Evaluación del procedimiento para realizar cistometría despierta en un modelo de ratón

El objetivo general de este procedimiento microquirúrgico es implantar un tubo intravesical en la vejiga urinaria y registrar la función del tracto urinario inferior en un ratón despierto. Este método puede ayudar en la adquisición de datos experimentales reproducibles a partir de la cistometría despierta y en la prueba de la función de la vejiga en modelos de ratón sanos y enfermos. El objetivo principal de esta técnica es proporcionar un método estandarizado basado en datos experimentales para realizar cistometría de llenado en un modelo de ratón.

Para preparar el tubo para la implantación, primero corte un trozo de tubo de pe10 de siete centímetros y avance lentamente un extremo hacia una llama abierta para crear un destello, retirando rápidamente el tubo tan pronto como se desarrolle el destello. Luego, use la configuración de calor bajo en una pistola de pegamento para aplicar tres gotas de pegamento caliente para todo uso a 4.5, 5 y 5.5 centímetros del extremo acampanado del tubo. Usa unas tijeras para recortar las irregularidades de las burbujas de pegamento.

Aplique pegamento caliente a un extremo de una aguja de calibre 30, que se usará para taponar el tubo de pe10 después de que se implante. A continuación, confirme la falta de respuesta al pellizco de los dedos del pie y aplique ungüento en los ojos del animal. Después de esterilizar la parte superior de la espalda y la parte inferior del abdomen con alcohol y betadine, haga una incisión de 1,5 centímetros entre el bisturí y coloque al animal en posición supina sobre una almohadilla térmica de 37 grados centígrados cubierta con cortinas estériles bajo un microscopio de disección.

Ahora haga una incisión de 1,5 centímetros en la piel de la línea media abdominal inferior. Seguido de una incisión a través de la fascia a lo largo de la línea alba y el músculo para exponer la cúpula y la mitad superior de la vejiga urinaria. Manteniendo las vísceras abdominales húmedas con solución salina fisiológica caliente, gire al animal de lado para acceder a la incisión en la nuca.

Empuje un hemostático estrecho subcutáneamente a través de la incisión para iniciar un canal subcutáneo en la espalda y continuar a lo largo del costado del animal. Una vez que la punta del instrumento llega a la parte inferior de la caja torácica, gire la punta hacia la línea media en el interior del abdomen y continúe avanzando el hemostático hasta que la punta quede expuesta en la incisión abdominal debajo de la capa muscular. Una vez que la punta del hemostático esté dentro de la incisión, pellizque la piel por encima del hombro y aplique tracción para ayudar a estabilizar al animal hasta que se vea la punta del instrumento en la incisión abdominal.

Ahora use el hemostático para agarrar el extremo no ensanchado del tubo y retraiga lentamente el hemostático, sacando el extremo del tubo de la incisión en la parte posterior del cuello y ajustando el extremo ensanchado del tubo para que quede directamente sobre la cúpula de la vejiga. Estabilice la vejiga con un pequeño rollo de pañuelo sin pelusa. Coloque una sutura de monofilamento 6-O atada sin apretar, no absorbible, en la parte superior de la cúpula de la vejiga.

Usando la mano no dominante y las micropinzas curvas de Dumont número siete, agarre la cúpula de la vejiga y use una aguja de calibre 21 en la mano dominante para hacer una cistotomía en el ápice de la cúpula. Pruebe suavemente la cistotomía con un par cerrado de micropinzas curvas número cinco para asegurarse de que el catéter pueda pasar fácilmente a través del orificio y coloque el extremo ensanchado del catéter pe10 en la vejiga, empujando el ensanchamiento hasta el cuello de la vejiga para que no se deslice mientras está asegurado. Con la atadura de monofilamento colocada por delante del tubo, apriete la sutura 6-O alrededor de la cúpula de la vejiga y el tubo lo más alto posible en la vejiga para evitar reducir artificialmente la capacidad de la vejiga.

Alternativamente, coloque una sutura de cuerda de bolsa suelta en la cúpula de la vejiga, haga una cistotomía como se acaba de demostrar e inserte el extremo ensanchado del catéter en la punción. A continuación, ate la sutura alrededor de la cúpula y el tubo como se muestra para la sutura plana. En cualquier caso, tenga cuidado de asegurar el tubo sin causar lesiones extensas a la pared de la vejiga.

Si se extrae demasiado tejido, la capacidad de la vejiga se reducirá. Si se toma muy poco, la conexión tendrá fugas. Para probar el sellado y la posición del tubo en la vejiga, conecte una jeringa de insulina de 0,5 mililitros equipada con una aguja de calibre 30 al extremo distal del tubo y llene lentamente la vejiga con 0,1 a 0,2 mililitros de cloruro de sodio al 0,9% hasta que aparezca una gota en el orificio uretral.

Si el sello está incompleto, enrolle las colas de sutura alrededor de la vejiga y vuelva a atarlas. A continuación, vacíe la vejiga por aspiración. Si no se producen fugas en la cúpula, sujete la vejiga con un par de micropinzas curvas y tire suavemente del tubo hasta que la bengala descanse contra el interior de la cúpula de la vejiga.

Vuelva a probar el sello utilizando el método descrito anteriormente. Recorte las colas de la sutura, retire el rollo de pañuelo y devuelva la vejiga a su posición normal. A continuación, utilice una sutura de 6-O para cerrar la pared abdominal en dos capas.

Y girar suavemente al animal sobre su abdomen. Inserte la porción subcutánea del anclaje metálico en la incisión intrascópica y use un monofilamento 6-O para asegurar el tubo y el anclaje con una sutura de colchón vertical. Confirme que quede una burbuja de pegamento por encima y por debajo de la piel para evitar que el tubo se salga y corte el tubo aproximadamente dos centímetros por encima de la piel.

Luego, inserte suavemente un tapón de calibre 30 en el extremo del tubo para evitar que la orina se escape. Antes de realizar la lectura, utilice el tubo pe50 para conectar la bomba de infusión, el transductor de presión y el eslabón giratorio de 22 calibres. A continuación, coloque el animal de experimentación anestesiado en posición prona y retire el tapón de calibre 30.

Conecte la correa al anclaje, deslice el catéter de vejiga en el extremo del pe50 y use pegamento caliente para formar un sello hermético. Coloque el ratón en el suelo de alambre. Y comienza la grabación.

Luego, cuando el animal se recupere de la anestesia y la presión de la vejiga se estabilice, comience a infundir cloruro de sodio al 0,9% a una tasa de 0,6 mililitros por hora. Por lo general, en el segundo día después de la inserción del catéter, se desarrolla una hinchazón submucosa grave que ocupa la mitad de la sección transversal de la vejiga y que conduce a la obstrucción de la luz. Al quinto día, el edema se resuelve por completo, dejando las áreas submucosas infiltradas con células inflamatorias que invadieron parcialmente la muscular.

La mayor extensión de la hinchazón del tejido observada en los días dos y tres se correlaciona con la micción conductual correspondiente, ya que los animales mostraron una función de la vejiga significativamente deteriorada en estos momentos. Como se esperaba de los datos histológicos, la frecuencia miccional se normaliza en el quinto día postoperatorio. La presión intravesical en un animal despierto que se mueve libremente con artefactos de movimiento mínimo se caracteriza por una presión basal de 10 a 15 centímetros de agua, que puede permanecer inalterada o puede aumentar gradualmente en no más de 10 centímetros de agua durante el ciclo de llenado.

Seguido de un aumento y descenso repentino de la presión del estilo del pulso durante la micción. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 30 minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar minimizar el daño a la vejiga para preservar la fisiología del tejido.

Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la cistometría de llenado de ciclo único, para responder preguntas adicionales sobre la capacidad funcional de la vejiga. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo implantar microquirúrgicamente un tubo en la vejiga urinaria y usar la cistometía de relleno despierto para evaluar la función del tracto urinario inferior en ratones.