Ligadura del conducto biliar parcial en el ratón: un modelo controlado de la colestasis obstructiva localizada
March 28th, 2018
Presentamos la ligadura del conducto biliar parcial como modelo quirúrgico de lesión hepática y regeneración en roedores.
El objetivo general de esta intervención quirúrgica es observar los efectos de la colestasis obstructiva localizada. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la hepatología sobre cómo identificar los mecanismos de regeneración hepática. La principal ventaja de esta técnica es que se pueden hacer comparaciones significativas entre el lóbulo experimental ligado y el lóbulo control no ligado dentro del mismo animal.
El Dr. Toshimasa Nakao, postdoctorado del laboratorio de cirugía de trasplantes, demostrará el procedimiento hoy. Después de confirmar una falta de respuesta al pinzamiento del dedo del pie en un ratón C57 negro 6 anestesiado de ocho a 12 semanas de edad, afeite la región abdominal con cortapelos y coloque al animal bajo un microscopio quirúrgico. Asegure las extremidades a la mesa y use hisopos estériles para desinfectar secuencialmente el área quirúrgica con 0,3 a 0,5 mililitros de povidona yodada y etanol al 70%.
A continuación, haz una incisión en la línea media desde el xifoides hasta el pubis y utiliza un microrretractor para abrir la cavidad abdominal. Use pinzas para mosquitos para retraer el xifoides hacia la cabeza del ratón y use arcilla blanda para sostener las pinzas y el xifoides en esta posición. Hidrate la cavidad abdominal con uno o dos mililitros de PBS esterilizado a 37 grados centígrados y use hisopos de algodón húmedos para mover suavemente el intestino delgado hacia la cabeza del ratón.
Corte los ligamentos entre el intestino delgado y el retroperitoneo para evitar dañar el tejido y envuelva los intestinos delgado y grueso con una esponja de gasa no tejida húmeda. Coloque el tejido intestinal en el lado caudal de la cavidad abdominal y use una pequeña esponja de gasa húmeda no tejida para retraer suavemente todo el hígado hacia el xifoides para exponer el hilio hepático y el ligamento hepatoduodenal. Localice el hilio hepático, el conducto biliar común en el lado ventral de la vena porta y los conductos biliares hepáticos izquierdo y derecho que drenan en la confluencia biliar principal en el hilio hepático.
Con una sutura de nailon 10-0 y el lado romo de una aguja de sutura, ligar el lóbulo del conducto biliar hepático izquierdo. Una vez colocada la sutura, devolver el intestino delgado y el intestino grueso a su ubicación anatómica y confirmar la ausencia de torsión intestinal o sangrado intraabdominal. A continuación, retire las pinzas antimosquitos, cierre por separado las capas musculares y cutáneas con suturas continuas de Vicryl 4-0 y coloque el ratón bajo una lámpara de calor con supervisión hasta la recuperación completa.
La comparación de las bioquímicas hepáticas séricas entre ratones ligados parcialmente a las vías biliares y ratones transgénicos ligados a las vías biliares completas para la agregación de proteínas hepáticas insolubles revela una lesión hepática mínima o colestasis en los ratones ligados a las vías biliares parciales y una lesión grave y acumulación de enzimas en los animales transgénicos ligados a las vías biliares completas. A medida que los ratones sometidos a una ligadura parcial del conducto biliar desarrollaron colestasis obstructiva específica del lóbulo con el tiempo, el lóbulo ligado parece un color ligeramente más pálido 14 días después de la cirugía en comparación con los lóbulos no ligados que mantuvieron su color marrón rojizo oscuro normal. El lóbulo ligado también muestra un aumento en la proliferación del conducto biliar y la fibrosis en comparación con los lóbulos no ligados en respuesta a la colestasis localizada inducida por la ligadura.
Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 10 a 12 minutos si se realiza correctamente. Después de este procedimiento, se pueden usar otros métodos, como el rastreo de linaje, para responder preguntas adicionales sobre la localización de células madre en sitios de lesión y regeneración hepática. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo hacer comparaciones significativas con la ligadura parcial de las vías biliares para identificar los efectos locales frente a los sistémicos.
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Descripción general
Este artículo presenta la ligadura parcial del conducto biliar como un modelo quirúrgico para estudiar la lesión y la regeneración hepática en roedores. El método permite la observación de la colestasis obstructiva localizada y sus efectos en los mecanismos hepáticos.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Hepatología
- Regeneración hepática
- Modelos quirúrgicos
Antecedentes
- Comprender la lesión y la regeneración hepática es crucial en la hepatología.
- La colestasis obstructiva localizada puede proporcionar información sobre los mecanismos hepáticos.
- Los estudios comparativos dentro del mismo animal mejoran la fiabilidad de los resultados.
- Este modelo es particularmente útil para estudiar la dinámica de la recuperación hepática.
Propósito del estudio
- Observar los efectos de la ligadura parcial del conducto biliar en la lesión hepática.
- Identificar los mecanismos involucrados en la regeneración hepática.
- Establecer un modelo quirúrgico fiable para futuros estudios hepatológicos.
Métodos utilizados
- Uso de ratones C57 negros 6 anestesiados para el procedimiento.
- Afeitar y desinfectar la región abdominal antes de la cirugía.
- Sujetar las extremidades a la mesa quirúrgica para mayor estabilidad.
- Realizar la cirugía bajo un microscopio quirúrgico para mayor precisión.
Resultados principales
- Demostró la viabilidad del modelo quirúrgico.
- Estableció un método para comparar lóbulos hepáticos ligados y no ligados.
- Proporcionó información sobre los procesos de regeneración del hígado.
- Facilitó una mayor investigación sobre los mecanismos de lesión hepática.
Conclusiones
- La ligadura parcial del conducto biliar es un modelo valioso para estudiar la lesión hepática.
- La técnica permite realizar comparaciones controladas dentro del mismo organismo.
- Los estudios futuros pueden basarse en este modelo para explorar aún más la regeneración hepática.
