Name: Murine beber modelos en el desarrollo de farmacoterapias para el alcoholismo: en la opción oscurezca y dos botellas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Aprenda a evaluar fármacos anti-alcohol en modelos de roedores con trastorno por uso de alcohol. Este protocolo permite analizar la seguridad, eficacia y neurobiología subyacente del tratamiento.

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Este trabajo fue financiado, en parte, por la investigación concede SC CTSI NIH/NCRR/NCATS--UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) y la Facultad de farmacia de la USC.

Todos los procedimientos aquí descritos han sido aprobados por el cuidado de Animal institucionales y comités de uso de lo Campus de Ciencias de la salud de University of Southern California.
1. montaje y configuración experimental
<ol><li>Adquirir la totalidad de los siguientes suministros y productos químicos antes de iniciar el estudio: ratones, metal y jaulas jaula tops, ropa de cama, alimentos, agua, etanol, pipetas, tapas de sorber, shrink wrap, cuchillo, ataduras de cremallera, cinta, mechero Bunsen, escala, faro.</li>
	<li>Obtener ratones C57BL/6J, ya sea de una fuente comercial o una colonia interna, teniendo en cuenta que los ratones pueden ser grupo ubicado hasta el momento de la prueba. Nota: El número total de ratones adquiridos depende de la complejidad del diseño experimental. Plan para acomodar aproximadamente 12-15 ratones por grupo, con no menores que 5-7 ratones por grupo de estudios piloto. En los resultados representativos que se muestra a continuación se utilizó una configuración simple de dos grupos para evaluar la relación causa-efecto con una sola dosis (5 mg/kg) de la droga (MOX).</li>
	<li>Siga los siguientes pasos para montar las botellas18.<ol>
<li>Calentar un cuchillo con un mechero de Bunsen.</li>
		<li>Con este cuchillo, corte aproximadamente una pulgada de los extremos superior e inferior de una pipeta serológica de plástico 18 mL.<ol>
<li>Tenga en cuenta que pueden utilizarse también pipetas de volumen más pequeño (es decir, 10 mL) para aumentar la precisión de la medición.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Caliente la pipeta en una pistola de calor.</li>
		<li>Inserte el tubo de sorber de cojinete de bolas en el extremo "inferior" de la pipeta (en otras palabras, la apertura más cercana a la línea de tablero de 18 mL).</li>
		<li>Sellar el tubo sorber con envoltorio usando una pistola de plástico encogimiento disponibles comercialmente.</li>
		<li>Tapa de la abertura con un tapón de silicona.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. animal habituación
<ol><li>A partir de al menos 1 semana antes de la fecha de comienzo del experimento, los ratones la transferencia a la sala donde los procedimientos experimentales deben llevarse a cabo para que pueda aclimatarse a las condiciones de cría (incluyendo la temperatura ambiente (21 ± 1 ° C) y 12 h claro/oscuro ciclo inverso, con luces apagado en 12:00). Asegúrese de seguir las directrices y notificar a los canales adecuados antes de trasladar animales de un lugar a otro.<ol>
<li>Si los ratones se transfieren de un ciclo de luz/oscuridad estándar permiten 2 semanas de tiempo adicional de la habituación.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Llenar las botellas recién hechas hasta el borde con agua. Asegúrese de que la tapa está cerrada firmemente y sin burbujas de aire ni fugas por el pico. En caso de fugas de solución, vuelva a fijar la tapa. Eliminar las posibles burbujas de aire golpeando simplemente en la botella para que el aire puede escapar del tubo.</li>
	<li>A su llegada, solo casa cada ratón en jaulas estándar de policarbonato/polisulfona con ropa de cama y una tapa de la jaula de rejilla metálica; Retire la tapa de la jaula que ya no se usa.<ol>
<li>Facilitar el acceso a alimentos y water bottle(s) ad libitum.</li>
		<li>Asegure cada botella en la parte superior de la jaula envolviendo un lazo plástico del cierre relámpago alrededor de cada botella para mantener en su lugar. Recorte cualquier exceso de plástico de la brida para que no sobresalga en la jaula. Nota: Para beber en lo oscuro (DID), se requiere solamente una sola botella de agua. Habituación al paradigma de la elección (por confirmar) de dos botellas, sin embargo, requiere que el montaje de la jaula incluyen dos botellas de agua. Si la tolva rompesacos suministrada está diseñada para soportar solamente una botella de solución, doble suavemente aparte sus bares para crear espacio para una placa adicional dar cabida a la segunda botella para TBC.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Establecer al menos 3 jaulas de libre control de ratón. Esto permitirá el seguimiento de cualquier pérdida de líquidos causada por evaporación o derrame de las botellas, que es simplemente un fenómeno natural que ocurre como jaulas se colocan en y fuera de la rejilla de la jaula (ver paso 2.6.3 3.6.1 y 4.6.1 para las ecuaciones).</li>
	<li>A partir del día 4 de la aclimatación de la vivienda solo 1 semana, mida y registre el peso cuerpo y alimento diario de cada ratón, utilizando una escala (en gramos) así como el consumo de agua, con los grabados junto a la botella invertida para grabar el punto más alto de la menisco (en mL).<ol>
<li>Si bien es una práctica científica estándar para leer el punto más bajo del menisco cóncavo, porque las botellas permanecen en posición invertida durante la medición, registre el punto más alto del menisco.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Evaluar los parámetros de 2.5 usando las ecuaciones siguientes:<ol>
<li>Medir el cambio de peso corporal (g): peso del día actual (g) - peso del día anterior (g).</li>
		<li>Medir la ingesta de alimento (g): peso de los alimentos el día anterior (g) - peso de los alimentos en el día actual (g).</li>
		<li>Medir la ingesta de agua (mL): pérdida de agua media [volumen de agua en el día actual (mL) - volumen de agua el día anterior (mL)] - de todo control jaulas (mL).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Repita el paso 2.5 consecutivamente, en los días 5-7, para permitir la determinación de una línea base para los tres días inmediatamente antes de la introducción de etanol. Si no se recogerá un registro consecutivo, extender el período de aclimatación para permitir la evaluación de mediciones iniciales.</li>
	<li>Una vez que la ingesta de agua se ha estabilizado a la variabilidad de ± 10% del promedio de los últimos 3 días, comienza acceso etanol con TBC (acceso ilimitado) o DID (cupo limitado). Nota: En raras ocasiones, uno o dos días adicionales pueden ser necesarias para que materias alcanzar esta estabilidad; no se alarme si se requiere tiempo adicional para que los valores a mostrar variabilidad de ±10% de la media de los últimos 3 días.</li>
</ol>3. 24 horas dos botella de elección (por confirmar)
Nota: Se prepara un diagrama esquemático en la figura 1.
<ol><li>Preparar una solución de etanol 10% (v/v) en un volumen de 500 mL agregando 52,65 mL de etanol de grano prueba 190 (~ 95% etanol) a 447,35 mL de H2O; Cerciórese de agite bien. Dado que el etanol se evapora rápidamente, reemplazar la solución en el intervalo de cada 3-4 días. Nota: Otras concentraciones de etanol pueden ser utilizadas también, pero los autores recomiendan una concentración de 10% para este modelo.</li>
	<li>En el primer día de la TBC, (día 8 en el más temprano) Vacíe 1 de las 2 botellas de agua, en cada jaula y llenar hasta el borde con la solución recién preparada de etanol. Dado que el etanol y el agua son difíciles de diferenciarse visualmente, claramente etiquetar las botellas con su contenido correspondiente. Basta con aplicar un trozo de masking tape a la botella y etiqueta con un marcador o escribiendo directamente en la botella.</li>
	<li>Añada más solución a la botella de agua, según sea necesario.</li>
	<li>Coloque botellas de nuevo en la jaula, asegurándose de que todos los tapones están cerrados firmemente y sin burbujas de aire ni fugas por el pico. Si la solución es fugas, vuelva a fijar la tapa. Eliminar las posibles burbujas de aire golpeando simplemente en la botella para que el aire puede escapar de la botella.</li>
	<li>Alterna la posición de las botellas diariamente como a correcta de preferencia de lugar condicionada relacionadas con influencias en las actividad de beber (ver discusión más).</li>
	<li>Además de las mediciones diarias de 2.5 y 2.6, que han sido constante, comienzan a leer y registrar los niveles de ingestión de etanol también. Analizar la relación de consumo y preferencia de 10% de etanol utilizando las siguientes ecuaciones:<ol>
<li>Medir 10% etanol toma (mL): [volumen de etanol en la actualidad (mL) - volumen de etanol en el día anterior (mL))]-promedio de pérdida de etanol de todo control jaulas (mL).</li>
		<li>Medir el 10% etanol ingesta (g/kg): [10% de etanol producto (mL) x 0,07893 g/mL] / peso (kg) corporal.</li>
		<li>Medir el % de preferencia: [consumo de etanol 10% (mL) agua (mL)] x 100.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tan pronto como producto de etanol se ha convertido en un estable, administrar una inyección (solución salina) intraperitoneal (i.p.) de control único (0.01 mL/g de peso corporal) para cada ratón durante la rutina diaria de la medición. De esta manera, sujetos se acostumbran a la inyección de sí mismo.<ol>
<li>Estabilidad se define como variabilidad de ± 10% del promedio de los últimos 3 días (igual que en la sección 2.8). Nota: Puede tardar hasta 1 semana para estabilizar los niveles de etanol. Esto es especialmente cierto si los ratones se utilizan nuevamente en un experimento anterior y han tenido exposición previa al etanol. El control es simplemente el solvente usado para disolver la droga.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Una vez que una base de etanol con baja variabilidad es, dividir los ratones en dosis grupos utilizando los valores de ingesta de etanol para que todos los grupos tienen más o menos similar promedio valores de ingesta de etanol.<ol>
<li>Designar un grupo como el control (continuar recibir solución salina) y el otro como la experimental (inyección i.p. de la droga investigada en 0,01 mL/g de peso corporal). Iniciar drogas diario de dosificación, ya sea para una duración aguda o de varios día. Posteriormente, el control puede ser reintroducido para probar los efectos de la drogas (opcionales). Nota: Porque beber es monitoreado a través de un largo período de 24 horas, el tiempo de administración de la dosis no es dependiente en el ciclo oscuro.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. bebiendo en la obscuridad (hizo)
Nota: Se prepara un diagrama esquemático en la figura 3.
<ol><li>En cada día de acceso al etanol programadas (días 1-4) registrar las mediciones de volumen de agua, consumo de alimentos y peso corporal y realizar la dosificación de la droga. Hacer esto durante un tiempo preseleccionado durante el ciclo de luz que se elige según la farmacocinética de la droga para que el compuesto es en / o acercarse a la concentración máxima del cerebro durante el período de consumo. Nota: Recuerde días 1-3 se pretenden aclimatar simplemente los ratones para beber abundantes niveles de etanol en un periodo corto de tiempo. Mientras que los ratones no alcanzan niveles BEC comparables a la humana 0,08; estos días de "entrenamiento" aseguran de que el día 4, durante la sesión beber un poco más largo, que de hecho se beben a ese nivel.<ol>
<li>Dar a todos los ratones control (solución salina) en días 1-3 y el control o drogas el día 4. Este procedimiento DID produce a lo largo de 3 semanas con un medicamento previo (semana 1), drogas (semana 2) y sesión beber post-medicamentos (semana 4).</li>
		<li>Nota: Tenga en cuenta que durante la semana de dosis de drogas, niveles de ingestión de etanol día 3 se utilizan para asignar ratones a ninguno del grupo control o drogas de manera que los niveles de ingesta de etanol de ambos grupos tienen la menor variabilidad. Esto es a diferencia de la TBC, que asigna a grupos basados en un promedio de 3 días.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparar una solución 20% (v/v) de etanol (20E) en un volumen de 500 mL agregando 105,25 mL de etanol de grano prueba 190 (~ 95% etanol) a 394,75 mL de H2O; Cerciórese de agite bien.</li>
	<li>Llenar las botellas de etanol antes del inicio de la sesión beber para que tan pronto como comience el DID las botellas de agua se puede substituir simplemente con las botellas de alcohol.</li>
	<li>Durante la sesión entera de DID (pasos 4.5-4.8), utilizar un proyector de luz roja para no molestar a los animales.</li>
	<li>Al comienzo de la DID beber sesión, programada para comenzar 3 horas en el ciclo oscuro, registrar el volumen de agua para cada ratón. Luego, reemplace cada botella de agua con una botella de la solución de 20E y registrar el volumen de etanol a partir.</li>
	<li>Leer y registrar el volumen de etanol final 2 horas más tarde, al final de la sesión beber en los días 1-3 y 4 horas más tarde en el día 4. Analizar la ingesta de etanol 20% utilizando las siguientes ecuaciones.<ol>
<li>Medir el 20% el consumo de etanol (mL): [volumen de etanol en el final del período de sesiones (mL) - volumen de etanol en el inicio del período de sesiones (mL)] - etanol promedio pérdida de todo control jaulas (mL).</li>
		<li>Medir el 20% etanol ingesta (g/kg): [20% consumo de etanol (mL) x 0,15786 g/mL] / peso (kg) corporal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>El día 4, inmediatamente después de registrar volúmenes de etanol y antes de volver a introducir el acceso al agua, recolección de sangre para evaluar la concentración de etanol de la sangre de cada ratón (opcional). Nota: Cualquier método de recolección de sangre no terminal puede utilizarse, como colección de la sangre sino de retro-orbital o colección de sangre de la vena safena. Para protocolos útiles ver referencias de Parasuraman et al. 21 y Yardley et al. 20.<ol>
<li>Realizar análisis usando varios métodos incluyendo LCMS o maquinaria disponible en el mercado (véase Tabla de materiales).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Reemplace todas las botellas de etanol con botellas de agua y volumen de agua registro.</li>
</ol>

<ol><li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery%2C+Development%2C+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder%3A+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%3A+Clinical+and+Experimental+Research%22%5BJournal%5D)">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li>
<li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence%3A+United+States%2C+1991-1992+and+2001-2002%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+and+Alcohol+Dependence%22%5BJournal%5D)">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li>
<li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Preventive+Medicine%22%5BJournal%5D)">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li>
<li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medications+development+to+treat+alcohol+dependence%3A+a+vision+for+the+next+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li>
<li>Alcoholism: Developing Drugs for Treatment Guidance for Industry Food and Drug Administration. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm433618.pdf">http://www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm433618.pdf</a> (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20516163">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li>
<li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder%3A+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Substance+Abuse%22%5BJournal%5D)">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li>
<li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25833016">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li>
<li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1530-0277.2001.tb02217.x/abstract">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li>
<li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder%3A+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li>
<li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction%3A+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+behavioral+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li>
<li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li>
<li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology & Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li>
<li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Drinking+in+the+dark%22+%28DID%29+procedures%3A+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li>
<li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li>
<li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking%3A+Evidence+from+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology & Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li>
<li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li>
<li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, Pt A 60-70 (2017).</li>
<li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li>
<li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies%3A+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li>
<li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21350616">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
</ol>

DLD y LA son inventores de una patente para la reasignación de la ivermectina y las avermectinas relacionadas para el tratamiento de trastornos de consumo de alcohol. Los autores no tienen otros conflictos de interés y son totalmente responsables por el contenido científico del documento.

Estimaciones a nivel Mundial indican que unos 76 millones de personas cumplen con los criterios para justificar un diagnóstico de trastorno de uso de Alcohol (AUD). Por desgracia, farmacéuticos tratamientos actualmente disponibles son en gran parte ineficaces y desarrollo es necesario para compensar las necesidades de esta población clínica20. Para ello, el siguiente protocolo pretende facilitar este esfuerzo por ejemplificar dos del roedor más básico potable paradigmas: dos botella de elección (p...

Durante los últimos 25 más años, se ha puesto un esfuerzo importante en el desarrollo de medicamentos para el tratamiento de trastorno de uso de Alcohol (AUD)1. Aunque se han logrado muchos avances, AUD todavía sigue siendo un problema de salud pública importante, que afecta a más 18 millones de americanos y cuestan sobre $ 220 billones anualmente2,3. En la actualidad existen tres medicamentos aprobados por la FDA, disulfiram, naltrexona y acamprosato, todos los cuales han arrojado resultados inconsistentes en ensayos clínicos y éxito limitado incluso cuando se combina con la intervención psicosocial en los entornos clínicos 4 , 5 , 6 , 7.
La razón principal de fracasos de la terapia actual AUD está ligada a la naturaleza heterogénea de AUD8. Mientras que factores genéticos y ambientales contribuyen al desarrollo de la AUD, heredabilidad representa aproximadamente el 50-60% del riesgo de inicio9. Similar al tratamiento de la depresión, está ampliamente aceptado que pacientes que sufren de AUD tendrá una variedad de medicamentos que están diseñados para satisfacer las necesidades de cada paciente10.
Claramente, hay una urgente necesidad de tratamientos más efectivos que se facilitaría si el proceso ya difícil y desperdiciador de tiempo del descubrimiento de fármacos fueron racionalizados3. Para ello, el siguiente protocolo demuestra la aplicabilidad preclínica de dos modelos de bebidas roedores ampliamente utilizado para examinar la base neurobiológica de AUD11. Más específicamente, el método introducido en el presente documento puede evaluar la eficacia de compuestos candidatos reducir alcohol consumo "moderado" y "borracheras" escenarios utilizando la opción de dos botellas (por confirmar) y beber en los paradigmas (DID) oscuros, respectivamente. Ambos paradigmas examinan autoadministración del etanol no operante, por el que ratones ingieren de etanol por vía oral y en la voluntad y por lo tanto ilustrar cara alta y construcción la validez como un modelo de alcoholismo humano11.
En TBC beber, también conocido como libre elección beber, beber, de preferencia o beber social, dos botellas de solución están continuamente disponibles en la jaula del hogar. Una botella contiene agua, y el otro contiene una solución diluida de etanol, por el que se puede variar la concentración de etanol (por ej., 5-30% v/v)11,12. Los ratones tienen acceso constante a dos botellas y por lo tanto, pueden elegir cuánto beber de cada botella.
Este modelo evalúa el consumo de etanol de cada ratón (g/kg), así como la relación de preferencia de etanol (volumen de etanol consumida ÷ volumen total líquido consumido). Habitualmente se utiliza para comparar niveles de consumo a través de diferentes cepas de ratones, o después de una manipulación genética específica (e.g., golpe de gracia del gene o caída) y resultados en concentraciones de etanol de sangre (BECs) similares a lo que se encuentra en los seres humanos cuando beber en moderación13,14.
En el procedimiento DID, 3 h después del inicio del ciclo oscuro, la botella de casa jaula de agua se intercambia con una botella de solución de etanol 20% (v/v) para un acceso limitado a beber de la sesión. Las sesiones de bebida se producen como un ciclo de 4 días consecutivo, duración 2 h días 1-3 y 4 h en día 4. Días 1-3 sirven como un periodo de habituación de alcohol antes de la prueba el día 4. Por lo tanto, ratones confiablemente consumirá suficiente etanol para lograr BECs > 100 mg/dL y como consecuencia, los efectos conductuales de la intoxicación en humanos que consumo concentrado de alcohol13,14,15. Acceso al agua está disponible en todo momento que no sea la sesión beber.
Hay varias variaciones del acceso limitado. Por ejemplo, en el modelo de acceso intermitente, ratones reciben dos botellas (una agua que contiene y otros que contengan etanol 20% (v/v)) sólo el lunes, el miércoles y el viernes con un tiempo de espera 24 h y 48 h en días laborables y fines de semana, respectivamente16. Después de varias semanas de acceso intermitente, los ratones se poco a poco y voluntariamente aumentar tomando niveles, logrando finalmente BECS similar a lo que se observa en el modelo DID. El DID, sin embargo, parece ser el modelo más utilizado para evaluar el comportamiento de beber compulsivo-como. Existen otros modelos de consumo intermitente, pero se basan en restringir el acceso a alimentos o vapor cámara inducido aumenta en autoadministración voluntaria, que los hace menos representante del alcohol humano voluntario consumo16.

<table><tbody><tr><td>1 cilindro graduado VWR</td><td></td><td>https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td><td>Para preparar la solución de etanol.</td></tr><tr><td>Botella de vidrio de 1 L</td><td>Pyrex (Fisher Scientific)</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td><td>Para preparar la solución de etanol.</td></tr><tr><td>Cilindro graduado de 100 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td><td>Para preparar la solución de etanol.</td></tr><tr><td>Analox</td><td></td><td></td><td>Un método potencial para analizar muestras de sangre DID es mediante el uso de la máquina analox</td></tr><tr><td>con tubos sorbedores de bolas</td><td>Ancare Corp.</td><td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td><td>Longitud: 2.5 pulgadas, Diámetro: 5/16 pulgadas, Modelo: TD100</td></tr><tr><td>C57BL/6J Ratones</td><td>Jackson lab https://www.jax.org/strain/000664</td><td></td><td>también pueden provenir de la colonia de cría interna</td></tr><tr><td>pipetas serológicas desechables</td><td>VWR International (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td><td>10 mL, 18 mL o 25 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>etanol, puro, 190 grados (95%), USP, KOPTEC</td><td>Decon Labs (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td> pistola <td>---</td></tr><tr><td>calor&nbsp;</td><td>Electrodomésticos Maestros Corp.</td><td>http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td><td></td></tr> <tr><td>Tubo termorretráctil</td> <td>---</td><td>---</td><td>Diámetro: 3/8 pulgadas</td></tr><tr><td>cuchillo industrial / cuchilla</td> <td>---</td> <td>---</td> <td>---</td></tr>placa <tr><td>de jaula de metal</td><td>---</td><td>---</td><td>Debe estar disponible a través de la universidad/institucional</td></tr><tr><td>ratón de ratón de vivero agua</td><td>------</td><td></td><td>Debe estar disponible a través de la universidad/ </td></tr><tr><td>balanza electrónica portátil</td> para vivero institucional <td>Ohaus (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td><td>---</td></tr><tr><td>luz roja linterna frontal</td><td>nyteBright (Amazon)</td><td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&qid=1499591137&sr=8-1-spons&keywords=red+lamp+headlamp&psc=1</td><td>--- </td></tr><tr>tapones <td>------</td><td></td> <td>silicona</td><td></td></tr> <tr><td>Fishertermómetro</td><td>Fisher Scientific</td> barco <td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232---</td><td></td></tr> <tr><td>pesaje</td><td>VWR International (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td><td>La tapa de una caja de puntas de pipeta es una alternativa adecuada</td></tr></tbody></table>

murine beber modelos en el desarrollo de farmacoterapias para el alcoholismo: en la opción oscurezca y dos botellas

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Trastorno de uso de alcohol (AUD) es un problema importante con más de un aproximadamente 76 millones de personas en todo el mundo cumpliendo los criterios de diagnóstico. Los tratamientos actuales se limitan a tres medicamentos aprobados por la FDA que son en gran parte ineficaces, incluso cuando se combina con psicosociales de intervención, como es evidente por la alta recaída tasa. Como tal, la búsqueda de tratamientos más nuevos representa un objetivo de salud pública. Para ello, el siguiente protocolo utiliza dos modelos de consumo roedores simple para evaluar la eficacia preclínica de compuestos de plomo contra el alcohol: elección de dos botellas (por confirmar) y bebiendo en la obscuridad (DID). El primero permite ratones voluntaria beber con moderación mientras que el segundo induce ratones voluntaria consumen una gran cantidad de alcohol en un período corto que imita el consumo concentrado. La naturaleza simple y alto rendimiento de ambos de estos paradigmas permiten para la detección rápida de agentes farmacológicos o para la identificación de cepas de ratones que presentan cierto comportamiento consumo voluntario.

En las siguientes investigaciones representativas, beber social fue modelado utilizando el paradigma de la elección de dos botellas (por confirmar). Brevemente, los ratones tenían acceso a dos botellas de solución, uno de los cuales contiene agua y el otro una solución de etanol 10% (v/v). Los sujetos fueron posteriormente dividir y uniformemente asignados a grupos de tratamiento de drogas, moxidectina (MOX) vs control de solución salina, para que cada grupo hubiera un promedio de niveles...

Trastorno de uso de alcohol (AUD) es un problema de salud nacional y el desarrollo de tratamientos más eficaces es necesaria para compensar las necesidades de esta población de pacientes. Para ello, el siguiente protocolo utiliza dos modelos de consumo roedores simple para evaluar la eficacia preclínica de compuestos de plomo contra el alcohol.

Murine beber modelos en el desarrollo de farmacoterapias para el alcoholismo: en la opción oscurezca y dos botellas

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

El objetivo general de este paradigma es evaluar la eficacia de una posible droga antidroqueo utilizando modelos de roedores de trastorno por consumo de alcohol. El trastorno por consumo de alcohol representa una crisis de salud pública importante. Los tratamientos actuales son ineficaces y se necesita una investigación preclínica en curso.Nuestro protocolo nos permite evaluar la seguridad y utilidad de un tratamiento potencial, así como echar un vistazo a la neurobiología subyacente del trastorno en sí. Comience el procedimiento calentando un cuchillo de utilidad en el quemador Bunsen. Con este cuchillo, corte aproximadamente una pulgada de los extremos superior e inferior de una pipeta serológica de plástico de 18 mililitros.A continuación, caliente la pipeta bajo una pistola de calor. Inserte el tubo de cierre del rodamiento de bolas en el extremo inferior de la pipeta. Luego, usando una pistola de envoltura retráctil disponible comercialmente, selle el tubo de sipper en su lugar con envoltura retráctil.Tapa la otra abertura con un tapón de silicona. Para la habituación animal, a su llegada, una sola casa cada ratón en la jaula estándar de polisulfono de policarbonato con ropa d

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Aquí se presenta un protocolo para el modelo 2BC/CIE de dependencia del alcohol en ratones para estudiar el trastorno por consumo de alcohol.

Exposición crónica intermitente al vapor de etanol junto con la elección de dos botellas para modelar el trastorno por consumo de alcohol

Este protocolo describe un paradigma estándar de consumo de alcohol en jaula en casa de acceso intermitente y dos botellas para modelar el consumo de alcohol en ratas. Además, proporciona instrucciones paso a paso para aumentar el protocolo estándar con un sistema de detección de lamidos de bricolaje que permite el análisis microestructural del comportamiento de la bebida.

Modelado del consumo de alcohol en roedores mediante el consumo de alcohol en jaulas caseras de dos botellas y análisis microestructural

El trasplante de islotes aislados se ha propuesto ser un tratamiento potencial para la diabetes tipo 1. Aquí se describe un método para aislar los islotes de páncreas de ratón y trasplantarlas en el espacio subcapsular del riñón.

Un método para el aislamiento de los islotes murinos y Trasplante Renal subcapsular

Análisis de contenido de grasa se realiza rutinariamente en los estudios que utilizan modelos murinos de obesidad. Métodos emergentes en pequeños animales y el análisis de imágenes de TC están proporcionando los detalles longitudinal rica análisis de contenido de grasa. A continuación le detallamos paso a paso los procedimientos para la realización de pequeños animales TAC, análisis y visualización.

La segmentación y la medición de los volúmenes de grasa en modelos murinos de obesidad Usando rayos X de tomografía computarizada

Bronquiolitis obliterante es el principal obstáculo para la supervivencia a largo plazo de los receptores de trasplante de pulmón y la falta de un modelo preclínico robusta impide el examen de inmunopatogénesis bronquiolitis obliterante. A diferencia de otros trasplantes de órganos sólidos, el trasplante de pulmón de ratón vascularizado sólo recientemente ha sido desarrollado. Aquí mostramos nuestro modelo desarrollado de manera independiente después de la bronquiolitis obliterante murino...

El desarrollo de bronquiolitis obliterante en un modelo murino de trasplante de pulmón ortotópico

Audio basado en simulador para el Medio Ambiente (ABES) es un software de entorno virtual diseñado para mejorar las habilidades reales de navegación mundiales en los ciegos.

Desarrollo de un entorno de juego basado en audio virtual para ayudar con habilidades de navegación en la ciega

El objetivo es producir una fístula arteriovenosa que es simple y reproducible. Este método no utiliza suturas o adhesivos pegamento. Por lo tanto las muestras se pueden utilizar con la menor cantidad de materiales extraños para el análisis.

Aspectos técnicos de la aortocava Fístula Ratón

extracción de ADN de la saliva puede proporcionar una fuente fácilmente disponible de ADN de alto peso molecular, con poca o ninguna degradación/fragmentación.  Este protocolo proporciona parámetros optimizados para la recolección/almacenamiento de saliva y la extracción de ADN para que sean de calidad y cantidad suficientes para ensayos de ADN posteriores con requisitos de alta calidad.

Recolección y extracción de ADN de la saliva de Next Generation Sequencing

Aquí, presentamos un protocolo para estudiar la inmunología del rechazo. El modelo quirúrgico presentado reporta un tiempo quirúrgico corto y una técnica concisa. Dependiendo de la combinación de cepa donante-receptor, el riñón trasplantado puede desarrollar rechazo celular agudo o daño crónico del injerto, definido por fibrosis intersticial y atrofia tubular.

Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto

Se describe un método paso a paso de realizar el recubrimiento pulpar directo en ratones dientes para la evaluación de la cicatrización de la herida pulpar y la formación de dentina de reparación in vivo.

Desarrollo de un Modelo de recubrimiento pulpar directo para la Evaluación de la Pulpa Curación de Heridas y formación de dentina reparadora en ratones

Aprenda a evaluar fármacos anti-alcohol en modelos de roedores con trastorno por uso de alcohol. Este protocolo permite analizar la seguridad, eficacia y neurobiología subyacente del tratamiento.

Murine beber modelos en el desarrollo de farmacoterapias para el alcoholismo: en la opción oscurezca y dos botellas

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