Rutina de detección del método de micropartículas en las transfusiones de plaquetas

El objetivo general de este método es caracterizar las transfusiones de plaquetas mediante pruebas rutinarias que se pueden realizar en centros de donantes o bancos de sangre hospitalarios para optimizar el uso de estos productos sanguíneos en pacientes con hemorragias o cáncer de sangre. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la medicina transfusional, como por ejemplo, si una transfusión de plaquetas contiene plaquetas activadas o no activadas. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona una detección rápida y precisa del contenido de micropartículas como un indicador probado de la activación de las plaquetas.

Las personas nuevas en este método necesitarán aprender a tomar muestras de los segmentos de tubos de las bolsas, porque esto no se hace de manera rutinaria en este momento. La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando vimos que las plaquetas de diferentes donantes tenían una gran variabilidad en el estado de activación y esto parecía tener un impacto en el paciente. Existen tres métodos para obtener una muestra a partir de un concentrado de plaquetas.

Para tomar muestras de una bolsa, mezcle bien el contenido de la bolsa de plaquetas con un suave movimiento horizontal durante cinco segundos, inclinando de un extremo a otro, cinco veces. Abra la pinza a la bolsa, la bolsa se evacua y se llenará por sí sola. No es necesario llenar la bolsa por completo, ya que solo se requerirá una muestra de 100 microlitros para la prueba de dispersión dinámica de luz o DLS.

Desconecte la bolsa de la bolsa sellando con calor el tubo de conexión con un sellador de tubos. Al tomar muestras de tubos vacíos, verifique que el tubo de la bolsa de plaquetas se haya almacenado vacío y que el bloque de tubos aún esté en su lugar. Inspeccione visualmente el tubo para verificar que no haya concentrado de plaquetas en el tubo.

Cierre el pelador de tubos en el tubo, lo más cerca posible del bloque de tubos, comprimiendo las manijas para apretar el tubo entre los rodillos mientras mantiene el pelador cerrado, suelte el bloque de tubos. Tire lentamente del pelador hacia abajo por el tubo vacío, permitiendo que el tubo se llene lentamente detrás del separador. Continúe hasta que la sección debajo del pelador se haya inflado por completo o hasta que el pelador esté a menos de una pulgada del extremo del tubo.

Es fundamental comprimir firmemente los mangos del pelatubos y tirar lentamente del pelador por el tubo. Una vez que se alcance el punto de parada con el pelador, use el sellador de tubos para sellar con calor el tubo una pulgada por encima del pelador. Ahora, suelte las manijas del pelador de tubos manual.

Vuelva a sellar con calor, una o dos pulgadas por encima del sello anterior para crear el segmento de prueba. Luego, corte el segmento de prueba de la unidad de plaquetas. Este segmento se utilizará para las pruebas de DLS.

Cuando tome muestras de tubos que no estén vacíos, cuelgue la bolsa verticalmente y suelte el bloque de tubos, si está en su lugar. Inspeccione visualmente la tubería para determinar si hay grumos sólidos significativos. Si existen grumos sólidos, selle sobre ellos, de modo que no se puedan desmontar en la bolsa.

A continuación, cierre el pelatubos en el tubo, lo más cerca posible del extremo sellado del tubo. Pele el contenido del tubo en la bolsa comprimiendo las manijas para apretar el tubo entre los rodillos. Mientras mantiene la fuerza de sujeción, mueva el pelatubos a lo largo del tubo hacia la bolsa.

Retire la bolsa de plaquetas del gancho para colgar y mezcle suavemente la bolsa durante cinco segundos, inclinándola de un extremo a otro cinco veces, mientras mantiene el decapante cerrado. Cuelga la bolsa verticalmente, mientras mantienes el decapante cerrado. Tire lentamente del pelador hacia abajo por el tubo vacío, permitiendo que el tubo se llene lentamente detrás del separador.

Continúe hasta que la sección debajo del pelador se haya inflado por completo, o hasta que el pelador esté a menos de una pulgada del extremo del tubo. Una vez que se alcance el punto de parada con el pelador, use el sellador de tubos para sellar con calor el tubo, una pulgada por encima del pelador. Después de soltar el decapante, vuelva a sellar con calor una o dos pulgadas por encima del sello anterior para crear el segmento de prueba.

Corte y deseche la última parte del tubo. Luego, corte el segmento de prueba de la unidad de plaquetas. Este segmento se utilizará para las pruebas de DLS.

Con un protector contra salpicaduras y unas tijeras limpias y secas, corte un extremo del tubo de la bolsa o del segmento de prueba. Llene inmediatamente el capilar utilizando la herramienta de muestreo para extraer la muestra directamente de la bolsa abierta o del segmento de tubo en el capilar. Selle la parte inferior del capilar lleno empujándolo suavemente hacia el sellador del tubo capilar, mientras aplica un giro suave y algo de presión contra la bandeja.

A continuación, desconecte la pipeta de volumen fijo de 100 microlitros y la punta del capilar, asegurándose de que el capilar permanezca firmemente incrustado en el sellador del tubo capilar. Retire el capilar de la bandeja de sellador de tubos capilares y límpielo con una almohadilla de alcohol isopropílico. Asegúrese de que no queden burbujas de aire atrapadas moviendo suavemente la parte inferior del capilar.

Finalmente, coloque el capilar en el sistema DLS. Para comenzar, inicie la consola, siga las instrucciones en la pantalla táctil para iniciar sesión y seleccione la opción de prueba de micropartículas o MP para iniciar una nueva prueba DLS para medir el contenido de micropartículas de una muestra de plaquetas. Introduzca la información de la muestra mediante un escáner de código de barras o introdúzcala manualmente.

Coloque el capilar en el sistema DLS cuando se le indique e inicie la prueba. Una vez finalizada la prueba, retire la muestra del soporte capilar y deseche adecuadamente los consumibles de acuerdo con las pautas de la instalación. Etiquete la bolsa de plaquetas con el color correspondiente al resultado.

Por ejemplo, naranja para no activado y rosa para activado. La dispersión dinámica de la luz mide la velocidad de las partículas que se mueven en suspensión por el movimiento browniano. Según las diferentes velocidades, las partículas pequeñas se mueven rápido y las partículas grandes se mueven lentamente.

Esta tecnología determina la distribución del tamaño de una muestra. Los DLS determinan que esta transfusión contiene plaquetas no activadas en base a un contenido de menos del 15% de micropartículas. En efecto. La mayoría de las plaquetas discoidales con muy pocas micropartículas fueron visibles por microscopía.

Sin embargo, una transfusión de plaquetas diferente, que a simple vista se ve exactamente igual que la primera bolsa, contenía plaquetas activadas, basadas en más del 15% de contenido de micropartículas. En esta muestra, varias morfologías de plaquetas, pequeños agregados y muchas micropartículas fueron visibles por microscopía. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo tomar una muestra de una bolsa de plaquetas de manera no invasiva, llenar el capilar y analizar la muestra para determinar el contenido de micropartículas, para permitir el uso optimizado de un inventario de plaquetas.

Al intentar este procedimiento, es importante mezclar bien la bolsa para obtener una muestra buena y representativa. Y siguiendo este procedimiento, se pueden hacer otros métodos, como la citometría de flujo, para responder a preguntas sobre el origen celular de las micropartículas. Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en unos dos minutos y medio.

Junto con la prueba de cinco minutos, las transfusiones de plaquetas se pueden caracterizar en menos de ocho minutos. Después de su desarrollo, esta técnica permitió a los bancos de sangre de los hospitales evaluar su inventario de plaquetas, tratar a los pacientes de hematología/oncología solo con plaquetas no activadas y observar una reducción en las transfusiones de plaquetas utilizadas. Como decimos, la transfusión más segura es la que no se da.

Aunque este método proporciona información sobre la caracterización de las plaquetas antes de la transfusión, también se puede utilizar para analizar el plasma rico en plaquetas directamente de los donantes. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento de los pacientes con cáncer de la sangre, ya que se benefician de las transfusiones de plaquetas no activadas, que reducen el riesgo de volverse refractarios.