Name: Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprende la técnica de constricción aórtica transversal mínimamente invasiva en ratones para inducir hipertrofia ventricular izquierda sin necesidad de intubación ni ventilación mecánica.

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Este trabajo fue financiado por una subvención (N ° 32016) de la Fundación Cardiovascular suizo a RT.

ratones macho C57BL/6J (10 semanas, 25-30g, n = 60) se utilizan en el presente Protocolo. Animales reciben atención humana conforme a las directrices formuladas por el Ministerio de agricultura y de educación superior e investigación, y todos los procedimientos se realizan con arreglo a la Directiva comunitaria europea de 24 de noviembre de 1986 () 86/609/CEE) y las leyes francesas. El protocolo fue aprobado por la &#34; Comité Regional de ética Animal experimentación CREMEAS &#34; (#2016092816207606).
 1. preparación para la cirugía <ol><li>mantener los ratones durante una semana después de la llegada a las instalaciones de animales en un ciclo de luz/oscuridad de 12h / 12h, en jaulas estándar, con la comida (para los detalles vea la tabla de materiales) y agua ad disponible libitum.</li>
	<li>En el día de la operación, coloque los ratones en jaulas individuales unos minutos antes de la inducción de la anestesia, con el fin de evitar cualquier estrés adicional a los animales. Esterilizar todos los instrumentos quirúrgicos el día antes de la cirugía.</li>
	<li>Intra peritoneally inyectar una dosis única de una mezcla de ketamina (51,4 mg/kg) y xilacina (3,3 mg/kg) diluidos en solución salina (0,9% NaCl).</li>
	<li>Asegurarse de la profundidad de la anestesia por la ausencia del reflejo de retirada del dedo del pie.</li>
	<li>Afeitar el cuello y el pecho del animal con una maquinilla de afeitar disponible comercialmente y desinfectar el área depilado con alcohol al 70%.</li>
	<li>Colocar el animal decúbito supino en una plataforma de trabajo de corcho limpio y fijar las patas con cinta adhesiva.</li>
</ol> 2. Cirugía <ol><li>técnica quirúrgica estéril se utiliza a través de los procedimientos. En una respiración espontáneamente animal, realizar una incisión cervical de la línea media longitudinal más de 10 mm con un cuchillo de hoja 11 de supra esternal a medio pecho para exponer el esternón ( figura 1).</li>
	<li>Retraer la tiroides pasando una sutura de estancia polipropileno monofilamento 4/0 con un Crile-Wood, sostenedor de la aguja y cinta a la plataforma de trabajo.</li>
	<li>Separar claramente los músculos pre-traqueales con pinzas micro-quirúrgica para destapar la tráquea.</li>
	<li>Deslice suavemente el liso con punta curva pinzas micro-quirúrgico con las mandíbulas cerradas sobre la tráquea y detrás del esternón.</li>
	<li>Por cuidadosamente abrir y cerrar las mordazas de las pinzas de microcirugía curvadas con punta suave realizan una disección Roma debajo de los músculos de la tráquea y detrás del esternón para alejar a la pleura.</li>
	<li>Tome los músculos supra-clavicular derecha con el fórceps recto micro-quirúrgico con punta lisa y tire suavemente el pecho del animal.</li>
	<li>Deslice la mordaza inferior de la pinza de hueso bajo el esternón y realizar una esternotomía parcial superior de 3-4 mm ( figura 2). Directa de la parte inferior de la mini-esternotomía levemente hacia la izquierda.</li>
	<li>Pasar una monofilamento 7/0 estancia polipropileno sutura de dentro a fuera a través del espacio intercostal segunda a cada lado de la mini-esternotomía usando un porta aguja micro-quirúrgico. Estar cerca de ángulo costo-esternal para evitar lesiones a vasos torácicos intercostales e internos o pleura.</li>
	<li>Difundir los bordes esternales con suturas de estancia polipropileno monofilamento 7/0 a cada lado y fijarlos con cinta adhesiva a la plataforma de trabajo.</li>
	<li>Mueva suavemente a un lado los músculos pre-traqueales, grasa mediastínica y timo utilizando liso con punta curva pinzas microquirúrgicas para visualizar el arco aórtico bajo ampliación de baja potencia (X 2-3) ( figura 3). Tener especial cuidado de no tocar ni dañar la pleura parietal para prevenir el desarrollo de neumotórax.</li>
	<li>Exponer el tejido blando debajo del arco aórtico atando fórceps ( figura 4 A) y extender suavemente sus mandíbulas. Preparar un túnel en el tejido blando debajo del arco aórtico con segunda pinzas para atar suavemente abriendo y cerrando las mandíbulas en el tejido suave.</li>
	<li>Pasar un segmento de ligadura de seda 6/0 a través de los ojos de una ayuda de ligadura ( figura 4 B) en la mano izquierda debajo del arco aórtico y recuperar atando pinzas en la mano derecha entre el origen de las derecha innominadas e izquierdas arterias carótidas comunes ( figura 5).</li>
	<li>Cortar una aguja de calibre 27 a una longitud de 5 mm y romos ambos extremos presionándolas con un sostenedor de la aguja Crile. Coloque la aguja de calibre 27 blunted cerca del arco aórtico ( figura 6) con el fórceps recto micro-quirúrgico con punta lisa y atar la sutura firmemente alrededor de la aguja y la aorta entre la carótida común izquierda y derecha innominada arterias usando el fórceps atar dos ( figura 7). Para amarrar bien la sutura, realizar un nudo doble inicial seguido por cuatro nudos adicionales. Asegúrese de que todos los nudos planos.</li>
	<li>Después de la ligadura, quite rápidamente, pero suavemente la aguja hasta lograr un estrechamiento del diámetro de 0,4 mm y una constricción aórtica reproductivos transversal 65-70%.</li>
	<li>Revise hemostasia del tejido blando alrededor del arco aórtico, de los bordes esternales y los músculos pre-traqueales. Poner gasa hemostática reabsorbible donde se observa exudación de sangre. Quitar el polipropileno de monofilamento 7/0 alojarte las suturas que se utilizan para separar los bordes esternales.</li>
	<li>Pasar una simple sutura de polipropileno monofilamento 6/0 con un micro-quirúrgico portagujas de fuera a dentro el espacio segundo intercostal izquierdo y luego desde dentro a fuera del espacio intercostal derecha segundo. Estar cerca de ángulo costo-esternal para evitar lesiones a vasos torácicos intercostales e internos o pleura.</li>
	<li>Unir los bordes esternales atando sutura de polipropileno de monofilamento 6/0 con un Crile-Wood porta-agujas.</li>
	<li>Cerca de la piel con un ejecutar sutura en una sola capa con un Crile-Wood sostenedor de la aguja de polipropileno monofilamento 5/0.</li>
	<li>Realizar el procedimiento de falsa idéntico a la operación de constricción sin atar una sutura alrededor de la aorta.</li>
</ol> 3. Recuperación postoperatoria <ol><li>controlar los animales muy de cerca. transferir el ratón a una jaula individual y colocar en una posición propensa.</li>
	<li>Permitir el ratón para recuperar con una luz de calentamiento hasta despertar (menos de 1 h después de inducir anestesia).</li>
	<li>Para la analgesia postoperatoria, inyectar 0,1 mg/kg de buprenorfina por vía intraperitoneal. repetir las inyecciones subcutáneas de 0.1 mg/kg de buprenorfina cada 8 h durante los primeros tres días según lo indicado.</li>
	<li>Colocar los ratones operados en jaulas estándar (máximo 3 ratones por jaula) y mínimos 2 ratones por jaula.</li>
</ol> 4. Cosecha del corazón <ol><li>en el día del análisis, eutanasia el ratón con una solución de ketamina 300 mg/kg y xilacina 20 mg/kg en solución salina por inyección intraperitoneal.</li>
	<li>En primer lugar recoger la sangre de la vena cava inferior y luego a través de la misma línea Inyecte 5 mL de solución de 2,6 mM de EDTA en solución salina.</li>
	<li>El corazón de la cosecha, eliminar las aurículas y peso del corazón (los ventrículos derecho e izquierdos sin aurículas).</li>
	<li>Separar la izquierda de la derecha ventrartículo con el septo queda a la parte del ventrículo izquierdo. Pesar dos muestras de tejido y congelar en nitrógeno líquido.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVerma%2C+SK+%22Manual+of+Research+Techniques+in+Cardiovascular+Medicine%22">Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine</a>. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).</li>
<li>Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+blood+pressure+and+morphological+traits+in+cardiovascular-related+organs+in+13+different+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3164086/">Transverse aortic constriction in mice.</a> J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).</li>
<li>Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447656">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC3402700/">IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li>
<li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).</li>
<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
<li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li>
<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

Los autores no tienen ningún conflicto de interés que revelar.

El objetivo de este protocolo es presentar una ilustración paso a paso de la técnica quirúrgica para la constricción aórtica transversal mínimamente invasiva en ratones. Descripción técnica detallada de la constricción aórtica transversal en ratones ha sido reportado por otros autores2,8. Sin embargo, estos investigadores realizan la cirugía después de la intubación y la ventilación de los animales. El uso de un paso adicional de intubación ventilación aumenta la...

En los últimos años, se ha realizado el estudio de la insuficiencia cardíaca en modelos de animales viables1. En comparación con grandes modelos animales de insuficiencia cardíaca, modelos animales pequeños tienen numerosas ventajas potenciales. Al lado de bajos costos de mantenimiento y vivienda, modelos animales pequeños son accesibles a los investigadores más debido a la menos compleja de las instalaciones necesarias2.
Modelos de ratón insuficiencia cardiaca ofrecen muchas de las mismas ventajas que los modelos de rata. Además vivienda a menor costo3, modelos de ratón se benefician de la disponibilidad de relevantes transgénicas y knockout (KO) cepas. La posibilidad de células tipo-específica, inducible por KO o estrategias transgénicas hacen el ratón una valiosa herramienta para el estudio de la patogenia de la insuficiencia cardíaca y para tratar de identificar nuevos regímenes terapéuticos3.
Entre el ratón actualmente utilizaron4modelos de insuficiencia cardíaca, constricción aórtica transversal (TAC) que primero fue descrita por Rockman5 es el modelo preferido para generar hipertrofia ventricular izquierda (HVI) inducida por sobrecarga de presión1 , 3. la mayor ventaja de este modelo es la capacidad para permitir la estratificación de la HVI2, aunque ventrículo izquierdo remodelado en respuesta a la TAC es variable entre las cepas de ratón diferente. En particular, ratones C57BL/6 desarrollan rápida dilatación del LV después de TAC que no puede ocurrir con otras cepas4,6,7.
El inicio repentino de hipertensión conseguido TAC causas un aproximadamente 50% aumento en masa del VI en 2 semanas, que permite examinar rápidamente la actividad de intervenciones farmacológicas o moleculares con el objetivo de modular el desarrollo de HVI4. La inducción aguda de la hipertensión severa por TAC no exactamente reproducir la hipertrofia ventricular izquierda progresiva y remodelación observado en el ajuste clínico de la estenosis aórtica o hipertensión arterial. Sin embargo, este modelo es utilizado por muchos investigadores para identificar y modificar nuevas dianas terapéuticas en la insuficiencia cardíaca4.
Realización de TAC en los ratones requiere mayor experiencia quirúrgica que requiere de otras técnicas utilizadas para inducir HVI y posterior insuficiencia cardiaca2. Mayoría de los autores realiza este procedimiento de intubación y ventilación del animal2,8, que hace este procedimiento más exigente y requiere mucho tiempo y agrega a la carga quirúrgica para el animal. Sólo algunos investigadores han utilizado mínimamente invasiva TAC en su estudio con breve referencia al procedimiento quirúrgico9,10,11.
El objetivo de este protocolo es describir paso a paso una técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones, destacando las etapas críticas del procedimiento simplificada y fácil de usar. Siguiendo estos pasos, uno fácilmente puede realizar esta técnica.

<table><tbody><tr><td>Microscopio quirúrgico</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>Razor</td><td>Rowenta</td><td>Nomad TN3650FO</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Suturas:</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polipropileno 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>Polipropileno 6/0</td><td>BBraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>Seda 6/0 ligadura&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Polipropileno 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>Polipropileno 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Medicamentos:</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Merial</td><td>Imalg&egrave; ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos:&nbsp; </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>para huesos</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>Ayuda para la ligadura</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de atado</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas Crile-Wood</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para microcirugía&nbsp;</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>pinzas de microcirugía&nbsp;</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de tejido</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas para microcirugía</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras para microcirugía</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras para mayonesa</td><td>Herramientas quirúrgicas finas</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillo de 11 hojas</td><td>Fine Surgical Herramientas</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td><Extracción > ARN fuerte y qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagent</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Ensayo de ARN fluorimétrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>ARN 6000 Nano kit</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ADNc de alta capacidad</td><td>Fisher Scientific</td><td>10400745</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Master Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Imprimaciones BNP</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ANP Fisher</td><td>Scientific</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Imprimaciones Taqman ACE</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Imprimaciones Taqman Col1a1&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman TGFb Imprimaciones Fisher</td><td>Scientific</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Gapdh</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Termociclador</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td>Software:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Prism 7</td><td></td></tr><tr><td>Alimento para animales</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieta completa para ratas/ratones adultos Safe</td><td>UB220610R</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia ventricular izquierda

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Constricción aórtica transversal (TAC) en ratones es una de las técnicas quirúrgicas más utilizadas para la investigación experimental de la presión inducida por sobrecarga izquierda hipertrofia ventricular (HVI) y su progresión a insuficiencia cardíaca. En la mayoría de las investigaciones divulgadas, este procedimiento se realiza con intubación y la ventilación del animal que lo hace exigente y requiere mucho tiempo y agrega a la carga quirúrgica al animal. El objetivo de este protocolo es describir una técnica simplificada de TAC mínimamente invasiva sin intubación y la ventilación de los ratones. Pasos críticos de la técnica se acentúan con el fin de lograr la baja mortalidad y alta eficiencia en la inducción de HVI.
Ratones C57BL/6 machos (10 semanas de edad, 25-30 g, n = 60) fueron anestesiados con una sola inyección intraperitoneal de una mezcla de ketamina y xilacina. Una respiración espontánea animales tras una esternotomía parcial superior 3-4 mm, un segmento de sutura de seda 6/0 a través de los ojos de una ayuda de ligadura se pasó bajo el arco aórtico y atado sobre una aguja calibre 27 blunted. Animales funcionan Sham experimentaron la misma preparación quirúrgica pero sin constricción aórtica. La eficacia del procedimiento en la inducción de HVI es atestiguada por un aumento significativo en la proporción de corazón y cuerpo. Esta relación se obtiene en los días 3, 7, 14 y 28 después de la cirugía (n = 6-10 en cada grupo y cada punto del tiempo). Usando nuestra técnica, la HVI se observa en TAC comparado con animales de la farsa del día 7 hasta el día 28. Operativa y tardía (más de 28 días) mortalidad es muy bajas en el 1,7%.
En conclusión, nuestra técnica rentable de mínimamente invasiva TAC en ratones lleva muy baja mortalidad operativas y postoperatorias y es altamente eficaz en la inducción de HVI. Se simplifica el procedimiento operativo y reduce el esfuerzo puesto en el animal. Se pueden realizar fácilmente siguiendo los pasos críticos descritos en este protocolo.

Operativa y última supervivencia La supervivencia operativa fue muy alta, 98,3% (59 de los 60) para toda la serie (TAC y animales funcionan sham). La muerte sólo operativa fue debido a una complicación de sangrado en un ratón cepillada para operación simulada. Supervivencia posoperatoria durante el período de observación de 28 días también fue excelente, un 98.3% (58 de 59). La única última muerte postoperatoria ocurrió en un ratón de TAC el día (D) 16, posiblemente de...

El objetivo de este protocolo es describir paso a paso la técnica de invasión mínima constricción aórtica transversal (TAC) en ratones. Por la eliminación de la intubación y la ventilación que son obligatorios para el procedimiento estándar utilizado, mínimamente invasiva TAC simplifica el procedimiento operativo y reduce el esfuerzo puesto en el animal.

Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

El objetivo general de este protocolo es establecer una constricción aórtica transversal mínimamente invasiva en ratones. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la implementación de la constricción aórtica transversal en ratones, como cómo crear un paso bajo el arco aórtico. Las principales ventajas de esta técnica son que es sencilla, fácil de usar y que elimina la necesidad de intubar y ventilar a los ratones.Mostraré el procedimiento junto con nuestra investigadora posdoctoral Simona Nemska, quien realizará los pasos de preparación pres quirúrgica del animal y vigilancia posoperatoria. El día del procedimiento, afeite el cuello y el pecho de un ratón anestesiado y desinfecte la piel expuesta con etanol al 70 %. Tras confirmar el nivel adecuado de sedación mediante el pellizco del dedo del pie, sujete al animal en posición supina sobre una superficie de trabajo limpia de corcho.A continuación, utilice una hoja de bisturí número 11 para realizar una incisión cervical longitudinal media de 10 milímetros, desde la escotadura yugular hasta la parte media del tórax, para exponer el esternón. Con un portagujas Crile-Wood, pase una sutura de retención de polipropilen

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Medicina

Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo de uso experimental para estudiar mecanismos que subyacen a la hipertrofia cardíaca y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describen los procedimientos para contraer la aorta para crear un grado de reproducibilidad de la hipertrofia cardiaca en ratones.

Constricción de la aorta transversa en ratones

El procedimiento quirúrgico utilizado para inducir el infarto de miocardio experimental en ratones comienza con toracotomía izquierda entre la tercera y las costillas cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. La arteria coronaria izquierda se ligó, el pecho se cierra y el ratón se le permite recuperarse de manera espontánea.

Técnica modificada para la ligadura de la arteria coronaria en ratones

En este video, demostramos un protocolo experimental para la constricción aórtica transversa mínimamente invasiva en ratones para examinar la insuficiencia cardíaca inducida por sobrecarga de presión.

Bandas del arco aórtico transversal en modelo de ratón: una técnica mínimamente invasiva en ratones para la inducción de alta presión en el ventrículo izquierdo

Se describe un procedimiento paso a paso para la creación de la sobrecarga de presión e hipertrofia del ventrículo izquierdo en ratas Wistar por la constricción de la aorta ascendente mediante un pequeño clip metálico. Este modelo se utiliza ampliamente para el estudio de los cambios de remodelación durante la hipertrofia cardíaca y para la identificación y evaluación de las estrategias para la regresión de dichos cambios.

Ascendente aórtica Constricción en ratas para la Creación de la sobrecarga de presión hipertrofia cardíaca Modelo

El objetivo de este protocolo es evaluar de forma no invasiva los cambios estructurales y funcionales cardiacas en un modelo de ratón de la enfermedad cardíaca creado por constricción de la aorta transversal, utilizando B y en modo M ecocardiografía y color / de pulso Doppler de onda.

Evaluación de la cardíaco morfológica y funcional Los cambios en el modelo de ratón de la constricción de la aorta transversa por ecocardiográfico Imaging

Mínimamente invasiva constricción de la aorta transversal (MTC) conserva los elementos esenciales de la constricción de la aorta transversal regular (TAC) al tiempo que elimina el uso de un ventilador con intubación traqueal. Demuestra ser un método altamente deseable para los estudios de alto rendimiento de sobrecarga ventricular izquierda, sobre todo en estudios de traducción.

La constricción aórtica mínimamente invasiva transversal en ratones

Aquí, presentamos un protocolo de constricción aórtica transversal (TAC) a través de una toracotomía lateral. Esta técnica es un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, cerrado pecho con el objetivo de simular la sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca en ratones utilizando la configuración estándar de laboratorio de TAC.

Un modelo del cerrado-pecho para inducir constricción aórtica transversal en ratones

Aquí, proporcionamos un enfoque útil para estudiar el mecanismo de la insuficiencia ventricular derecha. Se establece un enfoque más conveniente y eficiente de la constricción de la arteria pulmonar utilizando instrumentos quirúrgicos hechos internamente. Además, se proporcionan métodos para evaluar la calidad de este enfoque mediante ecocardiografía y cateterismo.

Inducción de la insuficiencia ventricular derecha por constricción pulmonar de la arteria y evaluación de la función ventricular derecha en ratones

Aquí se describe un protocolo paso a paso de la desbanding aorta quirúrgica en el modelo bien establecido de ratones de constricción aórtica. Este procedimiento no sólo permite estudiar los mecanismos que son la base del remodelado inverso del ventrículo izquierdo y la regresión de la hipertrofia, sino también probar nuevas opciones terapéuticas que podrían acelerar la recuperación miocárdica.

Estudio de la remodelación inversa del ventrículo izquierdo por desbanding aórtico en roedores

Este protocolo presenta un método mejorado para obtener hipertrofia miocárdica transitoria con sutura absorbible, simulando la disminución de la hipertrofia ventricular izquierda después de eliminar la sobrecarga de presión. Podría ser valioso para los estudios sobre el preaccondicionamiento hipertrófico miocárdico.

Operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria

El presente protocolo describe una técnica modificada y simplificada con un procedimiento de constricción aórtica transversa (TAC) mínimamente invasivo utilizando un retractor de fabricación propia. Este procedimiento se puede realizar sin un ventilador o microscopio e introduce sobrecarga de presión, lo que eventualmente conduce a hipertrofia cardíaca o insuficiencia cardíaca.

Una técnica modificada para la constricción aórtica transversa en ratones

Aprende la técnica de constricción aórtica transversal mínimamente invasiva en ratones para inducir hipertrofia ventricular izquierda sin necesidad de intubación ni ventilación mecánica.

Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda (Video) | JoVE Journal

Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda

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