Name: Identificación de OTX1 y OTX2 como dos posibles marcadores moleculares para los Carcinomas Sinonasal y Neuroblastomas olfatorios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Descubre cómo identificar marcadores moleculares OTX1 y OTX2 para carcinomas sinonasales y neuroblastomas olfatorios mediante inmunohistoquímica y PCR en tiempo real. Este método permite obtener resultados diagnósticos en menos de seis horas.

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Este trabajo fue apoyado por Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fundación Comunitaria del año, Fundación del Monte de Lombardía y Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.

Todos los estudios fueron realizados según la declaración de Helsinki (1975) con el consentimiento informado por escrito y aprobado por el Comité de ética de la Universidad de Insubria en Varese.
1. recolección de las muestras
<ol><li>Recoger y todas las muestras humanas de Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) se dividen en diferentes subgrupos según la clasificación del WHO de tumores de cabeza y cuello14. Nota: Aquí utilizamos las siguientes muestras: mucosa sinonasal Normal como control (10 muestras); Papiloma invertido (PI, código de la CIE-O 8121/1); ITAC Sinonasal (ICD-O code 8144/3, 32 muestras); NITAC (código de la CIE-O 8140/3, 12 muestras); Carcinoma enquistado adenoideo (ACC, código 8200/3 de la CIE-O); Adenoma Pleomórfico (PA, código 8941/3 de la CIE-O); (Código de la CIE-O 9522/3, 13 muestras); Poco diferenciado Carcinoma del Neuroendocrine (PDNEC, código de la CIE-O 8041/3, 19 muestras); Tumor neuroendocrino (neto, código de la CIE-O 8041/3).</li>
</ol>2. inmunoquímica
<ol><li>
Parafina y rehidratación de secciones
	<ol>
<li>Calentar los portaobjetos de la muestra en un horno a 60 ° C por 30 min y rehidratar 3 μm espesor secciones FFPE usando una serie de alcohol al agua.</li>
		<li>Lave el portaobjetos en xileno durante 10 minutos y repita este paso; lavar los portaobjetos durante 5 minutos en alcohol al 100% y repita este paso con alcohol 95%, 85% y 75% en serie. Enjuague los portaobjetos durante 5 minutos en agua destilada.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bloqueando la actividad endógena
	<ol>
<li>Bloquear la actividad endógena mediante la colocación de las diapositivas en 3% peróxido de hidrógeno acuoso durante 12 minutos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Recuperación de antígeno
	<ol>
<li>Tratar con 10 mM de tampón de citrato (pH 6) por 10 min en un tratamiento de microondas para realizar recuperación de antígeno.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubación con el anticuerpo primario
	<ol>
<li>Lavar los cortes en tampón TBS (pH 7.4) y luego añadir solución de bloqueo durante 10 minutos.</li>
		<li>Lavar los cortes en tampón TBS (pH 7.4) y luego añadir 0,2% Tritón X.</li>
		<li>Incubar durante una noche a 4 ° C con cabra anti-humano OTX2 anticuerpo diluido 1: 100.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubación con el anticuerpo secundario
	<ol>
<li>Incubar las secciones por 1 h a temperatura ambiente con biotinilado conejo anticuerpo secundario de anti-cabra diluido 1: 200 seguido de ABC peroxidasa complejo (véase Tablas de materiales).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Desarrollar el immunoreaction
	<ol>
<li>Desarrollar el immunoreaction con 3, tetrahydrochloride 3'-diaminobenzidina y contratinción los núcleos con Harris Hematoxylin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Montaje y proyección de imagen
	<ol>
<li>Deshidratan las secciones utilizando una escala creciente de alcohol y aclarar a través de una sustancia de limpieza de origen terpeno (véase Tabla de materiales). Insertar secciones en medio de montaje, coloque las secciones en un portaobjetos de microscopio y observar las secciones a través de un microscopio óptico.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. ARN extracción y reverso-transcripción
<ol><li>
Extracción de RNA
	<ol>
<li>Extracto de RNA de las secciones por realizar el primer paso del Protocolo de inmunoprecipitación (ver sección 2.1) y mantener los portaobjetos en agua destilada. Sobreponga las secciones sin manchas con la hematoxylin-eosina correspondiente secciones manchada para identificar fragmentos de interés.</li>
		<li>Realizar la extracción de RNA utilizando un kit comercial de extracción de RNA para muestras FFPE (véase Tabla de materiales) y siguiente las instrucciones.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Reverso-transcripción del RNA
	<ol>
<li>Utilice un kit comercial para retro-transcribir RNA en cDNA (véase Tabla de materiales) siguiendo el protocolo. Retro-transcribir por lo menos 1.000 ng de RNA total para llevar a cabo varios análisis.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. en tiempo real PCR y análisis de datos
<ol><li>
PCR en tiempo real
	<ol>
<li>Realizar análisis PCR en tiempo real cuantitativos (qRT-PCR) con tecnología de punta de prueba (véase Tabla de materiales) y un termociclador.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparación de la mezcla de reacción de PCR
	<ol>
<li>Preparar la mezcla de reacción de PCR usando 12,5 μl de la mezcla principal basada en sondeos, 1.25 μl de OTX1 y OTX2 ACTB sondas (véase Tabla de materiales), 50 ng del cDNA y libre de nucleasas hasta 25 μl de volumen total de agua.</li>
		<li>Llevar a cabo todas las reacciones por triplicado utilizando el gen ACTB como control endógeno para normalizar los niveles de expresión génica.</li>
		<li>Centrifugar la placa a 1.109 x g durante 3 min y guardar la placa protegida de la luz a 4 ° C hasta que el experimento.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ajuste el termociclador
	<ol>
<li>Conjunto el perfil de Termociclador con un caliente inicio ciclo a 50 ° C por 2 min y 95 ° C durante 10 min, seguido de 40 ciclos a 95 ° C por 15 s y un ciclo final a 60 ° C durante 1 minuto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análisis nivel de expresión génica
	<ol>
<li>Normalizar los niveles de expresión génica mediante el método de umbral (ΔCt) ciclo comparativo utilizando el gen ACTB como control endógeno.</li>
		<li>Evaluar los niveles de expresión génica utilizando el método 2-ΔCt y trazar los resultados.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análisis estadísticos
	<ol>
<li>Realizar análisis estadísticos usando de Student t-Test, considerando los resultados estadísticamente significativos con p < 0.05.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeobox+genes+in+the+developing+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+genet%22%5BJournal%5D)">Homeobox genes in the developing central nervous system.</a> Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).</li>
<li>Omodei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Brain+Transcription+Factor+OTX1+Occurs+in+a+Subset+of+Normal+Germinal-Center+B+Cells+and+in+Aggressive+Non-Hodgkin+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22American+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma.</a> American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).</li>
<li>Levantini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unsuspected+role+of+the+brain+morphogenetic+gene+Otx1+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100 (18), 10299-10303 (2003).</li>
<li>Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+homeobox+OTX2+and+OTX1+in+the+early+developing+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain.</a> J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).</li>
<li>Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+homeobox+gene+expression+in+cancer%3A+cause+or+consequence%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence?</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).</li>
<li>de Haas, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+and+OTX2+expression+correlates+with+the+clinicopathologic+classification+of+medulloblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).</li>
<li>Terrinoni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+expression+in+breast+cancer+is+regulated+by+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53.</a> Oncogene. 30 (27), 3096-3103 (2001).</li>
<li>Yu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+promotes+colorectal+cancer+progression+through+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition.</a> Biochem. Biophys Res Commun. 44 (1), 1-5 (2014).</li>
<li>Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+CRX+and+OTX2+expression+in+human+retina+and+retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma.</a> J. Neurochem. 111 (1), 250-263 (2009).</li>
<li>Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+the+cell+cycle+in+mammary+gland+development+and+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+mammary+gland+Biol.+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis.</a> J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).</li>
<li>Cordes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+phenotypic+analysis+of+poorly+differentiated+sinonasal+neoplasms%3A+an+integrated+approach+for+early+diagnosis+and+classification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification.</a> Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).</li>
<li>Stelow, E. B., Bishop, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+from+the+4th+Edition+of+the+World+Health+Organization+Classification+of+Head+and+Neck+Tumours%3A+Tumors+of+the+Nasal+Cavity%2C+Paranasal+Sinuses+and+Skull+Base%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck+Pathol%22%5BJournal%5D)">Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base.</a> Head Neck Pathol. 11 (1), 3-15 (2017).</li>
<li>Llorente, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinonasal+carcinoma%3A+clinical%2C+pathological%2C+genetic+and+therapeutic+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 11 (8), 460-472 (2014).</li>
<li>Sidransky, D. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/profile/Lester_Thompson/publication/7200778_World_Health_Organization_classification_of_tumours_Pathology_and_genetics_of_head_and_neck_tumours/links/09e415102df86bd4a2000000.pdf">World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors</a>. 9, WHO Press. (2005).</li>
<li>Radulesku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+surgery+for+sinonasal+tumors%3A+The+transcribriform+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stomatol+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach.</a> J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118 (4), 248-250 (2017).</li>
<li>Muller, P. A. J., Vousden, K. H. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/ncb2641">p53 mutations in cancer.</a> Nature cell biology. 15 (1), 2-8 (2013).</li>
<li>Holmila, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profile+of+TP53+gene+mutations+in+sinonasal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer.</a> Mutat Res. 686 (1-2), 9-14 (2010).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este estudio muestra por primera vez que, a niveles del mRNA, se expresan los genes de la HB OTX1 y OTX2 sinonasal normal mucosa y las glándulas submucosal, pólipos inflamatorios, papilomas de Schneiderian sinonasal y en las distintas epiteliales y neuroectodérmicos Neoplasias, incluyendo epidermoide sinonasal adenocarcinomas de tipo no-intestinales, tumores tipo glándula salival, neoplasias neuroendocrinas y ONs.
Modificaciones y resolución de problemas:
Para evitar l...

OTX Los genes de la HB son el homólogo vertebrado de los genes de orthodenticle de Drosophila (otd) codifican para factores de transcripción que se expresan normalmente durante la morfogénesis embrionaria, y puede expresarse también en el organismo adulto con diversas funciones . Durante el desarrollo embrionario que controlan la especificación de identidad celular, diferenciación celular y la colocación de la axis¹ del cuerpo. La familia OTX incluye genes OTX1 y OTX2 que muestran diversas funciones. OTX1 participa en el cerebro y el desarrollo del órgano sensorial. En el organismo adulto, que se expresa en órganos sensoriales y se transcribe en niveles bajos en el lóbulo anterior de la hipófisis2; también desempeña un papel en la hematopoyesis, se expresa en hematopoyéticas pluripotenciales y progenitoras de las células3. OTX2 participa en el desarrollo de la cabeza rostral y sus actos de proteína traducida como un morfógeno porque genera un gradiente a través de qué otros genes activados o reprimidos de manera espacio-temporal, contribuyendo así a la célula proliferación y diferenciación. En el organismo adulto, OTX2 se encuentra exclusivamente en la glándula pineal y plexo coroideo4.
Mutaciones en genes OTX suelen relacionarse con la aparición de defectos congénitos, somáticas o metabólicos humanos. Ganancia o pérdida de mutaciones en genes OTX podrían promover tumorigenesis si no son capaces de controlar adecuadamente el crecimiento y diferenciación celular5. En leucemias y linfomas, así como en muchos tumores sólidos (e.g., meduloblastomas6, linfomas no Hodgkin agresivos2, carcinomas de mama7, cánceres colorrectales8y retinoblastoma9), la expresión desregulada de OTX HB genes es bien documentado10. Además, se han demostrado mutaciones de OTX2 en casos de anophthalmia y microphtalmia11 debido al papel crucial de este gen en el control del desarrollo del ojo.
En el contexto de neoplasias sólidas, el descubrimiento de marcadores moleculares y fenotípicos es un reto importante para el diagnóstico, clasificación y tratamiento de varios tipos de tumor11, los que se originan en la cavidad nasal y paranasal incluidos senos paranasales. De hecho, a pesar de estas áreas ocupan sólo un modesto espacio anatómico, epitelio de la mucosa, glándulas, tejidos blandos, hueso, cartílago o neural/neuroectodermal y hematolymphoid células pueden ser a menudo el sitio del origen del complejo e histológicamente diferentes grupos de tumores. Diferentes tipos de tumores que involucran el tracto sinonasal presentan una variedad de características que superan lo que se ve generalmente en la zona aerodigestive superior o incluso a través de la mayoría de las partes del cuerpo12. Malignidades de sinonasal son raras y presentan una incidencia anual de 1: 100.000 habitantes en todo el mundo, y así que esto evita que los estudios sobre las vías implicadas en la tumorigénesis y la prueba de estrategias de tratamiento alternativas. A pesar de ello, los avances en proyección de imagen técnicas, abordajes quirúrgicos y radioterapia han mejorado el manejo clínico de cáncer sinonasal. Por otra parte, el desarrollo de líneas celulares, así como modelos animales y perfiles genéticos de cáncer actualmente constituyen la base para las futuras terapias contra el cáncer dirigidas a13. Hasta la fecha, no hay ningún informe sobre expresión OTX1 y OTX2 , en neoplasias de la cavidad nasal, senos paranasales y nasofaringe. Ya anteriormente hemos observado que OTX1 y OTX2 están implicados en el cáncer de mama7, nos preguntamos si estos genes podrían estar presentes no sólo en la mucosa nasal normal sino en tumores de la cavidad nasal. Para lograr este objetivo que hemos obtenidos del Departamento de patología de la «Ospedale di Circolo"en muestras de Varese de mucosa normal y adenocarcinomas nasales y sinonasal 1985 para 2012 y se clasifican según la Organización Mundial de la salud (OMS) clasificación de tumores de cabeza y cuello. Elegimos analizar a través de análisis en tiempo real de PCR e inmunohistoquímica y evaluamos la expresión OTX1 y OTX2 para determinar si pueden considerarse marcadores moleculares para estos tipos de tumores.

<table><tbody><tr><td>RecoverAll Aislamiento total de ácidos nucleicos</td><td>Biosistema aplicado</td><td>AM1975</td><td></td></tr><tr><td>Kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad</td><td>Applied Biosystem</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Mezcla maestra de PCR universal, sin AmpErase UNG</td><td>Biosistema aplicado</td><td>4326614</td><td></td></tr><tr><td>ABI Prisma 7000&nbsp;</td><td>Applied Biosystem</td><td>270001857</td><td></td></tr><tr><td>sonda ACTB</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor</td></tr><tr><td>Sonda OTX1</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor</td></tr><tr><td>Sonda OTX2</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>Fuera de producción. Secuencia protegida por derechos de autor</td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno acuoso</td><td>Merk</td><td>1072090250</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de citrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20276292</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>101473728</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Merk</td><td>108382</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merk</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Cabra Anticuerpo Anti-OTX2</td><td>Laboratorios</td><td></td><td>Fuera de producción. Número de catálogo no disponible</td></tr><tr><td>Conejo Anticuerpo Cabra</td><td>Vector Laboratorios</td><td>BA5000</td><td></td></tr><tr><td>ABC-Peroxidasa Complejo</td><td>Vector Laboratorios</td><td>PK6100</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-diaminobenzidina tetrahidrocloruro (DAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5905</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoxilina</td><td>Bioptica</td><td>0506004/L</td><td></td></tr><tr><td>Pertek</td><td>Kaltek SRL</td><td>1560</td><td></td></tr><tr><td>BioClear</td><td>Bioptica</td><td>W01030799</td><td></td></tr></tbody></table>

identificación de otx1 y otx2 como dos posibles marcadores moleculares para los carcinomas sinonasal y neuroblastomas olfatorios

Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas

Los genes homeobox (HB) OTX se expresan durante la morfogénesis embrionaria y durante el desarrollo del epitelio olfativo en organismos adultos. Las mutaciones en estos genes suelen relacionarse con la tumorigénesis en humanos. No hay datos están disponibles en la actualidad respecto a la posible correlación entre los genes OTX y tumores de la cavidad nasal. El objetivo de este trabajo es entender si OTX1 y OTX2 pueden considerarse como marcadores moleculares en el desarrollo de tumores nasales. Se seleccionaron los adenocarcinomas nasales y sinonasal para investigar la expresión de los genes OTX1 y OTX2 mediante inmunohistoquímica y análisis PCR en tiempo real. OTX1 y OTX2 estuvieron ausentes en todas las muestras de sinonasal Adenocarcinomas de tipo Intestinal (ITACs). OTX1 mRNA fue identificado solamente en los Adenocarcinomas de tipo Intestinal no (NITACs) mientras que el mRNA de OTX2 fue expresado solamente en Neuroblastomas olfatorios (ONs). Hemos demostrado que la expresión génica diferencial de los genes OTX1 y OTX2 podría ser un marcador molecular útil para distinguir los diferentes tipos de tumores sinonasal.

En la mucosa normal se observó reactividad nuclear fuerte y homogénea para los genes OTX en el epitelio seudoestratificado ciliado de tipo respiratorio y en las células glandulares submucosas (figura 1A). Encontramos expresión nuclear para OTX1 en todas NITACs las muestras (figura 1B), mientras que poco o ausente immunoreactivity fue destacada en ITACs (figura 1). Immunoreactivity intenso estuvo pres...

Homeobox genes son genes reguladores, a menudo asociados con tumores en los organismos adultos. Investigamos su expresión comparativa por inmunohistoquímica y análisis PCR en tiempo real, en normal e inflamatoria de la mucosa nasal y en neoplasmas de sinonasal para utilizarlas como posibles dianas diagnósticas y terapéuticas.

Identificación de OTX1 y OTX2 como dos posibles marcadores moleculares para los Carcinomas Sinonasal y Neuroblastomas olfatorios

OTX homeobox (HB) genes are expressed during embryonic morphogenesis and during the development of olfactory epithelium in adult organisms. Mutations ...

El objetivo general de este experimento es identificar marcadores moleculares útiles para los carcinomas sinonasales y los neuroblastomas olfativos de una manera simple y eficiente. Este método puede ayudar a responder a preguntas clave en el campo del neuroblastoma olfativo y el carcinoma sinonasal, como la identificación de marcadores moleculares para discriminar el subtipo tumoral. La principal ventaja de esta técnica es que podemos obtener resultado en menos de seis horas, o dentro de un día para el informe del hospital.Demostrando el procedimiento de extracción de ARN y PCR en tiempo real será la Dra. Giorgia Millefanti, estudiante de doctorado de mi laboratorio. Y demostrando el procedimiento de inmunohistoquímica será Giovanni Micheloni, también estudiante de doctorado de mi laboratorio. Para comenzar el procedimiento, recopile y divida todas las muestras de FFPE humanas en diferentes subgrupos, de acuerdo con la clasificación de la OMS de tumores de cabeza y cuello.Calienta los toboganes de muestras en un horno a 60 grados Centígrados durante 30 minutos. A continuación, rehidrate las secciones de FFPE de tres micrómetros de espesor lavándolas brevemente en xileno durante 10

identification-otx1-otx2-as-two-possible-molecular-markers-for

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Se describe aquí un método para la biopsia de mucosa olfatoria de ratas y humanos cavidades nasales. Estas biopsias se pueden utilizar tanto para la identificación de anomalías moleculares en las enfermedades cerebrales o el aislamiento de células madre adultas multipotentes que pueden ser utilizados para el trasplante de células en modelos animales de trauma cerebral /...

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Este protocolo describe los procedimientos de optimización en un modelo de xenoinjerto tumoral doble etiquetado con fluorescencia doble basado en virus utilizando peces cebra larvales como huéspedes. Este modelo heterogéneo de xenoinjerto imita la composición tisular del microambiente del cáncer de páncreas in vivo y sirve como una herramienta más precisa para evaluar las respuestas de los medicamentos en modelos personalizados de xenoinjerto derivado del paciente de pez cebra.

Modelo de xenoinjerto heterogéneo derivado del paciente del cáncer de páncreas utilizando larvas de pez cebra como anfitriones para la evaluación comparativa de fármacos

Aquí, presentamos un flujo de trabajo integrado para identificar rasgos fenotíricos y moleculares que caracterizan las células tumorales circulantes (CTCs). Combinamos la inmunostalización en vivo y la micromanipulación robótica de los CTCs individuales y agrupados con técnicas basadas en una célula para el análisis y la evaluación de la capacidad de la metastasis-siembra.

Micromanipulación de células tumorales circulantes para análisis molecular descendente y evaluación potencial metastásica

Descubre cómo identificar marcadores moleculares OTX1 y OTX2 para carcinomas sinonasales y neuroblastomas olfatorios mediante inmunohistoquímica y PCR en tiempo real. Este método permite obtener resultados diagnósticos en menos de seis horas.

Identificación de OTX1 y OTX2 como dos posibles marcadores moleculares para los Carcinomas Sinonasal y Neuroblastomas olfatorios (Video) | JoVE Journal

Identificación de OTX1 y OTX2 como dos posibles marcadores moleculares para los Carcinomas Sinonasal y Neuroblastomas olfatorios

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