Un Modelo de Ratón de Único y Repetitivo Lesión Cerebral Traumática Leve

El objetivo general de este modelo de ratón de lesión cerebral traumática o TBI es crear un método confiable y reproducible para examinar los mecanismos que subyacen a las lesiones cerebrales conmocionantes y subconmocionantes. Este método facilita la investigación de preguntas clave en el campo de las lesiones cerebrales traumáticas en ratones, como por ejemplo, cuáles son los cambios fisiológicos que ocurren en el cerebro después de una conmoción cerebral única o repetida. La principal ventaja de esta técnica es que el dispositivo de lesiones está diseñado específicamente para permitir impactos repetitivos en la cabeza sin riesgo de fractura de cráneo o daño cerebral estructural.

Antes de comenzar el procedimiento, encienda el aire comprimido e inicialice el impactador neumático de alta velocidad a un ajuste de presión de 861,85 kilos pascales. Calibre la máquina a la velocidad y el tiempo de permanencia deseados. Coloque la base llena de gel, de modo que la línea media sea perpendicular a la trayectoria de la punta del impactador y registre los pesos de todos los ratones que se van a utilizar.

A continuación, transfiera y anestesie el ratón al aparato MTBI, colocando la cabeza sobre la almohadilla de gel con el cráneo perpendicular a la punta del impactador y cinta adhesiva sobre la cabeza del ratón, para crear una superficie plana y asegurarse de que las orejas estén alejadas del lugar del impacto. Baje la punta del impactador de politetrafluoroetileno para alinearla con la línea media sagital en el centro de la cabeza, justo detrás de los ojos. La punta del impulsor tiene 10 milímetros de diámetro y cubrirá la mayor parte del área de la cabeza.

Ajuste el impactador hasta que toque la superficie de la cabeza del mouse. A continuación, retraiga la punta y reduzca manualmente la profundidad de deflexión requerida a 7,5 milímetros. Ahora, arme el sistema de control de adquisición de datos y presione el botón de disparo para impactar la cabeza del mouse.

Inmediatamente después del impacto final, transfiera el ratón a la mesa de trabajo en posición supina, sin el cono de la nariz y use un cronómetro para medir la latencia del retorno del reflejo de enderezamiento para determinar el tiempo de pérdida de conciencia y el tiempo de regreso, de la deambulación espontánea. Una vez que se recupere a su comportamiento normal, regrese al animal a su jaula de origen. El retorno del tiempo del reflejo de enderezamiento, es una evaluación neurológica aguda de la gravedad de la lesión que se puede utilizar para cuantificar la pérdida de conciencia después de la MTBI.

Por ejemplo, los animales que reciben un solo MTBI demuestran un aumento significativo en la pérdida de conciencia y los tiempos de deambulación, en comparación con los animales simulados. En los paradigmas de lesiones repetidas, la pérdida de conciencia y los tiempos de deambulación aumentan significativamente en todos los días de prueba. La tinción de IBA uno para microglía y macrófagos revela cambios en los perfiles inflamatorios experimentales de ratones, después de repetir MTBI, en comparación con MTBI único o animales simulados.

Los animales MTBI repetidos muestran una fuerte inmunorreactividad a IBA uno que se limita al tracto óptico, sin evidencia de inflamación de la materia gris en la corteza, el hipocampo u otras áreas del cerebro. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en cinco minutos si se realiza correctamente.