Disección del páncreas de ratón para análisis histológico y perfiles metabólicos
19 de agosto de 2017
Este artículo de video ofrece una demostración detallada de los procedimientos necesarios para eliminar con éxito el páncreas de un ratón por disección para análisis histológico y perfiles metabólicos.
El objetivo principal de este artículo en video es proporcionar instrucciones visuales detalladas sobre la disección de un páncreas de ratón. Las instrucciones resultarán útiles para investigadores que estudian modelos murinos de enfermedades pancreáticas humanas y que necesitan extraer el páncreas de ratón mediante disección para análisis histológico o perfilado metabólico. El artículo en video también ofrece instrucciones detalladas para realizar una recolección terminal de sangre mediante punción cardíaca.
Se muestra una mesa de operaciones con los suministros necesarios. Estos incluyen un frasco de vidrio con tapa, un tubo cónico de 15 mL, un par de tijeras quirúrgicas, una botella con pico de 70% de etanol, dos tablas de espuma, dos pinzas, dos jeringas de 1 mL con aguja de calibre 21, dos tubos cónicos de 50 mL, un tubo para centrífuga, un vial criogénico, cuatro campos quirúrgicos, diez alfileres, un dispensador de toallitas esterilizantes y un contenedor para objetos punzocortantes. Se muestra la mesa postoperatoria con los suministros necesarios.
Estos incluyen una balanza analítica, un Dewar de cuatro litros de nitrógeno líquido, un Dewar de boca ancha y poco profundo, un portamatraces flotante, un par de tijeras quirúrgicas, dos pinzas, cinco viales criogénicos y un dispensador de toallitas estériles. Para realizar la eutanasia, primero se coloca al ratón en un frasco de vidrio que contiene una gasa empapada con unas gotas de isoflurano, y luego se tapa con la tapa hasta que el ratón pierda el conocimiento, lo cual generalmente toma aproximadamente un minuto. A continuación, se retira al ratón del frasco de vidrio y se realiza una prueba de pellizco en la pata para asegurarse de que el animal no pueda experimentar molestias.
Si la prueba de pellizco en la pata falla, devuelva el ratón al frasco de vidrio y reemplace la tapa hasta que se pueda realizar con éxito la prueba de pellizco en la pata. Coloque al ratón sobre su espalda y sujete sus miembros a la tabla de espuma quirúrgica, y humedezca el lado ventral del ratón con etanol al 70 %. Pellizque el pelaje cerca de la abertura uretral con la pinza y tire ligeramente hacia arriba.
Realice una incisión a través de la cavidad abdominal, comenzando desde la abertura uretral, siguiendo la línea media y terminando en la barbilla. Cerca del punto inicial de la incisión principal, tome un lado del pelaje y realice otra incisión hacia abajo y en diagonal hacia la pata trasera. Repita este procedimiento de la misma manera en el lado opuesto.
Localice el corazón para realizar la punción cardíaca terminal. Para ello, sujete el esternón con la pinza y corte el diafragma. Corte rápidamente hacia arriba a través de la caja torácica y retire la porción cortada para exponer el corazón latiendo.
Una vez localizado el corazón, retire el pericardio y realice la punción cardíaca terminal con la jeringa. Para una recolección óptima de sangre, utilice el émbolo de la jeringa para imitar la acción de bombeo del corazón y evite aspirar demasiado rápido. Deposite la sangre en el tubo de centrífuga y deseche la jeringa en el recipiente para objetos punzantes.
Después de realizar la punción cardíaca, se lleva a cabo la eutanasia eliminando los tejidos conectivos que unen al corazón. Localice el estómago en el lado izquierdo del ratón. El páncreas tiene el aspecto de un tejido difuso de color más claro que está unido al estómago, al duodeno, a lo largo del intestino delgado y del intestino grueso, y también está conectado al bazo.
Comience a separar suavemente el páncreas del estómago y el duodeno utilizando la pinza. Continúe separando el páncreas del intestino delgado, avanzando desde las secciones del yeyuno e íleon, y finalmente hacia el ciego y el intestino grueso. En el ciego, reposicione la pinza y continúe la separación del páncreas a lo largo del colon restante hacia el recto.
En este momento, es conveniente cortar y eliminar la sección que va desde el estómago hasta la región del colon inmediatamente anterior al recto. Localice el páncreas y el bazo adjunto. Deslice el páncreas hacia el lado derecho del ratón.
Corte las conexiones restantes entre el páncreas y la cavidad torácica para separar completamente el páncreas junto con el bazo adyacente. Retire el páncreas y extiéndalo para su examen. Si se desea, otros órganos pueden ser removidos en este momento.
Después de la extracción, las muestras se trasladan al área posoperatoria. Cada órgano se pesará y luego se colocará en su criovial correspondiente. Registre cualquier irregularidad observada.
Una vez que los órganos estén en los viales criogénicos, colóquelos en la rejilla flotante para microtubos y luego en el Dewar con nitrógeno líquido. Después de la congelación rápida, el órgano debe almacenarse a menos 80 grados Celsius para conservación a largo plazo. Todas las herramientas de disección utilizadas deben desinfectarse utilizando toallitas esterilizantes.
El tubo Falcon forrado con la gasa quirúrgica empapada en isoflurano debe taparse. La gasa quirúrgica sobre la tabla de espuma debe reemplazarse por una gasa quirúrgica nueva. Las partes del ratón que no se hayan recolectado deben desecharse de acuerdo con la política de eliminación de animales del centro.
Los siguientes elementos deben manejarse de acuerdo con lo indicado. Una vez que estos elementos se almacenan adecuadamente, se pueden realizar múltiples experimentos que incluyen, entre otros, microscopía de fluorescencia, histología con hematoxilina y eosina, inmunohistoquímica, espectrometría de masas y espectroscopía de resonancia magnética nuclear. Dado que el páncreas es un órgano principal para la actividad metabólica y la producción de insulina, este procedimiento permite la preservación de las características fisiológicas.
Al aíslar el páncreas, se podrían realizar análisis futuros sobre la muestra. Este procedimiento permite la comparación y el estudio de las interacciones provenientes de otros tejidos dentro del mismo organismo y en el mismo período de tiempo.
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Descripción general
Este artículo en video proporciona instrucciones visuales detalladas para la disección del páncreas de un ratón, dirigidas a investigadores que estudian enfermedades pancreáticas. Incluye procedimientos para la recolección del páncreas destinada al análisis histológico y al perfilado metabólico, así como la recolección terminal de sangre mediante punción cardíaca.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología
- Histología
Antecedentes
- Los modelos de ratón son esenciales para estudiar enfermedades pancreáticas humanas.
- Las técnicas de disección son fundamentales para una recolección precisa de tejidos.
- El análisis histológico y el perfilado metabólico proporcionan información sobre los mecanismos de las enfermedades.
- La recolección terminal de sangre es necesaria para estudios metabólicos completos.
Objetivo del estudio
- Demostrar la disección del páncreas de ratón.
- Proporcionar a los investigadores un método confiable para la recolección de tejidos.
- Facilitar el estudio de las enfermedades pancreáticas mediante orientaciones detalladas del procedimiento.
Métodos Utilizados
- Diseción del páncreas de ratón utilizando instrumentos quirúrgicos.
- Recolección terminal de sangre mediante punción cardíaca.
- Preparación del material necesario para el proceso de disección.
- Instrucciones visuales para mejorar la comprensión del procedimiento.
Resultados principales
- Se demostró una disección exitosa del páncreas.
- Se proporcionó una guía visual clara para los investigadores.
- Se describieron métodos efectivos para la recolección terminal de sangre.
- Visión general completa de los materiales y procedimientos requeridos.
Conclusiones
- El artículo en video sirve como un recurso valioso para los investigadores.
- Las técnicas precisas de disección son cruciales para los estudios metabólicos.
- Los recursos visuales mejoran la experiencia de aprendizaje en procedimientos complejos.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La disección precisa del páncreas de ratón permite la obtención confiable de tejido para el perfilado metabólico y el análisis histológico posterior en la investigación del cáncer de páncreas. Esta estandarización del procedimiento apoya la validación de objetivos y el descubrimiento de biomarcadores al garantizar la integridad de las muestras y reducir la variabilidad en modelos preclínicos. El método mejora la confianza predictiva en los flujos de trabajo de descubrimiento temprano al proporcionar una base reproducible para estudios mecanicistas de la progresión de la enfermedad.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite la evaluación de hipótesis terapéuticas mediante el aislamiento preciso de tejido pancreático para evaluación metabólica e histológica.
- Valor operativo: Facilita la reducción de riesgos biológicos al proporcionar muestras de tejido consistentes para el análisis de interacción con el blanco y de vías metabólicas.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Valor científico: Prepara sistemas biológicos validados para la estandarización de ensayos al garantizar la extracción intacta del páncreas para lecturas metabólicas.
- Valor operativo: Aborda los requisitos de reproducibilidad mediante técnicas estandarizadas de disección que minimizan la variabilidad preanalítica.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Valor Científico: Mantiene la relevancia de la enfermedad al preservar la arquitectura del tejido pancreático para la clasificación de la progresión del cáncer en modelos preclínicos.
- Valor Operacional: Permite la continuidad desde el descubrimiento hasta la validación preclínica al proporcionar tejido listo para su recolección destinado a análisis multi-ómicos.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
El método de disección se integra en el continuo del descubrimiento al proporcionar tejido pancreático de alta calidad para el perfilado metabólico y la clasificación histológica, apoyando directamente las etapas de identificación de compuestos activos y validación preclínica.
- Biología del Descubrimiento: Facilita la comprobación de hipótesis y la aclaración de vías al permitir la recolección de tejido pancreático relevante para la enfermedad a partir de modelos genéticamente modificados.
- Selección: Garantiza la disponibilidad del ensayo mediante una preparación estandarizada del tejido que respalda resultados metabólicos e histológicos consistentes.
- Análisis: Genera mediciones cuantitativas a partir de extractos de tejido que permiten comparar los estados metabólicos entre diferentes condiciones experimentales.
- Investigación Traducional: Se conecta con la continuidad preclínica al preservar el tejido para el análisis longitudinal de la progresión del cáncer y la respuesta al tratamiento.
- Reutilización Empresarial: Establece una capacidad reutilizable de recolección de tejido aplicable a múltiples modelos de cáncer de páncreas y estudios metabólicos.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva al reducir la ambigüedad mecanicista mediante un muestreo tisular confiable para la correlación metabólica e histológica.
- Valor operativo: Mejora la estandarización y escalabilidad del aislamiento de páncreas entre equipos de investigación y lotes experimentales.
- Valor estratégico: Mejora las decisiones de avance o interrupción al proporcionar datos preclínicos de alta fidelidad que reducen el riesgo biológico en fases tardías de la validación de dianas.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo al permitir una caracterización precisa de la progresión del cáncer de páncreas en modelos preclínicos.
Consideraciones de Implementación
- Requiere dominio de la anatomía del ratón y de las técnicas de disección para evitar daños tisulares durante el aislamiento del páncreas.
- Necesita acceso a instrumentos quirúrgicos, materiales de esterilización y almacenamiento criogénico para la conservación de las muestras tras la disección.
- Exige la estandarización entre equipos de los protocolos de disección para garantizar la reproducibilidad entre diferentes operadores e instalaciones.
- Incluye consideraciones de adaptación al aplicar la técnica a distintas cepas de ratones o modelos de enfermedad con morfología pancreática variable.
- Comprende limitaciones prácticas relacionadas con la naturaleza difusa del páncreas del ratón, lo que requiere una separación cuidadosa de los tejidos circundantes para mantener la integridad de la muestra.
