<em>In Vitro</em> SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

Wan-Shan Yang; Mel Campbell; Hsing-Jien Kung; Pei-Ching Chang

doi:10.3791/56629

In Vitro Ensayo de la sumoilación estudiar SUMO E3 ligasa actividad

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Biology

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In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

In Vitro Ensayo de la sumoilación estudiar SUMO E3 ligasa actividad

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09:45 min

January 29, 2018

DOI: 10.3791/56629-v

Wan-Shan Yang¹, Mel Campbell², Hsing-Jien Kung^2,3,4,5, Pei-Ching Chang^1,6

¹Institute of Microbiology and Immunology,National Yang-Ming University, ²UC Davis Cancer Center,University of California, Davis, ³Department of Biochemistry and Molecular Medicine,University of California, Davis, ⁴Institute for Translational Medicine, College of Medical Science and Technology,Taipei Medical University, ⁵Division of Molecular and Genomic Medicine,National Health Research Institutes, ⁶Center for Infectious Disease and Cancer Research,Kaohsiung Medical University

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A diferencia de ligasas de ubiquitina ligasas E3 SUMO algunos han sido identificados. Este modificado en vitro protocolo de sumoilación es capaz de identificar nuevos SUMO E3 ligasas por un ensayo de reconstitución en vitro .

El objetivo general de este experimento es verificar una proteína de interés que pueda ser SUMOilada o que sea una lygasa SUMO E3. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la SUMOilación, como la identificación de la lygasa SUMO E3. La principal ventaja de esta técnica es que podría utilizarse para la investigación de la especificidad de la ligasa SUMO E3 hacia diferentes formas iso de SUMO.

El demostrador del procedimiento será Wan-Shan Young, un estudiante de doctorado de mi laboratorio. Para purificar la etiqueta K-bZIP, primero incube 10 mililitros de lisado celular con 50 microlitros de perlas magnéticas marcadas con anticuerpos en un tubo de polipropileno de 14 mililitros. Luego gire el tubo a 50 revoluciones por minuto a cuatro grados centígrados durante tres horas en un mezclador de suspensión.

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