alrededor del cuello de la vejiga, preservando así la inervación de la salida de la vejiga. La implicación de esta técnica se extiende hacia la terapia de la obstrucción vesical porque la fase posterior a la alivio y recuperación puede evaluarse de manera reproducible. La recuperación tras la obstrucción vesical es impredecible en humanos. Mediante esta técnica, puede eliminarse la obstrucción, lo que permite evaluar las respuestas celulares y tisulares asociadas con la recuperación de la obstrucción.Desarrollamos este método cuando observamos que la obstrucción tradicional, más proximal, se asociaba con una disfunción y displasia vesicales indeseables significativas, tras disecciones simuladas sin obstrucción quirúrgica real. Comience colocando una rata hembra de 200 gramos sobre una almohadilla calefactora y asegure las extremidades y la cola con cinta adhesiva. Luego desinfecte y coloque toallas estériles sin cubrir el abdomen inferior.Luego, utilice un angiocatéter de calibre 20 para cateterizar la vejiga y asegure el catéter con cinta adhesiva. A continuación, bajo un microscopio de disección, use un escalpelo para realizar una incisión longitudinal de ocho milímetros en la piel, desde la sínfisis púbica palpable hacia el meato uretral. Retire la piel a ambos lados de la incisión para facilitar su cierre posterior y use tijeras finas para realizar una disección roma mediante separación longitudinal con el fin de identificar la uretra atrofiada.Coloque ganchos finos de retención cutánea para mejorar la exposición de la uretra, y utilice una disección roma análoga para elevar el haz neurovascular que discurre ventralmente. Con tijeras curvas y una separación longitudinal suave, desarrolle el plano entre la uretra y la vagina, dorsal a la uretra. Pase ahora romamente una sutura de seda 4-0 por detrás de la uretra, y prepare el doble lazo del nudo quirúrgico.Luego retire el angiocatéter y coloque una varilla metálica de 0,9 milímetros paralela a la uretra. Apriete el nudo alrededor de la uretra y la varilla metálica, de modo que la varilla aún pueda deslizarse fácilmente, y asegure el nudo con tres lazadas suaves adicionales. Después de la última lazada, retire la varilla y corte los extremos del hilo de sutura a una longitud de aproximadamente tres a cuatro milímetros, utilizando un punto simple variable de hilo de sutura trenzado absorbible 4-0, para aproximar las glándulas parauretrales.Luego, cierre la piel con una sutura horizontal enmattress variada, utilizando el mismo hilo reabsorbible, e inyecte la analgesia adecuada. Para la obstrucción uretral media con preservación nerviosa, o NeMO en ratones, coloque un ratón hembra C-57 negro-6 de 18 gramos sobre una almohadilla calefactora en posición supina, y asegure las extremidades con cinta adhesiva. A continuación, desinfecte y coloque toallas estériles sin cubrir el abdomen inferior.A continuación, bajo un microscopio estereoscópico, canule la vejiga con un angiocatéter de calibre 24 y asegure el catéter con cinta adhesiva. Bajo un microscopio estereoscópico, use un escalpelo para realizar una incisión longitudinal de seis milímetros en la piel, desde la sínfisis púbica palpable hacia el meato uretral. Luego, realice una disección roma con tijeras finas para identificar la uretra atrofiada.Mediante una separación longitudinal suave, dorsal a la uretra, desarrolle el plano entre la uretra y la vagina. Luego, pase sutilmente una sutura trenzada no absorbible 5-0 por detrás de la uretra y prepare el doble lazo del nudo quirúrgico. Ahora conecte una jeringa de un mililitro al angiocatéter e inyecte 0,1 mililitros de solución salina normal en la vejiga.Una vez que se haya administrado toda la solución salina, utilice el nudo para anclar suavemente una cánula de calibre 26, paralela a la uretra, mientras retira el angiocatéter. Asegure el nudo con tres lazadas suaves adicionales, seguido de la retirada de la cánula, y aplique presión suave sobre la vejiga para comprobar la aparición de orina en el meato. Corte los extremos del hilo a unos tres milímetros.Luego, utilice una sutura absorbible trenzada 5-0 para cerrar la piel con una puntada horizontal de relleno variable e inyecte la analgesia adecuada antes de colocar al ratón en una jaula de recuperación. La relación promedio de masa relativa de la vejiga respecto a la masa corporal en ratas operadas con simulacro NeMO es del 0,33 % dos semanas después del procedimiento, mientras que en las ratas con obstrucción es del 0,6 %, lo que representa un aumento del 85 % en la masa relativa de la vejiga en estos animales. Las ratas operadas con simulacro NeMO presentan prácticamente ninguna orina residual que pueda aspirarse mediante punción de la vejiga en el momento de la extracción del órgano.Los animales obstruidos, por el contrario, demuestran un volumen medio significativamente mayor de orina residual, de 0,42 mililitros. En general, la mortalidad de los ratones en los animales operados con falso procedimiento y en los operados con NeMO aumenta a medida que disminuye el tamaño de la cánula de retención. Además, el uso de una cánula de 25 gauge no aumenta eficazmente la relación entre la masa de la vejiga y la masa corporal en ratones, mientras que el uso de una cánula de 26 gauge provoca un aumento de más del doble en la masa relativa de la vejiga.Cuando se aplica un marcador de calibre 27, se observa un aumento superior al 60 % en la masa relativa de la vejiga dos semanas después del procedimiento. Además, la obstrucción parcial de la salida de la vejiga con una cánula de calibre 25 o 26 a lo largo de la uretra no afecta el volumen de orina residual durante el período experimental de dos semanas. Aunque los animales con un marcador de calibre 27 muestran un aumento promedio del volumen de orina residual tres veces mayor, en comparación con sus respectivos pares sometidos a cirugía simulada.Después de algo de práctica, tanto el procedimiento NeMO como el simulado NeMO pueden completarse en 10 a 15 minutos. Al realizar NeMO en ratones, es importante recordar descartar la posibilidad de una obstrucción completa, expresando suavemente algo de orina antes de cerrar al animal. Tras este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la inclusión de animales simulados proximales, para responder preguntas adicionales sobre la contribución relativa o la asociación de estímulos neurogénicos locales en la salida que resulten en disfunción vesical, displasia y desregulación génica.Se espera que esta técnica allane el camino para que los investigadores en el campo de la miopatía obstructiva de la vejiga exploren cómo las alteraciones anatómicas y neurogénicas del cuello vesical contribuyen a la generación y recuperación de la obstrucción del flujo urinario.

nerve-sparing-mid-urethral-obstruction-nemo-in-female-small-rodents

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

La lesión del nervio Salvados modelo animal es descrito aquí como un modelo de ratón del dolor neuropático periférico después de denervación parcial del nervio ciático por lesionar las ramas tibial y peroneo común del nervio, dejando el nervio sural se mantiene intacta. Modificación de la conducta resultante de la alodinia mecánica se cuantifica por filamentos de von Frey.

La lesión del nervio Salvados (SNI) Modelo de alodinia mecánica inducida en ratones

Cystometry es una técnica eficaz para medir la función de la vejiga de animales...

El uso de la cistometría en pequeños roedores: un estudio de la vejiga chemosensation

Aproximadamente 3-8 million de personas en Estados Unidos sufren de síndrome de dolor cistitis intersticial / vejiga (IC / BPS), una condición debilitante que se caracteriza en parte por el dolor pélvico. Con el fin de estudiar las contribuciones del sistema nervioso a la condición, un modelo fisiológico de dolor en la vejiga urinaria se utiliza en ratones y ratas.

Las respuestas de la Vejiga Urinaria Distensión Evocados visceromotor como modelo para la vejiga Dolor en ratones

El modelo establecido de cateterización transuretral de ratones permite el estudio de patologías de vejiga, incluyendo infección del tracto urinario, pero puede realizarse solamente en las hembras. Un nuevo modelo de hombre instilación transuretral, presentado aquí, permitirá que la investigación en un área marcada por fuertes diferencias clínicas y epidemiológicas entre los sexos.

Infección del tracto urinario en un modelo Animal pequeño: cateterización transuretral de ratones machos y hembras

Presentamos un método para establecer un modelo de subactividad del detrusor mediante transección del cono medular en ratas. La falta de actividad del detrusor se estimuló con éxito en estos animales. El modelo se puede utilizar para estudiar la función del tracto urinario.

Modelo de hipoactividad del detrusor en ratas por transección del cono medullaris

La cirugía modificada es un método simplificado para el modelo de lesión nerviosa sin nervios en ratones o ratas que requiere solo una ligadura y un corte para lesionar los nervios peroneo y sural comunes.

Modelo modificado de cirugía de lesión nerviosa preservada del dolor neuropático en ratones

La ligadura parcial del nervio ciático induce dolor neuropático crónico de larga duración, caracterizado por respuestas exageradas a estímulos térmicos y mecánicos. Este modelo de ratón de dolor neuropático se usa comúnmente para estudiar terapias innovadoras para el manejo del dolor. Este artículo describe en detalle el procedimiento quirúrgico para mejorar la estandarización y la reproducibilidad.

Ligadura parcial del nervio ciático: un modelo de ratón de dolor neuropático crónico para estudiar el efecto antinociceptivo de nuevas terapias

Este protocolo proporciona una guía para impermeabilizar la piel con cianocrilato para evitar la absorción de orina por el pelo y la piel. Incluye instrucciones para aplicar el pegamento a la piel, implantar un catéter vesical y electrodos para la cistometría y los registros de electromiografía del esfínter uretral externo en ratones despiertos.

Optimización de las técnicas urodinámicas del ratón para mejorar la precisión 

El presente protocolo describe un modelo reproducible paso a paso de la obstrucción ureteral unilateral.

Un modelo murino inmaduro de obstrucción ureteral unilateral reversible

Este protocolo presenta un modelo de rata reproducible que utiliza nervios sensoriales para imitar el dolor del neuroma humano y evaluar los tratamientos quirúrgicos, ofreciendo una herramienta valiosa para la investigación traslacional del neuroma.

Nuevo modelo quirúrgico de roedores para estudiar las opciones de tratamiento del dolor del neuroma mediante la reinervación muscular dirigida a través del nervio safeno

Aprende la técnica quirúrgica NEMO para crear obstrucción uretral parcial en roedores femeninos preservando la inervación vesical. Este método minimiza la morbilidad y mortalidad animal permitiendo evaluar remodelación vesical y patrones de expresión génica.

Preservación de los nervios de mitad de obstrucción uretral (NEMO) en femenino pequeños roedores

Explorar más videos