Name: Un modelo Experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta de conejo: consideraciones metodológicas, desarrollo y evaluación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Aprende a desarrollar un modelo experimental de síndrome metabólico en conejos mediante dieta alta en grasas y sacarosa. Este método permite estudiar remodelación de órganos y progresión de la enfermedad en investigación biomédica.

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Este trabajo fue financiado por la Generalitat Valenciana (GV2015-062), Universitat de València (UV-INV-PRECOMP14-206372) a MZ, Generalitat Valenciana (PROMETEOII/2014/037) y el Instituto de Salud Carlos III-FEDER fondos (CB16/11 CIBERCV/0486) FJC.

Cuidado de los animales y los protocolos experimentales utilizados en este estudio cumplen con UE Directiva 2010/63 sobre la protección de los animales utilizados para fines científicos y fueron aprobados por el Comité de uso (2015/VSC/guisante/00049) y atención institucional del Animal.
Nota: El protocolo consiste en la administración crónica de una dieta alta en grasas, alta sacarosa durante 28 semanas y la evaluación de los componentes principales de los MetS. Se utilizaron 11 adultos machos Nueva Zelanda blanco (NZB) conejos 4.39 ± 0.14 (s.d.) kg, que eran 20-22 semanas de edad al inicio del protocolo experimental. Fueron alojados en una habitación con humedad (50 ± 5%) y ciclo de las condiciones de regulación de temperatura (20 ± 1,5 ° C) con una luz de 12 h. Las palabras "chow" y "dieta" puede utilizarse indistintamente en los pasos del protocolo.
1. dieta administración
<ol><li>
Obtener o preparar las dietas
	<ol>
<li>Obtener una disponible comercialmente dieta alta en grasas con aceite de coco hidrogenado añadido (10%) y manteca de cerdo (5%)19. Esta dieta proporciona 3,7 kcal·g-1.</li>
		<li>Preparar soluciones de sacarosa de 5 a 15% disolviendo las cantidades apropiadas de sacarosa en agua esterilizada (p. ej., uso 300 g de sacarosa en 2 L de caldo por una solución de sacarosa de 15%). Una solución de 15% proporcionará kcal·mL 0.6-1.</li>
		<li>Obtener un comercialmente disponibles control dieta19, que proporciona 2.7 kcal·g-1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Aclimatar a los animales durante 4 semanas
	<ol>
<li>Alimentación de cada animal en el grupo control 120 g de dieta de control diario. Proporcionar agua ad libitum.</li>
		<li>Alimentar animales en MetS chow de 250 g de grupo a partir de un control de 50% y 50% chow de alto contenido de grasa, aumentando progresivamente a chow de grasas 100% por el fin de semana 4. Nota: El objetivo sería lograr: (i) control del 35% y 65% grasas chow por el fin de semana 1; (ii) control 25% y 75% grasas chow por el fin de semana 2; (iii) 15% control y 85% chow de alto contenido de grasa al final de la semana 3. (iv) 100% chow de alto contenido de grasa al final de la semana 4.</li>
		<li>Dar animales en los MetS de agua con 5% de sacarosa en el inicio del grupo y aumentar la concentración de sacarosa al 15% a finales dela semana 4 .</li>
		<li>Registro de la ingesta diaria de chow y sacarosa solución para calcular la ingesta calórica según los valores proporcionados en 1.1.1. y 1.1.2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Inducir a MetS (28 semanas)
	<ol>
<li>Alimentar a cada animal en el grupo de control 120 g de control chow y agua ad libitum diario.</li>
		<li>Alimentación de los animales en el grupo de MetS 250 g de grasa chow y el 15% de sacarosa en agua. Chow de reemplazar todos los días y la solución de sacarosa cada tercer día.</li>
		<li>Sopese los restantes chow y agua todos los días para estimar la ingesta diaria.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. morfológica evaluación
<ol><li>Medida peso corporal del animal sobre una base semanal.</li>
	<li>Medir la altura, longitud, contorno abdominaly longitud tibialy estimar el Índice de masa corporal antes de la administración de la dieta experimental y a las semanas 14 y 28 en animales anestesiados.<ol>
<li>Canule la vena marginal de la oreja derecha con un catéter estéril desechable (18-22 G) e inyecte el propofol (8 mgkg-1) seguido de 1,5 mL de solución de NaCl al 0,9%. En el conejo anestesiado, realizar las mediciones enumeradas los pasos posteriores.</li>
		<li>Mida la altura y longitud. Usando medición de cinta, mida y anote la distancia desde la nariz hasta el talón en posición de decúbito lateral (de longitud). En la misma posición, tomar la distancia entre el acromion en el hombro y la punta de la pata (altura).</li>
		<li>Calcular índice de masa (IMC) de cuerpo20 como peso corporal (kg) · [longitud (m) x estatura (m)] -1.</li>
		<li>Coloque la cinta métrica suavemente alrededor del contorno abdominal y realizar una medición con el animal en posición supina.</li>
		<li>Medir la longitud tibial de la parte inferior de la articulación de la rodilla a la inserción del tendón de Aquiles.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. en ayunas glicemia y prueba de tolerancia de glucosa intravenosa (IVGTT)
Nota: Es aconsejable comenzar los procedimientos de la misma hora del día (es decir, 2-15:00).
<ol><li>Preparar una solución stock de glucosa (60%) con 60 g de glucosa en 100 mL de solución de NaCl al 0,9%.</li>
	<li>Rápido el animal para 7 h retirar alimentos y mantenimiento de agua, luego colocar el conejo consciente en un limitador en la posición propensa. Preparar el medidor de glucosa (insertar una nueva tira en el medidor) y tomar la primera muestra de la vena marginal de la oreja izquierda utilizando una lanceta para obtener una gota de sangre. Luego toque la gota de sangre con las prueba de tira y medir los niveles de glucemia utilizando el medidor de glucosa para determinar glicemia ayuna.</li>
	<li>Canule la vena marginal de la oreja derecha con un catéter desechable (18-22 G) e inyectar un bolo de una solución de glucosa de 60% (0.6 g·kg-1). Nota: Para preparar el bolo, añadir 1 mL/kg de la acción de la glucosa.</li>
	<li>Tomar muestras de sangre con la lanceta (una gota de sangre) en 15, 30, 60, 90, 120 y 180 min después de la inyección de glucosa y analizarlos con el medidor de glucosa como en 3.2.</li>
	<li>Retire el catéter desechable y pellizque el sitio de inserción del catéter con una gasa. Una vez que la sangre ha coagulado, retire la gasa y comprobar el estado del animal.</li>
</ol>4. presión arterial
<ol><li>Preparar el sistema de adquisición como un transductor de presión, una jeringa de 10 mL con 0.9% NaCl, una llave de tres vías, un amplificador y un PC/portátil con el software de adquisición (para la grabación de la presión arterial).</li>
	<li>Configurar el equipo. En primer lugar, coloque la llave de tres vías y la jeringa en el transductor de presión, entre el transductor y el catéter y conectar el transductor de presión del amplificador. Luego conecte el amplificador a la PC/laptop.</li>
	<li>Realizar la calibración del transductor de presión según las recomendaciones del fabricante.</li>
	<li>Coloque el animal consciente en un limitador de conejo en la posición propensa. Calentar la oreja antes de la canulación, luego por vía tópica se aplica un anestésico local (lidocaína/prilocaína de 2,5%) en el oído alrededor del sitio de inserción. Golpee suavemente la zona donde se ejecuta el paquete vascular para identificar fácilmente la arteria. Entonces inserta un catéter estéril (18-22 G) en la arteria central de la oreja izquierda. Afloje las restricciones y permitir que el animal permanezca tranquilo durante 30 minutos.</li>
	<li>Registrar la presión arterial continuamente por 20 min directamente del catéter arterial, colocar el transductor de presión ubicado el animal al nivel del corazón (frecuencia de muestreo: 1 KHz, ver figura 5B). Nota: Para mantener la presión arterial (PA) grabación libre de la interferencia de la coagulación de sangre (señal de BP pierde amplitud o desaparece), debe realizarse una inyección de NaCl (0,9%). Usando la llave de tres vías, cerrar el circuito que va desde el transductor a la sonda, abre el circuito que va desde la jeringa al catéter e inyectar 1-2 mL. Esto elimina coágulos de sangre que se puede formar en el catéter. Luego, abrir el circuito entre el transductor y el catéter y seguir la grabación una vez que la señal se ha recuperado.</li>
	<li>Una vez terminada la grabación, extraiga el catéter y pellizcar con una gasa en el sitio de inserción de catéter para detener la pérdida de sangre. Una vez que la sangre ha coagulado, retire la gasa y comprobar el estado del animal.</li>
</ol>5. plasma medidas
Nota: Es aconsejable comenzar los procedimientos de la misma hora del día (es decir, 2-15:00).
<ol><li>Rápido el animal para 7 h retirar alimentos y mantenimiento de agua, luego colocar el animal consciente en un limitador en la posición prona e insertar una aguja de 21 G estéril en la vena marginal de la oreja izquierda. Una vez que la sangre comience a gotear, deseche la primera gota y recoger las muestras de sangre en tubos con EDTA hasta el nivel indicado en el tubo. Almacenar las muestras en hielo.</li>
	<li>Centrifugar las muestras de sangre en 1.500 x g, 15 min, 4 ° C. Después de la centrifugación, el plasma con una pipeta de succión y preparar alícuotas de 250 μl.</li>
	<li>Analizar inmediatamente las muestras frescas. Parámetros de control básico son los siguientes: triglicéridos, colesterol total, HDL y LDL colesterol. Nota: Las muestras analizadas no recién deben almacenarse inmediatamente en un congelador de-80 ° C. Si está interesado en el análisis de glucosa en la sangre de las muestras de plasma, la prueba de la glucosa de la sangre debe utilizar tubos con oxalato del fluoruro en vez de EDTA.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros que compiten.

El establecimiento de un modelo experimental adecuado puede proporcionar un método más consistente y fiable para estudiar el desarrollo de los MetS, y también es necesario entender los mecanismos básicos que subyacen a los órganos y sistemas de remodelación. Aquí, describimos los métodos utilizados para desarrollar un modelo experimental relevante de MetS inducida por la dieta y cómo evaluar los principales componentes de este grupo de anormalidades metabólicas y cardiovasculares que caracterizan a este modelo: obesidad ...

Obesidad y síndrome metabólico (MetS) se han convertido en un problema creciente de salud pública y la práctica clínica, dada su creciente prevalencia debido al auge del estilo de vida sedentario y de hábitos alimenticios poco saludables1. Hay varias definiciones de MetS, pero la mayoría de ellos lo describen como un grupo de alteraciones cardiovasculares y metabólicas como obesidad abdominal, disminución de HDL y colesterol LDL elevado, triglicéridos elevados, intolerancia a la glucosa y la hipertensión2 ,3,4. La diagnosis requiere que tres de estos cinco criterios están presentes.
Debido a modelos animales, la investigación básica ha sido capaz de investigar los mecanismos que subyacen a procesos patológicos como el MetS. Se han utilizado varios modelos animales, pero es de vital importancia que el modelo reproduce las principales manifestaciones clínicas de la patología humana (figura 1). Con este objetivo, se han desarrollado modelos animales considerados similares a los seres humanos, principalmente caninos y porcinos, (véase Verkest5 y Zhang &amp; Lerman6 para revisión). Sin embargo, modelos caninos no muestran todos los componentes de MetS, dado que el desarrollo de ateroesclerosis o hiperglucemia en perros mediante la dieta es cuestionable5. Porcina modelos presentan la semejanza más anatómica y fisiológica de los seres humanos y así ofrecen poder de predicción significativo para dilucidar los mecanismos subyacentes a MetS, pero su mantenimiento y la complejidad de los procedimientos experimentales hacen uso de este trabajo muy intensivo y costoso modelo6.
Por otro lado, modelos de roedores (ratón y rata), dieta inducida espontánea y transgénicos, se han utilizado en la literatura para el estudio de la obesidad, hipertensión y MetS y sus consecuencias patológicas en diferentes órganos y sistemas (véase Wong et al. 7 para su revisión). Aunque el uso de estos modelos es más asequible que el canino o porcina, tienen desventajas importantes. De hecho, dependiendo de la cepa, los animales desarrollan algunos componentes de los MetS, mientras que otros como la hipertensión, la hiperglucemia y la hiperinsulinemia son ausente7. Además, uno de los principales componentes de MetS, la obesidad, en algunas cepas genéticamente modificadas, no sólo depende de factores asociados con la dieta, más bien se ha demostrado que algunos animales se convierten en obesos con comida normal o aún reducida ingesta8. Finalmente, las ratas y ratones muestran una natural deficiencia en la proteína de transferencia de éster de colesterol (CETP) y usan HDL como el principal medio de transporte de colesterol, que los hace relativamente resistente al desarrollo de la aterosclerosis. Esta es una diferencia importante en el metabolismo lipídico con los seres humanos, que expresan CETP y transportar el colesterol en LDL9.
Por el contrario, el conejo de laboratorio representa una etapa intermedia entre el animal más grande y modelos experimentales de roedores. Así, el conejo puede presentarse fácilmente a diferentes tipos de protocolos con mínimas necesidades de personal y mantenimiento, siendo más fácilmente manejado en procedimientos experimentales que los modelos animales más grandes. Además, se ha informado de que los conejos alimentados con una dieta alta en grasas tienen similares cambios hemodinámicos y neurohumoral como seres humanos obesos8,10,11. De nota, acerca del metabolismo de los lípidos, el conejo tiene abundante CETP en plasma y su perfil de lipoproteína LDL ricos12, que es también similar a los seres humanos. Además, conejos desarrollan hiperlipidemia muy rápidamente ya que, como herbívoros, son muy sensibles a la grasa dietética13.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57117/57117fig1.jpg"> Figura 1: comparación de modelos animales MetS. Verkest5, Zhang y Lerman6y Wong et al. 7 para su revisión. "<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg">" indica una ventaja y "<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg">" indica una situación de desventaja. *controversial, depende el estudio, *como fuera por Carroll et al. 8, algunas cepas genéticamente modificadas se convierten en obesos independientemente de la ingestión de alimentos. CEPT: proteína de transferencia acumulación de colesteril éster. GTT: prueba de tolerancia a glucosa. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57117/57117fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Para aclarar los mecanismos básicos subyacentes a la remodelación patológica producen por MetS en los diferentes órganos y sistemas y para comprender esta patología compleja, la elección de un modelo experimental que reproduce los principales componentes de MetS de humano es esencial. El conejo puede proporcionar muchas ventajas dadas su similitud con la fisiología humana y la asequibilidad de uso en protocolos de crónica y las medidas. En esta línea, algunos modelos de conejo inducida por la dieta con dieta alta en grasa y sacarosa de alta han sido utilizados14,15,16,17,18,19 (tabla 1) y un caracterización de los diferentes componentes de los MetS es de gran importancia cuando relacionados con un fenotipo con remodelación del órgano. Por lo tanto, objetivo principal de este artículo es describir los métodos para desarrollar un modelo de MetS inducida por dieta en conejos que permite el estudio de su fisiopatología y repercusiones en la remodelación del órgano.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="2">Estudio</td>
			<td rowspan="2">Dieta</td>
			<td rowspan="2">Duración</td>
			<td rowspan="2">Raza</td>
			<td colspan="4">Componentes de MetS</td>
		</tr>
<tr>
<td>OB</td>
			<td>HT</td>
			<td>HG</td>
			<td>DL</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Yin et al., (2002)14</td>
			<td>·    10% de grasa</td>
			<td rowspan="2">24 semanas</td>
			<td>·      NZB masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    37% de sacarosa</td>
			<td>·      2 kg</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Zhao et al., (2007)15</td>
			<td>·    10% de grasa</td>
			<td rowspan="2">36 semanas</td>
			<td>·      Hombre JW</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% de sacarosa</td>
			<td>·      16 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Helfestein et al (2011)16</td>
			<td>·    10% de grasa</td>
			<td rowspan="3">24 semanas</td>
			<td>·      NZB masculino</td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="3">-</td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="3"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    sacarosa al 40%</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td>·    0.5-0.1 colesterol</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Ning et al., (2015)17</td>
			<td>·    10% de grasa</td>
			<td rowspan="2">8-16 semanas</td>
			<td>·      WHHL masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% fructosa *</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Liu et al., (2016)18</td>
			<td>·    10% de grasa</td>
			<td rowspan="2">48 semanas</td>
			<td>·      NZB masculino</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg"></td>
			<td rowspan="2">-</td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
<tr>
<td>·    30% de sacarosa</td>
			<td>·      12 semanas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mutis de Arias et al., (2017)19</td>
			<td>·    15% de grasa</td>
			<td>28 semanas</td>
			<td>·      NZB masculino</td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
			<td><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 1: MetS inducida por la dieta del conejo modelos con alto contenido de grasa dieta alta sacarosa. El símbolo "<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq2.jpg">"indica ausencia,"<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57117/57117eq1.jpg">" presencia, y "-" no evaluado. * restringido. WHHL, Watanabe hiperlipidemic hereditarios conejos. JW, conejos blancos japoneses. OB, obesidad. HT, hipertensión. HG, hiperglucemia. DL, dislipidemia.

<table><tbody><tr><td>Báscula veterinaria</td><td>SOEHNLE</td><td>7858</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Pala para alimentación de aluminio</td><td>COPELE</td><td>10308</td><td>Pala para alimentación de aluminio http://copele.com/es/herramientas/48-pala-para-pienso-de-aluminio.html</td></tr><tr><td>Balance</td><td>PCE Ib&eacute; rica</td><td>PCE-TB 15</td><td>Balance http://www.pce-iberica.es/medidor-detalles-tecnicos/balanzas/balanza-compacta-pce-bdm.htm</td></tr><tr><td>Colador (20 cm de diámetro)</td><td>ZWILLING</td><td>39643-020-0</td><td>Colador https://es.zwilling-shop.com/Menaje-del-hogar/Menaje-de-cocina/Menaje-especial/Accesorios/Colador-20-cm-ZWILLING-39643-020-0.html</td></tr><tr><td>Cuenco</td><td>ZWILLING</td><td>40850-751-0</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Embudo</td><td>BT Ingenieros</td><td>no disponible</td><td>Embudo http://www.bt-ingenieros.com/fluidos-y-combustibles/961-juego-de-4-embudos-de-plastico.html?gclid=EAIaIQobChMIuInui_y-1QIVASjTCh28Zwf-EAQYBSABEgK7xPD_BwE</td></tr><tr><td>Introcan Certo 22G azul</td><td>B Braun</td><td>4251318</td><td>Catéter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Propofol</td></tr> <tr><td>Lipuro 10 mg/ml vial 20 ml</td><td>B Braun</td><td>3544761VET</td><td>Anestésico intravenoso general<br/</td></tr><tr><td>> http://www.bbraun-vetcare.es/producto/propofol-lipuro-1-FisioVet solución sérum 500ml</td><td>B Braun</td><td>472779</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Askina Film Vet 1,25cm x 5m</td><td>B Braun</td><td>OCT13501</td><td>Yeso Plástico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet</td></tr><tr><td>Askina Film Vet 2,50cm x 5m</td><td>B Braun</td><td>OCT13502</td><td>Yeso Plástico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet</td></tr><tr><td>Injekt siringe 10ml luer</td><td>B Braun</td><td>4606108V</td><td>Jeringa de inyección-aspiración de dos cuerpos de un solo uso http://www.bbraun-vetcare.es/producto/injekt-Seca</td></tr> <tr><td>201</td><td>seca</td><td>seca 201</td><td>Cinta ergonómica para medir perímetros https://www.seca.com/es_es/productos/todos-los-productos/detalles-del-producto/seca201.html#referred</td></tr><tr><td>Sterican 21Gx1" - 0,8x25mm verde</td><td>B Braun</td><td>4657543</td><td>Aguja Hipodérmica de Un Uso http://www.bbraun-vetcare.es/producto/agujas-hipodermicas-sterican-CONTOURNEXT-Meter</td></tr> <tr><td></td><td>BAYER 84413470</td><td></td><td>Sistema de análisis de glucosa en sangre http://www.contournextstore.com/en/contour-next-meter-2</td></tr><tr><td>CONTOUR NEXT tiras reactivas</td><td>BAYER 83624788</td><td></td><td>Tiras reactivas de glucosa en sangre http://www.contournextstore.com/en/contour-next-test-strips-100-ct-package</td></tr><tr><td>MICROLET NEXT DISPOSITIVO DE PUNCIÓN</td><td>BAYER</td><td>6702</td><td>Dispositivo de punción http://www.contournextstore.com/en/new-microlet-next-lancing-device</td></tr><tr><td>MICROLET 2 lancetas de colores</td><td>BAYER</td><td>81264857</td><td>Lanceta estéril ultrafina para punción capilar http://www.contournextstore.com/en/microlet2-colored-lancets-100s</td></tr><tr><td>Injekt 20ml luer siringe</td><td>B Braun</td><td>4606205V</td><td>Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale</td></tr><tr><td>Askina Mullkompressen 7,5x7,5cm - estéril</td><td>B Braun</td><td>9031219N</td><td>Paquetes de gasa estéril en sobres http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-mullkompressen-esteril</td></tr><tr><td>Emla lidocaína/prilocaína</td><td>AstraZeneca</td><td>no disponible</td><td>Anestésicos locales https://www.astrazeneca.es/areas-terapeuticas/neurociencias.html</td></tr><tr><td>Introcan Certo 18G short</td><td>B Braun</td><td>4251342</td><td>Catéter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Introcan</td></tr> <tr><td>Certo 20G</td><td>B Braun</td><td>4251326</td><td>Catéter intravenoso periférico http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan-Transductores de</td></tr> <tr><td>presión arterial-MA1 72-4497</td><td>Harvard Transductor</td> de <td>724497</td><td>para el control de la presión arterial http://www.harvardapparatus.com/physiology/physiological-measurements/transducers/pressure-transducers/research-grade-pressure-transducers.html</td></tr><tr><td>PowerLab 2/26</td><td>AD Instruments</td><td>ML826</td><td>Amplifier https://www.adinstruments.com/products/powerlab</td></tr><tr><td>LabChart ver. 6</td><td>AD Instruments</td><td>no disponible</td><td>Software de adquisición https://www.adinstruments.com/products/labchart</td></tr><tr><td>Animal Bio Amp</td><td>AD Instruments</td><td>FE136</td><td>Amplificador https://www.adinstruments.com/products/bio-amps#product-FE136</td></tr><tr><td>K2EDTA 7.2mg</td><td>BD</td><td>367861</td><td>Tubos de extracción de sangre http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=367861</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>SciQuip</td><td>2-16KL</td><td>Centrífuga http://www.sigma-centrifuges.co.uk/store/products/refrigerated-sigma-2-16k-centrifuge/</td></tr> <tr><td>Referencia Eppendorf 2, 100 &ndash; 1000 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>4920000083</td><td>Pipeta https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Pipeteo-44563/Pipetas-44564/Eppendorf-Reference2-PF-42806.html</td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121023</td><td>Tubes https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Puntas-tubos-y-placas-44512/Tubos-44515/Eppendorf-Safe-Lock-Tubes-PF-8863.html</td></tr><tr><td>NZW conejos (16-18 semanas de edad)</td><td>Granja San Bernardo</td><td>no disponible</td><td>Nueva Zelanda Conejos blancos http://www.granjasanbernardo.com/en/welcome/</td></tr> <tr><td>Sacarosa&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>Sacarosa para bebida solución http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s0389?lang=es&region=ES</td></tr><tr><td>Conejo dieta de control</td><td>de mantenimiento Ssniff</td><td>V2333-000</td><td>Dieta de control http://www.ssniff.com/</td></tr> <tr><td>Conejo dieta alta en grasas</td><td>Ssniff S9052-E020</td><td>Dieta alta en grasas http://www.ssniff.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Estante y bebedero para conejos</td><td>Sodispan</td><td>no disponible</td><td>Estante para conejos https://www.sodispan.com/jaulas-y-racks/racks-conejo-y-cobaya/</td></tr> <tr><td>Sujetador de conejos</td><td>Zoonlab</td><td>3045601</td><td>http://www.zoonlab.de/en/index.html</td></tr></tbody></table>

un modelo experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta de conejo: consideraciones metodológicas, desarrollo y evaluación

An Experimental Model of Diet-Induced Metabolic Syndrome in Rabbit: Methodological Considerations, Development, and Assessment

En los últimos años, la obesidad y síndrome metabólico (MetS) se han convertido en un problema creciente de salud pública y la práctica clínica, dada su prevalencia creciente debido al aumento del sedentarismo y hábitos alimenticios poco saludables. Gracias a modelos animales, la investigación básica puede investigar los mecanismos que subyacen a procesos patológicos como el MetS. Aquí, describimos los métodos utilizados para desarrollar un modelo de conejo experimental de MetS inducida por la dieta y su evaluación. Después de un período de aclimatación, animales son alimentados con un alto contenido de grasa (10% hidrogenada el aceite de coco y manteca de cerdo de 5%), alta sacarosa (15% de sacarosa disuelta en agua) dieta durante 28 semanas. Durante este período, se realizaron varios procedimientos experimentales para evaluar los diferentes componentes del MetS: morfológicas y mediciones de la presión arterial, determinación de tolerancia de glucosa y el análisis de varios marcadores de plasma. Al final del periodo experimental, animales desarrolladas obesidad central, hipertensión leve, la prediabetes y dislipidemia con un aumento de los niveles de triglicéridos (TG), HDL bajo y LDL alto, reproduciendo los principales componentes de MetS humanas. Este modelo crónica permite nuevas perspectivas para la comprensión de los mecanismos subyacentes en la progresión de la enfermedad, la detección de marcadores preclínicos y clínicos que permite la identificación de pacientes en riesgo, o incluso la prueba de nuevas terapéuticas enfoques para el tratamiento de esta compleja patología.

MetS representa un conjunto de anormalidades metabólicas y cardiovasculares, cuyo estudio puede facilitarse mediante el uso de modelos experimentales. De hecho, para aclarar los mecanismos subyacentes a la remodelación patológica producida por MetS, la elección de un modelo experimental que apropiadamente se asemeja a la condición humana y es conveniente para la investigación es de importancia crucial. Aquí, presentamos los métodos para inducir a MetS en conejos con una dieta alta en gras...

Se describen métodos para el desarrollo de un modelo experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta (MET) en conejos con una dieta alta en grasas, alta sacarosa. Animales desarrollaron obesidad central, hipertensión leve, pre diabetes y dislipidemia, reproduciendo los principales componentes de MetS humanas. Este modelo crónico permitirá la adquisición de mecanismos subyacentes de conocimiento de la progresión de la enfermedad.

Un modelo Experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta de conejo: consideraciones metodológicas, desarrollo y evaluación

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased ...

El objetivo general de este procedimiento es desarrollar y caracterizar un modelo de síndrome metabólico en conejos utilizando una dieta alta en grasas y sacarosa, lo cual es de gran importancia cuando se asocia un fenotipo con la remodelación de órganos. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la fisiopatología, como la comprensión de la remodelación de los órganos y la progresión de la enfermedad, la detección de marcadores paraclínicos y clínicos para identificar a los pacientes en riesgo o la prueba de nuevos enfoques terapéuticos. El conejo puede proporcionar muchas ventajas sobre otros modelos animales, incluidos los murinos, caninos o porcinos, dada su similitud con la fisiología humana y la asequibilidad de su uso en protocolos y mediciones crónicas.El encargado de demostrar este procedimiento será Óscar Arias, estudiante de doctorado de nuestro laboratorio. Para aclimatar a los animales a su dieta, alimente a cada animal del grupo de control con 120 gramos de dieta de control al día durante cuatro semanas y proporcione agua ad libitum. Alimente a los animales del grupo MetS con 250 gramos de comida comenzando con 50% de control y 50% de comida alta en grasa.Luego, aumente progresivamente la dieta a un 100% de comida alta en grasas al final de la cuarta semana. Además, dé a los animales del grupo MetS agua con sacarosa al 5% al principio y aumente la concentración de sacarosa al 15% al final de la cuarta semana. Registre la ingesta diaria de comida y solución de sacarosa para calcular la ingesta calórica.Una vez que los animales se hayan aclimatado a sus dietas, alimente a cada animal del grupo de control con 120 gramos de comida de control y agua ad libitum al día. Alimente a los animales del grupo MetS con 250 gramos de comida con alto contenido de grasa y 15% de sacarosa en agua. Reemplace la comida diariamente y la solución de sacarosa cada tres días.Pese la comida y el agua restantes diariamente para estimar la ingesta diaria. Para llevar a cabo la evaluación morfológica, pesar cada animal semanalmente. Antes de la administración de la dieta experimental y en las semanas 14 y 28, anestesiar al animal mediante el uso de un catéter desechable estéril para canular la vena marginal del oído derecho.A continuación, inyecte ocho miligramos por kilogramo de propofol, seguido de 1,5 ml de solución de cloruro de sodio al 0,9%. Una vez confirmada la anestesia, coloque al animal en posición de decúbito lateral y utilice una cinta métrica para medir la distancia desde la nariz hasta el talón. Registre esta medida como la longitud.Con el animal en la misma posición, mida la distancia desde el acromion en el hombro hasta la punta de la pata y regístrela como la altura. Ahora, con el animal en posición supina, coloque suavemente la cinta métrica alrededor del contorno abdominal y tome una medida. A continuación, mida la longitud de la tibia desde la parte inferior de la articulación de la rodilla hasta la inserción del tendón de Aquiles.Prepare una solución madre de glucosa al 60% con 60 gramos de glucosa en 100 mililitros de cloruro de sodio al 0,9%. Permita que los animales ayunen solo con agua durante siete horas. Luego, para determinar la glucemia en ayunas, coloque a un conejo consciente en un sujetador en posición prona.Inserte una nueva tira en un medidor de glucosa, luego, use una lanceta en la vena marginal izquierda del oído para obtener una gota de sangre y toque la gota con la tira reactiva. Use el medidor de glucosa para medir el nivel de glucosa en la sangre. Con un catéter desechable, canula la vena marginal del oído derecho e inyecte un bolo de una solución de glucosa al 60%.Use la lanceta como antes para tomar muestras de sangre a los 15, 30, 60, 90, 120 y 180 minutos después de la inyección de glucosa y use el medidor de glucosa para analizarlas. Retire el catéter desechable y use una gasa para pellizcar el sitio de inserción del catéter. Una vez coagulada la sangre, retira la gasa y comprueba el estado del animal.Para el registro de la presión arterial, prepare el sistema de adquisición que incluye un transductor de presión, una jeringa de 10 mililitros con cloruro de sodio al 0,9%, una llave de paso de tres vías, un amplificador y una computadora portátil con el software de adquisición. Para configurar el equipo, coloque la llave de paso de tres vías y la jeringa en el transductor de presión entre el transductor en el catéter y conecte el transductor de presión al amplificador. Luego, conecte el amplificador a la computadora portátil PC.Coloque al animal consciente que un conejo retiene en posición prona. Calentar el oído antes de la canulación, luego aplicar tópicamente un anestésico local en el oído alrededor del sitio de inserción. Golpee suavemente el área donde corre el paquete vascular para identificar fácilmente la arteria.A continuación, inserte un catéter estéril en la arteria central del oído izquierdo. Ahora, afloje las restricciones y permita que el animal permanezca quieto durante 30 minutos. Coloque el transductor de presión junto al animal a la altura del corazón y registre la presión arterial de forma continua durante 20 minutos, directamente desde el catéter arterial.Una vez finalizada la grabación, retire el catéter y use una gasa para pellizcar el sitio de inserción del catéter y detener la pérdida de sangre. Una vez coagulada la sangre, retira la gasa y comprueba el estado del animal. Para tomar medidas de plasma, permita que los animales ayunen con agua solo durante siete horas.A continuación, coloque a un animal consciente en un sujetador en posición prona e inserte una aguja estéril de calibre 21 en la vena marginal del oído izquierdo. Una vez que la sangre comience a gotear, deseche la primera gota y recoja las muestras de sangre en tubos de EDTA hasta el nivel indicado en el tubo. A continuación, almacene las muestras en hielo.Centrifugar las muestras de sangre a 1500 g y cuatro grados centígrados durante 15 minutos. Después de la centrifugación, use una pipeta para recolectar el plasma y prepare alícuotas de 250 microlitros. Analice inmediatamente las muestras frescas de colesterol total, HDL, LDL y triglicéridos.Como se muestra en esta tabla, el peso de los conejos del grupo MetS aumentó progresivamente con la dieta alta en grasas hasta el final del protocolo experimental. En este gráfico se ilustra el comportamiento de la ingesta de energía y sus fluctuaciones, que van desde 250 hasta 815 kilocalorías en el grupo MetS. En este gráfico se representa la contribución relativa de las diferentes fuentes de energía.Hay períodos críticos en las semanas 14 y 28, ya que, dado el estrés producido por los procedimientos experimentales, los conejos podrían disminuir la ingesta de comida y agua. Se observa una hiperglucemia leve en la semana 14, que alcanza una meseta, y mantiene valores similares en la semana 28. El área bajo la curva también aumenta en el grupo MedS.La hipertensión está estrecha y directamente relacionada con la gravedad de la obesidad. Los conejos alimentados con una dieta alta en grasas y sacarosa durante 28 semanas mostraron un aumento de la presión arterial sistólica, diastólica y media ya en la semana 14, y este aumento de la presión arterial se mantiene en la semana 28. Finalmente, en este modelo crónico se observó una alteración en el perfil lipídico ya en la semana 14, que se mantuvo estable hasta la semana 28.Esto incluyó un aumento en los triglicéridos y LDL, una disminución en el HDL y ningún cambio en el colesterol total en los animales MedS en comparación con los controles en ambos momentos. Utilizando este modelo crónico, se podrían realizar otros estudios para responder a preguntas adicionales como cómo la patología se está transformando de manera similar en el síndrome metabólico humano, lo que permite nuevas perspectivas en los mecanismos fisiopatológicos implicados en la progresión de la enfermedad. Este modelo experimental allanó el camino para que los investigadores en el campo de la fisiología interactiva y la fisiopatología exploraran los mecanismos subyacentes a la remodelación de los órganos.La detección de biomarcadores para identificar pacientes en riesgo, o el ensayo de nuevos enfoques terapéuticos para el tratamiento del síndrome metabólico.

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Investigación

JoVE Journal

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Medicina

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Aquí describimos, paso a paso, un protocolo detallado para realizar ecocardiografía en el modelo de conejo. Mostramos cómo obtener correctamente las diferentes vistas ecocardiográficas y planos de imagen, así como los diferentes modos de imagen disponibles en un sistema de ecocardiografía clínica utilizado rutinariamente en pacientes humanos y veterinarios.

Examen Ecocardiográfico Transtorácico en el Modelo Conejo

Este protocolo describe el uso de una dieta de cafetería de estilo occidental altamente apetecible para modelar la alimentación excesiva y la obesidad en roedores. Aquí, proporcionamos un esquema detallado de la selección, preparación y medición de alimentos, y explicamos factores metodológicos que ayudan a generar un fenotipo robusto y reproducible.

Dieta de cafetería de estilo occidental palatable como un método confiable para modelar la obesidad inducida por la dieta en roedores

El registro continuo de la presión arterial permite la investigación de los impactos de diversos parámetros hemodinámicos. Este informe demuestra la aplicación de la monitorización continua de la presión arterial en un modelo animal grande de accidente cerebrovascular isquémico para la determinación de la fisiopatología del accidente cerebrovascular, el impacto de diferentes factores hemodinámicos y la evaluación de nuevos enfoques de tratamiento.

Monitorización en tiempo real y modulación de la presión arterial en un modelo de conejo de accidente cerebrovascular isquémico

El presente estudio demuestra un modelo animal altamente reproducible de isquemia miocárdica regional aguda y lesión por reperfusión en conejos utilizando una minitoracotomía izquierda para los casos de supervivencia o una esternotomía de línea media para los casos de no supervivencia.

Modelo de lesión por isquemia y reperfusión en conejos

Este estudio detalla los procedimientos para establecer una lesión crónica del manguito rotador (CR) del conejo. Específicamente, la lesión se crea en la unidad músculo-tendón/miotendinosa del subescapular (SSC) para imitar la anatomía y la fisiopatología del RC humano, incluida la degeneración grasa muscular (DF) grave. Este protocolo se puede aplicar para estudiar las lesiones por RC y evaluar las terapias regenerativas.

Desarrollo de un modelo de lesión crónica del manguito rotador de conejo para el estudio de la fibrosis y la degeneración grasa muscular

Este protocolo describe un método para inducir la miocardiopatía diabética a través de una combinación de alimentación con dieta alta en grasas e inyección de estreptozotocina. Este enfoque tiene como objetivo proporcionar un marco confiable para la investigación científica sobre la miocardiopatía diabética y explorar posibles vías para aplicaciones de tratamiento clínico.

Modelado y evaluación del modelo de miocardiopatía diabética murina

Este estudio ofrece un método reproducible y estandarizado para establecer modelos de ratas obesas que exhiben obesidad simple, comúnmente caracterizada por páncreas graso. También incluye protocolos detallados para la toma de muestras de tejido pancreático y la inmunohistoquímica.

Desarrollo y validación de una metodología para establecer modelos de ratas obesas con páncreas graso típico

Aprende a desarrollar un modelo experimental de síndrome metabólico en conejos mediante dieta alta en grasas y sacarosa. Este método permite estudiar remodelación de órganos y progresión de la enfermedad en investigación biomédica.

Un modelo Experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta de conejo: consideraciones metodológicas, desarrollo y evaluación (Video) | JoVE Journal

Un modelo Experimental del síndrome metabólico inducido por la dieta de conejo: consideraciones metodológicas, desarrollo y evaluación

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