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DOI: 10.3791/56442-v
Kristel Lourdault1,2, James Matsunaga1,2, Karen V. Evangelista1,2, David A. Haake1,2,3,4
1Veterans Affairs Greater Los Angeles Healthcare System, 2Departments of Medicine,David Geffen School of Medicine at University of California Los Angeles, 3Departments of Urology,David Geffen School of Medicine at University of California Los Angeles, 4Departments of Microbiology, Immunology, and Molecular Genetics,University of California Los Angeles
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí describimos una técnica que combina la mutagénesis de transposon con secuenciación de alto rendimiento para identificar y cuantificar a mutantes de transposon leptoespiral en tejidos después de un desafío de hámsters. Este protocolo puede utilizarse para mutantes de pantalla para la supervivencia y difusión en los animales y también se puede aplicar a estudios en vitro .
El objetivo general de esta técnica de secuenciación de transposones de alto rendimiento es identificar y cuantificar mutantes de transposones con defectos de aptitud in vivo e in vitro y, por lo tanto, identificar los genes de Leptospira implicados en la virulencia. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la Leptospira, como la identificación de genes implicados en la colonización, la diseminación y la supervivencia de las bacterias en el huésped. La principal ventaja de esta técnica es que se puede cribar un gran número de mutantes con un número limitado de animales.
Aunque este método fue diseñado para examinar la aptitud de los mutantes de Leptospira interrogans en el modelo de hámster con leptospirosis aguda, también se puede aplicar a través de modelos de infección crónica, estudios in vitro y otras cepas de Leptospira. Kritel Lourdault y Karen Evangelista, ambas postdoctoradas de mi laboratorio, harán una demostración del procedimiento. Primero, ensamble una unidad de filtración.
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