Name: Preparación de Herbal Medicine: Decocción de Er-Xian y suero que contiene Er-Xian para In Vivo Y In Vitro Experimentos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprende a preparar la decocción Er-Xian, una medicina herbal tradicional china, para estudios in vivo e in vitro en modelos animales. Este protocolo estandarizado permite evaluar sus efectos sobre la osteogénesis mediante análisis histológico y micro-CT.

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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81573992). Damos las gracias a Emily K. Lo y Kathleen DiNapoli por su ayuda en la edición de idiomas.

El protocolo sigue las pautas del cuidado animal de la universidad de Shangai de la medicina china tradicional y es aprobado por el experimento animal Comité de Ética animal de Shangai. 1. Protocolo I: Preparación de EXD <ol><li> Cálculo <ol><li> Administrar el EXD a un grupo de tratamiento de 10 ratones hembra de seis meses de edad de Imprinting Control Region (ICR) (0,02 kg / ratón), 5 días a la semana durante 12 semanas. NOTA: Se necesitan un total de 1.702 EXDs. Debido a que los EXDs se miden en incrementos discretos, en la práctica real, administrar 2 EXDs. </li><li> Calcular el volumen de EXD aplicado por ratón ( es decir, V = (0,1418 EXD / kg • día) * (0,02 kg / ratón) * 50 ml / EXD = 0,14 ml / ratón • día). </li></ol></li><li> Remojo <ol><li> Colocar todas las materias primas de dos EXD ( es decir, Curculigo orchioides Gaertn (18 g), Herbaa Epimedii (18 g), Radix Morindae Officinalis (18 g), RAdix Angelicae Sinensis (18 g), Cortex Phellodendri (12 g) y Rhizoma Anemarrhenae (12 g), 96 g en total) en un recipiente con tapa. NOTA: Se recomienda un recipiente de cerámica. </li><li> Macerar las hierbas crudas con 500 mL de agua destilada durante 1 h; El agua debe cubrir las hierbas por cerca de una pulgada. Deja que todas las hierbas se empapen completamente. </li></ol></li><li> Primera decocción acuosa <ol><li> Calentar las hierbas utilizando una cocina de gas o una cocina de inducción de alta potencia hasta que el agua hierve (alrededor de 5 - 10 minutos, el tiempo depende de la potencia de calefacción, el recipiente y la cantidad de hierbas y agua). Baja la potencia a fuego lento durante 2 h. </li></ol></li><li> Primera filtración <ol><li> Cubra un vaso de precipitados de 500 ml con papel de filtro regular o con gasa y algodón. Vierta cuidadosamente la decocción en el vaso de precipitados a través del filtro. Deje las hierbas en el recipiente. </li><li> Devolver el residuo de hierbas restanteN el papel de filtro al recipiente. </li></ol></li><li> Segunda decocción acuosa <ol><li> Añadir agua destilada al recipiente con las hierbas; Deje cubrir las hierbas por cerca de una pulgada. </li><li> Repita el paso 1.3. </li></ol></li><li> Segunda filtración <ol><li> Repita los pasos 1.4.1 y 1.4.2. </li><li> Vierta la segunda decocción en el mismo vaso. Mezclar la primera y la segunda decocciones juntas. </li></ol></li><li> Concentración <ol><li> Colocar el vaso en una cocina de gas con gasa de alambre libre de amianto entre ellos, calentar la decocción con un bajo cocción a fuego lento y revolver lentamente y continuamente con una barra de vidrio. </li><li> Cuando la decocción se reduce a 200 ml, se transfiere a un vaso de precipitados de 500 ml. </li><li> Repita el paso 1.7.1 hasta que la decocción se reduzca a 100 mL. </li></ol></li><li> Almacenamiento y administración <ol><li> Transferir la decocción concentrada a una botella de vidrio estéril. Dejar enfriar a temperatura ambienteRe (RT). Almacenar a 4 ° C si se utiliza dentro de una semana oa -70 ° C para el almacenamiento a largo plazo. </li><li> Usando una aguja de sonda, administre 0,14 mL / ratón de la decocción a ratones ovariectomizados (OVX) una vez al día, 5 días a la semana durante 12 semanas. </li></ol></li></ol> 2. Protocolo II: Preparación de suero que contiene EXD <ol><li> Cálculo <ol><li> Calcular la dosis equivalente de rata (RED) usando 0,15 kg como el peso corporal de cada rata (1 mes de edad): dB = (1/60) * (90/100) * (60 / 0.15) 1/3 = 0.111 EXD / Kg / día. NOTA: Se necesita un total de 10 ml de suero que contenga EXD para preparar 100 ml de medio de cultivo (10% de suero que contenga EXD). Se espera que cada rata proporcione 2 ml de suero. Por lo tanto, 6 ratas (una pérdida del 20% se tienen en cuenta) son necesarios para la administración de EXD una vez al día durante 3 días. El número de EXD es: (0.111 EXD / kg • día) * (0.15 kg / rata) * (6 ratas) * (3 días) = ​​0.300 EXD. De nuevo, debido a que los EXDs se miden en incrementos discretos,Utilice 1 EXD. </li><li> Calcular el volumen de EXD aplicado por rata ( es decir, V = (0.111 EXD / kg • día) * (0.15 kg / rata) * (50 mL / EXD) = 0.83 mL / rata • día). </li></ol></li><li> Remojo <ol><li> Ponga las materias primas para 1 EXD en un recipiente con una tapa. Macerar las hierbas crudas en agua destilada durante 1 h; El agua debe cubrir las hierbas por cerca de una pulgada. Deja que todas las hierbas se empapen completamente. </li></ol></li><li> Primera decocción acuosa <ol><li> Calentar las hierbas utilizando una cocina de inducción de alta potencia hasta que el agua hierve (alrededor de 5 - 10 min, el tiempo depende de la potencia calorífica, el recipiente y la cantidad de hierbas y agua). Apague la alimentación a fuego lento durante 2 h. </li></ol></li><li> Primera filtración <ol><li> Cubra un vaso de precipitados de 500 ml con papel de filtro regular o con gasa y algodón. Vierta cuidadosamente la decocción en el vaso de precipitados a través del filtro. Deje las hierbas en el recipiente. </li><li&gt; Devuelva el residuo de hierbas en el papel de filtro al recipiente. </li></ol></li><li> Segunda decocción acuosa <ol><li> Añadir agua destilada al recipiente con las hierbas; Deje cubrir las hierbas por cerca de una pulgada. </li><li> Repita el paso 2.4. </li></ol></li><li> Segunda filtración <ol><li> Repita los pasos 2.5.1 y 2.5.2. </li><li> Vierta la segunda decocción en el mismo vaso de precipitados que en el paso 2.4.1 y mezcle la primera y la segunda decocciones juntas. </li></ol></li><li> Concentración <ol><li> Colocar el vaso en una cocina de gas con gasa de alambre libre de amianto entre ellos, calentar la decocción con un bajo a fuego lento y revolver lentamente y continuamente con una varilla de vidrio. </li><li> Cuando la decocción se reduce a 100 ml, se transfiere a un vaso de precipitados de 100 ml. </li><li> Repita el paso 2.7.1 hasta que la decocción se reduzca a 50 ml. </li></ol></li><li> Almacenamiento y administración <ol><li> Transferir la decocción concentrada en unaBotella de vidrio. Dejar enfriar a RT. Almacenar a 4 ° C si se utiliza dentro de una semana oa -70 ° C para el almacenamiento a largo plazo. </li><li> Administrar intragástralmente 0,83 mL / rata una vez al día durante 3 días. </li></ol></li><li> Preparación de suero que contiene EXD <ol><li> Anestesiar las ratas por inyección intraperitoneal de 300 ml / 100 g de 80 mg / kg de ketamina y 10 mg / kg de xilazina a 1 h después de la última administración de EXD. Confirme la adecuada anestesia por pellizco del dedo del pie. </li><li> Inciso de la piel y el peritoneo de la rata desde el abdomen hasta el fondo del tórax con un bisturí (o tijeras de operación recta). Crear una incisión de longitud y profundidad de unos 5 cm y 0,5 cm, respectivamente. Mueva las vísceras abdominales a la izquierda utilizando papel de seda. </li><li> Usando papel tisú, retire el tejido conectivo de la aorta abdominal para exponer claramente el vaso. </li><li> Saque la sangre lentamente de la aorta abdominal usando una jeringa calibre 22 de 10 ml. Transferirlo aUn tubo estéril de 15 ml después de retirar la aguja; Una rata puede producir 8-10 ml de sangre. NOTA: La rata debe estar viva ( es decir, con la aorta abdominal pulsando) al comenzar el dibujo de sangre y muerta después de que el dibujo se complete. </li><li> Coagular la sangre en posición vertical durante 30 - 60 min a la habitación RT. Centrifugar a 500-600 xg durante 20 min. Colocar cuidadosamente todo el sobrenadante (suero) en un tubo estéril de 50 ml y mezclar todo el suero (de diferentes animales). </li><li> Realizar la inactivación por calor mediante la incubación del suero en un baño de agua a 56 ° C durante 30 min. Filtrar el suero utilizando un filtro de jeringa con una membrana de polietersulfona hidrófila de 0,22 μm de tamaño de poro. Utilice el suero fresco o guárdelo a -20 ° C. </li></ol></li><li> La preparación de suero que contiene un fármaco de control (utilizada en el grupo de control) <ol><li> Administrar cada rata con el mismo volumen de solución salina (0,83 mL) una vez al día durante 3 días. Los otros pasos son los mismos que en el paso 2.9.</li></ol></li><li> Solicitud <ol><li> Añadir 10 ml de suero que contenga EXD o suero que contenga fármaco a cada 100 ml de medio, más 1% de penicilina-estreptomicina (PS) [ 23] . </li></ol></li></ol>

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<li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK%2FSTAT+signaling+of+HSC-T6+cells%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Gan+Zang+Bing+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li>
<li>Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).</li>
<li>Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).</li>
<li>Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

En los últimos años, se ha prestado más atención a las hierbas medicinales, un tipo de medicina alternativa que se ha aplicado en el entorno clínico en el mundo oriental durante miles de años. Diferente del patrón de &quot;banco a la cama&quot; de la medicina moderna, la medicina herbal tradicional primero requiere la &quot;cama al banco&quot; patrón para explicar sus mecanismos. Esto puede ser seguido por la validación realizada en la etapa de banca y el procesamiento para el desarrollo de fármacos recién optimizados. ...

El interés en el estudio y la aplicación de la medicina herbaria tradicional está creciendo actualmente. A diferencia de las drogas modernas, en las cuales los ingredientes químicos son definidos, las fórmulas herbarias tienen algunos ingredientes desconocidos y requieren procesos de extracción para permitir la entrega de sus compuestos activos. Aunque muchos estudios tratan de seleccionar un pequeño compuesto con una estructura bien conocida como representante de toda la hierba o fórmula herbaria, ni las eficacias farmacológicas ni los mecanismos pueden considerarse equivalentes 1 , 2 . Mientras que las huellas dactilares permiten el análisis de los constituyentes de fórmulas herbarias complejas, algunos constituyentes todavía no se analizan claramente, lo que conduce a un desafío cuando se combinan todos los extractos para el estudio 3 . Las interacciones de numerosos constituyentes / extractos median los efectos terapéuticos de las hierbas medicinales. Para conservar esta ventaja, la forma tradicional de extracto-decocciónIon-todavía es ampliamente utilizado en la clínica. Dado que el procedimiento de extracción tiene un gran impacto en la eficacia terapéutica, es necesario un protocolo estándar de decocción tradicional de agua, especialmente para estudios in vivo 4 , 5 . Por otro lado, al explorar mecanismos farmacológicos, la administración de decocciones a base de hierbas durante estudios in vitro o ex vivo es también un desafío. El concepto de un suero que contenía fármacos fue propuesto por primera vez por Tashino en 1988 6 . Desde entonces, un número creciente de investigadores lo han aplicado a la medicina herbal 7 , 8 , 9 . Aunque el método del suero que contiene fármaco tiene algunas limitaciones, tales como la influencia de ciertos componentes del suero, todavía se considera que es un método que imita de cerca las condiciones fisiológicas. 10 , 11 , 12 , 13 . También se ha aplicado al tratamiento de la anemia aplásica 14 , osteoporosis menopáusica 15 , 16 , 17 , fallo ovárico prematuro 18 , cáncer de mama 19 , cáncer de ovario 20 y pubertad tardía 21 . Aquí presentamos protocolos detallados para la preparación de la decocción er-xian (EXD) y su suero que contiene fármaco. Además, se describe la aplicación de EXD y EXD conteniendo suero a los modelos de osteoporosis menopáusicas murinos. Un EXD se compone de 9 g cada uno de Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM, Radix Morindae Officinalis y Radix Angelicae Sinensis y 6 g de Cortex Phellodendri y Rhizoma Anemarrhenae por paciente adulto al día. La dosis equivalente para un ratón es de 0,1418 EXD / kg / día basándose en la siguiente ecuación 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA y dB se refieren a la dosis por peso corporal (mg / kg) del ser humano y del ratón, respectivamente. La dosis, en mg / kg, se sustituye por el número de EXD / kg. RA y RB representan el factor del cuerpo humano y el factor corporal del ratón respectivamente, que son proporcionales a la (superficie corporal (m 2 ) / peso corporal (kg)) 2/3 (ver Tabla 1 ). WA y WB indican el peso corporal (kg) del humano y del ratón, respectivamente.

<table><tbody><tr><td>Curculigo orchioides Gaertn (9&thinsp; g), Herbaa Epimedii (9&thinsp; g), Radix Morindae Officinalis (9&thinsp; g), Radix Angelicae Sinensis (9&thinsp; g), Corteza Phellodendri (6&thinsp; g), y Rhizoma Anemarrhenae (6&thinsp; g)</td> <td>Kang-qiao Medicina China Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN)</td><td>160922</td><td>Componentes EXD</td></tr><tr><td>Papel</td><td>de filtro GElifesciences</td><td>99-103-952</td><td>Filtro EXD decocción antes de la concentración</td></tr><tr><td>Impresión Ratones de la región de control (ICR)</td><td>Centro de Animales de Laboratorio de Shanghái</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>Estudio in vivo</td></tr><tr><td>Ratas Sprague Dawley</td> Centro de <td>Animales de Laboratorio de Shanghái</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>Preparación de suero que contiene EXD</td></tr><tr><td>Filtro de jeringa</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>0.22 &micro; m</td></tr><tr><td>agujas de sonda nasogástrica (10 ml)</td><td>Shanghai BO Ge departamento de ventas comerciales</td><td>59104274</td><td>Administración de</td></tr><tr><td>ketamina EXD (80 mg/kg)&nbsp;</td><td>Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td><td>H35020148</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Xilacina (10 mg/kg)</td><td>Sunway Pharma Co. Ltd</td><td>CB07591</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Dulbecco' s modificación de Eagle' s medio Dulbecco (DMEM) medio de cultivo</td><td>Gibco</td><td>12800-116</td><td>DMEM con 2 mM L-glutamina y sin ribonucleósidos y ribonucleótidos</td></tr><tr><td>Estreptomicina</td><td>Sigma</td><td>1277</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr><tr><td>Penicilina</td><td>Sigma</td><td>4687</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr></tbody></table>

preparación de herbal medicine: decocción de er-xian y suero que contiene er-xian para<em&gt; in vivo</em&gt; y<em&gt; in vitro</em&gt; experimentos

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

La medicina herbal tradicional, una medicina alternativa en el ambiente clínico, ha recibido una atención creciente en los últimos años. Antes de la entrega al cuerpo, se requiere comúnmente un procedimiento de extracción adicional para liberar los componentes activos de las hierbas crudas. La decocción acuosa es un procedimiento de extracción clásico que todavía se utiliza ampliamente en los entornos clínicos. Aquí, proponemos un protocolo detallado para la decocción er-xian (EXD) con el fin de aplicar las decocciones a base de hierbas a los estudios experimentales. Se describe el cálculo de una dosis apropiada para animales, así como los cuatro pasos principales de EXD: remojo, decocción de agua, filtración y concentración. Además, el suero que contiene EXD se introduce a las ratas como un medio de validación in vitro . En este caso, las ratas fueron administradas por vía oral EXD durante tres días. Las muestras de sangre se recogieron entonces, se inactivaron, se centrifugaron y se filtraron. El suero, diluido con el medio de cultivo, puede utilizarse para tratar células o tejidos en vItro Por ejemplo, EXD se aplicó tanto a estudios in vivo e in vitro y demostró que EXD mejora la osteogénesis. Este protocolo puede utilizarse como referencia para la preparación y aplicación de medicamentos herbales.

El efecto de EXD sobre la densidad ósea de ratones OVX La tinción con hematoxilina y eosina (H &amp; E) de la sección de la vértebra lumbar muestra un aumento de las trabéculas óseas después del tratamiento EXD in vivo ( Figura 1A , panel derecho) en comparación con las del grupo OVX ( Figura 1A , panel izquierdo). La Figura 1B muestra las imágenes representativas de μCT...

Aquí, se presenta la preparación de una decocción er-xian (EXD) en cuatro pasos-empapamiento, decocción, filtración y concentración- y demuestran la administración de un suero preparado para EXD a ratas. Estos métodos son aplicables al estudio in vivo e in vitro de las decocciones a base de hierbas como las medicinas tradicionales chinas.

Preparación de Herbal Medicine: Decocción de Er-Xian y suero que contiene Er-Xian para<em&gt; In Vivo</em&gt; Y<em&gt; In Vitro</em&gt; Experimentos

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

El objetivo general de este procedimiento es preparar un decocción er-xian, una medicina herbal tradicional china para su aplicación in vivo e in vitro. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la medicina herbal sobre la preparación y aplicación de una medicina tradicional china. La principal ventaja de esta técnica es que los pasos de extracción con agua son similares a los utilizados en un entorno clínico.Coloque los materiales crudos para una decocción er-xian en un recipiente con tapa y agregue suficiente agua destilada para cubrir las hierbas aproximadamente un centímetro. Ponga la tapa al recipiente y macere las hierbas crudas durante una hora. Luego, utilice una estufa de gas a potencia alta para calentar las hierbas hasta que el agua hierva.Reduzca la potencia a un fuego lento y decocione las hierbas durante dos horas. Al final de la primera decocción con agua, cubra un vaso de vidrio de 500 mililitros con gasa y algodón, y vierta cuidadosamente únicamente el líquido de la decocción en el vaso a través del filtro. Devuelva cualquier residuo de hierbas presente en el papel filtro al recipiente, y agregue suficiente agua destilada fresca para cubri

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este artículo proporciona un protocolo detallado para preparar una solución de trabajo de gránulos Gushukang para estudios en animales y gránulo GSK que contiene suero para experimentos in vitro. Este protocolo se puede aplicar a las investigaciones farmacológicas de medicamentos a base de hierbas, así como a las prescripciones para experimentos in vivo e in vitro.

Preparación de gránulos Gushukang (GSK) para experimentos in Vivo e In Vitro

Este protocolo proporciona una estrategia de combinación de dos hierbas para tratar las células PC12 lesionadas. El protocolo proporciona una referencia para optimizar el mejor modo de aplicación de la medicina tradicional china (MTC).

Explorando la estrategia de combinación de dos hierbas para tratar las células PC12 lesionadas

En este protocolo, la tecnología de procesamiento de aceite de cordero de Epimedii folium (EF) se optimizó aplicando una metodología experimental de superficie de diseño-respuesta de Box-Behnken, y se investigó preliminarmente el efecto de la EF cruda y optimizada extraída en agua en el desarrollo embrionario del pez cebra.

Optimización de la tecnología de procesamiento de aceite de cordero Epimedii folium y prueba de su efecto en el desarrollo embrionario del pez cebra

Se describe un protocolo general para el seguimiento de las células in vivo mediante resonancia magnética en un modelo de ratón con ex vivo las células marcadas. Un protocolo típico para el etiquetado de células, el procesamiento de adquisición de imágenes y la cuantificación se incluye.

In vivo MRI de 19F para el seguimiento de la célula

Este método fue desarrollado con el objetivo de ofrecer una solución de fármaco constante a través de la arteria carótida, para evaluar la farmacocinética de nuevos fármacos en modelos de ratón.

Infusiones de la arteria carótida para farmacocinéticas y farmacodinámicas Análisis de taxanos en ratones

Aquí, la monitorización en tiempo real del metabolismo de las células tumorales, combinada con un modelo de metástasis de membrana corioalantoidea (CAM) de embrión de pollo in vivo, se utiliza para evaluar nuevos objetivos/agentes anticancerígenos por su capacidad para sensibilizar las células tumorales a los quimioterapéuticos que dañan el ADN.

Evaluación de la efectividad del medicamento para el cáncer Sensibilización<em&gt; In Vitro</em&gt; Y<em&gt; En Vivo</em

Este protocolo describe los pasos necesarios para realizar la validación ex vivo de experimentos de imágenes de xenoinjertos de fluorescencia de infrarrojo cercano in vivo en ratones utilizando nanocuerpos marcados con fluoróforos y anticuerpos convencionales.

Validación de nanocuerpo y basados ​​en anticuerpos<em&gt; En Vivo</em&gt; Experimentos tumor de xenoinjerto NIRF-de formación de imágenes en ratones utilizando<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Citometría de flujo y microscopía

Xenoinjertos de tumores humanos son vascularizado y infiltrada por células de origen de ratón durante la fase de crecimiento in vivo. Para evitar el sesgo causado por estas células contaminantes durante el análisis de aguas abajo, hemos desarrollado un método que permite el agotamiento completo de todas las células de ratón mediante clasificación celular magnética.

El agotamiento de las células de ratón a partir de xenoinjertos de tumores humanos mejora significativamente análisis de aguas abajo de las células diana

Aquí, se describen métodos optimizados para generar modelos in vivo e in vitro de esteatosis hepática y para analizar los fenotipos esteatóticos y los parámetros fisiológicos relacionados.

Análisis optimizada de<em&gt; En Vivo</em&gt; y<em&gt; In Vitro</em&gt; La esteatosis hepática

Este manuscrito describe la entrega eficiente, no viral de miR a las células endoteliales por un vector de PEI / MNP y su magnetización. Por lo tanto, además de la modificación genética, este enfoque permite la orientación magnética de las células y de detección de MRI. La técnica se puede utilizar para mejorar las características de los productos de células terapéuticas.

Preparación y<em&gt; In Vitro</em&gt; Caracterización de Magnetized miR-modificado células endoteliales

Aprende a preparar la decocción Er-Xian, una medicina herbal tradicional china, para estudios in vivo e in vitro en modelos animales. Este protocolo estandarizado permite evaluar sus efectos sobre la osteogénesis mediante análisis histológico y micro-CT.

Preparación de Herbal Medicine: Decocción de Er-Xian y suero que contiene Er-Xian para

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