Name: Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Aprende a trasplantar láminas de células madre derivadas de tejido adiposo para reducir fugas en anastomosis colorrectal usando un modelo de rata. Este método promueve la cicatrización tisular sin materiales sintéticos.

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Los autores agradecemos al Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. m.a.m. Mureau y todos los cirujanos del Departamento de cirugía plástica de la colección del tejido adiposo subcutáneo. P. Sukho es apoyado por una beca del programa de la comunidad de Países Bajos (NFP-12/435), durante la realización del estudio. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens es apoyado por becas de la fundación holandesa de artritis (LP11).

El tejido adiposo abdominal subcutáneo se obtuvo de donantes humanos con la aprobación de la Comisión de ética médica (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holanda. Todos los experimentos en animales fueron aprobados por el Comité ético de Experimentación Animal, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Países Bajos (133-14-01).
1. cultivo y aislamiento de ASCs humano
<ol><li>Preparar 3 mL de medio de aislamiento de 1 g de tejido adiposo. Glucosa baja mezcla Dulbecco de medio de Eagle modificado (LG-DMEM) con bovinos de 10 g/L albúmina sérica (BSA) y la colagenasa 1 g/L tipo 1.</li>
	<li>Disecar el tejido adiposo abdominal subcutáneo humano (n = 8, todas mujeres, media de los 40 años ± 9 años de edad) a trozos pequeños (0,5 cm) utilizando una cuchilla quirúrgica estéril tamaño 10, fórceps del tejido de Adson-Brown y tijeras de Metzenbaum en un estéril SafetyCabinet biológica.</li>
	<li>Guarde el tejido disecado en estéril frasco de almacenamiento en cuanto a los medios de comunicación. Pesar la cantidad total de tejido disecado y comenzar la digestión con el medio de aislamiento preparada (50 g de tejido adiposo con 150 mL de medio de aislamiento por la botella). El protocolo puede pausarse aquí guardando la botella con la diseca el tejido adiposo y aislamiento medio a 4 ° C en un mezclador de rodillos durante la noche. Luego Precaliente la botella al día siguiente a temperatura ambiente 25 ° C durante 15 minutos antes de continuar con el siguiente paso. Nota: El tejido adiposo abdominal subcutáneo fue obtenido como material sobrante de donantes sometidos a cirugía de reconstrucción de mama con la aprobación de la Erasmus MC médico Comité de ética (# MEC-200) y de acuerdo con el código de conducta: "uso secundario adecuado de tejido humano"(< http://www.federa.org>). El tejido adiposo sobrante fue utilizado solamente de donantes que no optar a la utilización secundaria.</li>
	<li>Digerir el tejido adiposo disecado en una botella de almacenamiento de medios de vidrio estéril en un Incubador agitador a 150 rpm y 37 ° C durante 1 h.</li>
	<li>La solución digerida se dividen en tubos de 50 mL y centrifugar los tubos durante 10 min a 390 x g.</li>
	<li>Preparar medio de cultivo: LG-DMEM suplementado con 10% suero bovino fetal (FBS), 50 de μg/mL gentamicina y 1.5 μg/mL ampothericin B.</li>
	<li>Después de la centrifugación, eliminar el sobrenadante y resuspender el precipitado de células en 20 mL de medio de cultivo (LG-DMEM suplementado con 10% suero bovino fetal (FBS), 50 de μg/mL gentamicina y 1.5 μg/mL ampothericin B). Centrifugar las células nuevamente por 5min a 390 x g y eliminar el sobrenadante.</li>
	<li>Resuspender el pellet celular con 10 mL de medio de cultivo (LG-DMEM suplementado con 10% FBS, 50 de μg/mL gentamicina y ampothericin B de 1.5 μg/mL) y filtre la suspensión de células a través de un filtro de 100 μm.</li>
	<li>Añadir 50 μl de la solución de 3%, ácido acético, metileno azul (para lisis de glóbulos rojos) a 50 μl de suspensión celular, mezclar la solución y utilizar 10 μL para contar las células. Realizar el celular cuenta con un hemocitómetro. Entonces la placa las células a una densidad de 40.000 células/cm2 en medio de cultivo (LG-DMEM suplementado con 30% FBS, 50 de μg/mL gentamicina y ampothericin de 1.5 μg/mL B).</li>
	<li>Incube las células a 37 ° C en atmósfera húmeda con 5% CO2 durante 24 h.</li>
	<li>Tras la incubación, lavar las células con fosfato caliente (37 ° C) tampón salino (PBS) para eliminar restos celulares y reemplazar los medios de comunicación con medio de cultivo 10% FBS con recién añadieron ácido ascórbico 2-fosfato (25 μg/mL) y el crecimiento de fibroblastos recombinante humano factor 2 (FGF2, 1 ng/mL).</li>
	<li>ASC de subcultura en el 90% de confluencia con solución estándar 0.25% tripsina EDTA (3 mL en un matraz T175). Después de 3-5 min, neutralizar la solución 0.25% tripsina EDTA con 10 mL de medio de cultivo (LG-DMEM suplementado con 10% FBS, 50 de μg/mL gentamicina y ampothericin de 1.5 μg/mL B). Nota: Flujo cytometry análisis con marcadores de superficie ASC común y la diferenciación de tri-linaje ensayos realizaron previamente y reveló que ASC aislados usando este protocolo muestra ASC características específicas21,22.</li>
	<li>Lavar las células con 10 mL de medio de cultivo (LG-DMEM suplementado con 10% FBS, 50 μg/mL gentamicina y ampothericin de 1.5 μg/mL B) para un matraz T175 y centrifugar las células durante 8 min a x 250 g. eliminar el sobrenadante y resuspender las células en 1 mL de medio de cultivo. Contar las células con un hemocitómetro.</li>
	<li>Placa las células T175 frascos de cultivo a una densidad de 8.000 células/cm2.</li>
	<li>Congelar el ASCs restantes en nitrógeno líquido con 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) en medio de cultivo antes de su uso posterior.</li>
</ol>2. ASC hoja preparación
<ol><li>La capa platos termo-sensible de la cultura (3,5 cm de diámetro) con 1 mL de SBF, luego coloque los platos en una incubadora a 37 ° C durante al menos 30 minutos antes de sembrar células.</li>
	<li>Trypsinize ASC con solución estándar de EDTA de tripsina 0.25% durante 3-5 min (3 mL en un matraz de cultivo T175). Si hay cualquier grupos de células después de la tripsinización, filtrar las células a través de un filtro de 100 μm antes de contar.</li>
	<li>Neutralizar la solución de tripsina con LG-DMEM suplementado con 10% FBS (10 mL en un matraz T175) y Centrifugue la suspensión de células durante 8 min a x 250 g. eliminar el sobrenadante y resuspender las células en 1 mL de LG-DMEM suplementado con 10% FBS.</li>
	<li>Después de los platos termo-sensible de la cultura con FBS de la capa, mover los platos de la incubadora en una placa de calentamiento a 37 ° C y FBS Retire el plato.</li>
	<li>Semilla ASC en 400.000 células/cm2 (en total, 3,52 x 106 células diluidos en 2 mL de medio de cultivo por plato).</li>
	<li>Distribuir cuidadosamente las células tan uniformemente como sea posible agitando ligeramente el plato.</li>
	<li>Hojas ASC de cultivo durante 48 h a 37 ° C en atmósfera húmeda con 5% CO2. Nota: Tratar de minimizar la apertura de la puerta de la incubadora después de la siembra de ASCs para evitar bajadas de temperatura que pueden provocar un despegado prematuro de las hojas formadas de ASC o interferir con la formación de la hoja ASC.</li>
</ol>3. parcial colectomía y Anastomosis colorrectal
<ol><li>Inducir y mantener ratas Wistar macho (peso entre 250-350 g) con 1 L/min de isoflurano (inhalación de 1.5-5%)/oxygen e inyectar 0,05 mg/kg de buprenorfina intramuscular.</li>
	<li>Una vez que los animales están bajo anestesia general, evaluar la profundidad anestésica mediante pruebas reflejas. Aplicar pomada de ojos contiene vitamina A en los ojos para evitar la sequedad. Cuando la anestesia se considera suficiente para la cirugía, preparar asépticamente el abdomen por afeitar pelos y rociar el área operada dos veces con etanol al 70%. Cubra el abdomen con cortinas de papel estéril. Utilizar una técnica aséptica y mantener el campo estéril durante el procedimiento quirúrgico general.</li>
	<li>Hacer una incisión abdominal de línea media de 5 cm con un tamaño de cuchilla quirúrgica estéril 10 y extender la incisión con tijeras de Metzenbaum. Identificar y exteriorizar el colon y colon el paquete del resto de la cavidad abdominal con solución Salinas gasas humedecidas. Identificar la mitad derecha y sin rodeos deja las arterias cólicos en el mesenterio, diseca alrededor de cada recipiente con mosquito Halsted y ligar cada recipiente individual con seda trenzada no absorbible 4/0.</li>
	<li>Aislar el segmento colónico entre 1,0 cm aborally al ciego y 0,5 cm por encima de la arteria mesentérica caudal. Transectos a través del colon sano con unas tijeras de Metzenbaum. Después de la resección del segmento colónico, reúne los extremos proximales y distales del colon mediante la introducción de dos hisopos de algodón larga trans-analmente por el colon distal y luego en el extremo proximal del colon.</li>
	<li>Utilizando un microscopio quirúrgico, crear una anastomosis suturada escaso de end-to-end invirtiendo una capa usando suturas interrumpidas 5 (8/0 de la poliamida del monofilamento no absorbible) de sutura. Colocar las suturas interrumpidas a través de todas las capas de la pared del colon y coloque la extraluminally de nudos.</li>
	<li>Dividir las ratas al azar en control o grupo de hoja ASC.</li>
</ol>4. ASC hoja trasplante
<ol><li>Deje que los platos de la cultura se enfríe a temperatura ambiente 40 min antes del trasplante en vivo , para facilitar el desprendimiento de la hoja ASC. Nota: Después de la separación, hojas ASC se encogen a aproximadamente 2 cm de diámetro. Viabilidad de hoja ASC se mantiene alto durante al menos 3-6 h después de la separación20.</li>
	<li>Retire el medio de cultivo y reemplazar con 1 mL de suero libre de LG-DMEM.</li>
	<li>Suavemente agarra los bordes de la hoja ASC con pinzas atraumáticas y coloque el plato de lado de la hoja de la ASC sobre la línea de anastomosis.</li>
	<li>Cuidadosamente extiende la ASC hoja aproximadamente 0,25 cm por encima y por debajo de la línea anastomótica usando las pinzas atraumáticas y el abrigo la hoja alrededor de los dos puntos. Levante el colon hasta la envoltura de la hoja de la ASC en el lado dorsal. Nota: Hojas ASC se adhieren espontáneamente a la línea anastomótica, sin necesidad de usar pegamento de tejido o cualquier otro biomaterial. El grupo control no recibieron ningún tratamiento adicional.</li>
	<li>Retirar las torundas de algodón y cambiar los guantes e instrumentos. Reemplazar los dos puntos en el abdomen. Cerrar el abdomen-línea alba con una capa de corriente usando suturas absorbibles trenzadas poliglicólico ácido 5/0. Sutura el tejido subcutáneo y el cutis en una capa de corriente usando suturas absorbibles trenzadas poliglicólico ácido 5/0.</li>
</ol>5. seguimiento y evaluación postoperatorio
<ol><li>Inmediatamente rehidratar los animales con una inyección subcutánea de solución salina tibia 5 mL después de la operación. Colocar los animales bajo una lámpara de calor para mantener la temperatura corporal y monitorear los signos vitales hasta animales recuperar la suficiente consciencia para mantener recumbency esternal. Nota: Los animales que habían sido sometidos a cirugía no fueron devueltos a la compañía de otros animales hasta que se recuperó completamente. Después de la recuperación, permiten acceso libre al agua y chow rata regular. Para aliviar el dolor postoperatorio, administrar 0,05 mg/kg de buprenorfina por vía subcutánea cada 6-8 h por 3 días. No antibióticos fueron administrados en cualquier momento de este estudio.</li>
	<li>Obtener evaluaciones clínicas diarias de peso y bienestar. En caso de una puntuación de bienestar muy bajo o pérdida de peso severa, animales deben ser sacrificados por exsanguinación mediante punción cardiaca mientras que aún bajo anestesia.</li>
	<li>Postoperatorio día 3 o día 7, anestesiar las ratas otra vez con 1 L/min de isoflurano (inhalación de 1.5-5%)/oxygen sin buprenorphine y realizar una re-laparotomía con una incisión en forma de U. Compruebe el abdomen para los signos de la presencia de abscesos, peritonitis, estenosis y adherencias fibrosas. Puntuación de la severidad de las adherencias y absceso en el abdomen y en la zona anastomótica.</li>
	<li>Determinar la presión rotura anastomótica por la insuflación de aire en un segmento cerrado del colon como la anastomosis. Registrar la presión de aire y el lugar de ruptura cuando el primer aire de fugas como la presión de ruptura.</li>
	<li>Quitar los dos puntos de cada animal sacrificado y fijar el segmento cortado del colon - que contiene la anastomosis colorrectal - con 4% tamponada formaldehído, por parafina inclusión y los dos puntos de corte en secciones de 4 μm de espesor.</li>
	<li>Eutanasia a los animales mientras que bajo anestesia directamente después de la colección del segmento de anastomosis por exsanguinación mediante punción cardiaca. Confirman muerte de animales con la ausencia de respiración, movimiento y un ritmo cardíaco.</li>
	<li>Realizar los stainings histoquímicos como hematoxilina & eosina y Picro Sirius rojo y los stainings de immunohistochemical con los anticuerpos contra las mitocondrias humanas, las células endoteliales de la rata (anti-CD34) y células del sistema inmune (CD3 +, CD163 +).</li>
	<li>Digitalizar diapositivas de análisis computarizado y comparar los grupos de animales.</li>
</ol>

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<li>Kobayashi, J., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+a+thermoresponsive+cell+culture+dish%3A+a+key+technology+for+cell+sheet+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Technol+Adv+Mat%22%5BJournal%5D)">Fabrication of a thermoresponsive cell culture dish: a key technology for cell sheet tissue engineering.</a> Sci Technol Adv Mat. 11 (1), 014111(2010).</li>
<li>Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+engineering%3A+a+unique+nanotechnology+for+scaffold-free+tissue+reconstruction+with+clinical+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine.</a> J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).</li>
<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li>
<li>Makarevich, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+angiogenesis+in+ischemic+skeletal+muscle+after+transplantation+of+cell+sheets+from+baculovirus-transduced+adipose-derived+stromal+cells+expressing+VEGF165%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced angiogenesis in ischemic skeletal muscle after transplantation of cell sheets from baculovirus-transduced adipose-derived stromal cells expressing VEGF165.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 204(2015).</li>
</ol>

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pueda interpretarse como un potencial conflicto de interés.

Fuga anastomótica es el evento adverso más grave después de la resección de colon con una anastomosis primaria. Técnicas óptimas para evitar fugas y disrupción anastomótica siguen faltando. Aplicación local de una amplia gama de biomateriales se ha realizado, con distintos resultados25,26,27. El objetivo de las terapias de la célula es facilitar la reparación de los tejidos por el reemplazo del tejido o la estimulación de la cur...

Colectomía parcial con una anastomosis primaria es una cirugía comúnmente realizada que se puede hacer para muchas enfermedades que afectan el colon como el cáncer colorrectal, enfermedad de Crohn y diverticulitis1,2. La más temida complicación después de la fuga anastomótica3anastomosis colorrectal. Aunque se han identificado varios factores de riesgo asociados a fugas anastomóticas, soluciones para la prevención de fugas siguen siendo desconocido4,5.
Células estromales derivadas de tejido adiposo (ASCs) están asociadas con propiedades antiinflamatorias y tróficos6,7, que hace que estas células prometedores candidatos para terapias regenerativas8. La eficacia de ASCs para promover la curación del tejido fue demostrada en varios tejidos como el músculo cardiaco, piel y esófago9,10,11,12,13. Sin embargo, hay pocos informes sobre el uso de ASCs para promover la curación intestinal. Trasplante local de ASCs para anastomosis colorrectales experimentales vía biosutures recubierto de ASC serosas inyecciones de ASCs no mostraron o mejora en la curación de14 o no impidió la fuga anastomótica a pesar de un más favorable anastomótica cura de15.
Trasplante local de ASC en suspensión o en combinación con biomateriales pueden asociarse a retención insuficiente de células o una distribución inadecuada de las células trasplantadas11. Células hoja tecnología16,17 ofrece un método innovador de ASC entrega18,19. Por lo tanto, en un estudio anterior, se propuso un nuevo enfoque en que ASC organizada en una celda de la hoja podría aplicarse en anastomosis colorrectal experimental20. Este estudio demostró que la ASC hoja trasplante es exitoso en la reducción de fugas de anastomosis colorrectal después de la colectomía parcial en un modelo de rata. Este artículo divulga ASC hoja preparación y técnica quirúrgica del trasplante.

<table><tbody><tr><td>LG DMEM</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>22320022</td><td>Aislamiento y cultivo</td></tr> de <tr><td>ASC Colagenasa tipo I</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>17100-01</td><td>ASC Aislamiento</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>ASC Aislamiento</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>10270-106</td><td>FBS, ASC aislamiento y cultivo</td></tr><tr><td>3% acético ácido con azul de metileno</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7060</td><td>Aislamiento ASC</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15750-037</td><td>Aislamiento y cultivo de ASC</td></tr><tr><td>Antotericina B</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15290-018</td><td>Agitador de aislamiento y cultivo de ASC</td></tr><tr><td>(Agitador ambiental Gallenkamp modelo 10X 400)</td><td>Aislamiento</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Akribis Scientific F240 ASCCentrífuga</td><td>Hettichlab</td><td>Rotina380</td><td>Aislamiento y cultivo de ASC</td></tr><tr><td>Tampón de fosfato salino</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>14190-094</td><td>Aislamiento y cultivo de PBS, ASC</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico-2-fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td>Aislamiento y cultivo de ASC</td></tr><tr><td>Factor de crecimiento de fibroblastos recombinantes humanos 2</td><td>AbD Serotec</td><td>AF-100-15</td><td>FGF2, aislamiento y cultivo de ASC</td></tr><tr><td>Tripsina EDTA</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>25200-056</td><td>Cultivo ASC</td></tr><tr><td>Sulfóxido de dimetilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650-5x</td><td>DMSO, congelación ASC</td></tr><tr><td>Placas de cultivo termosensibles</td><td>Nunc Preparación</td> de <td>sábanas Thermo</td>scientific <td>174904</td> ASC</tr><tr><td>Seda trenzada no absorbible 4/0</td><td>B Braun</td><td>21151042</td><td>cirugía</td></tr><tr><td>Monofilamento no absorbible poliamida 8/0</td><td>B Braun</td><td></td><td>G1118170 surgery</td></tr><tr><td>Ácido poliglicólico trenzado reabsorbible 5/0</td><td>B Braun</td><td>C1048207</td><td>surgery</td></tr></tbody></table>

trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Fuga anastomótica es una complicación catastrófica después de la cirugía colorrectal. Aunque los métodos actuales para la prevención de fugas tienen diferentes niveles de eficacia clínica, son hasta ahora imperfectas soluciones. Terapia de células madre utilizando hojas de ASC podría proporcionar una solución a este problema. ASCs son considerados como prometedores candidatos para promover tejido de cicatrización debido a sus propiedades tróficas e inmunomoduladores. Aquí, ofrecemos métodos para producir alta densidad hojas ASC, que se trasplantan en una anastomosis colorrectal en un modelo de rata para reducir la fuga. ASCs forman hojas celular en platos termo-sensible de la cultura que pueden ser desmontados fácilmente. En el día del transplante, se realizó una colectomía parcial con una 5-sutura en la anastomosis colorectal. Los animales fueron trasplantados inmediatamente con 1 hoja ASC por rata. Hojas ASC se adhirieron espontáneamente a la anastomosis sin ninguÌ n pegamento, sutura o cualquier biomaterial. Grupos de animales fueron sacrificados 3 y 7 días después de la operación. Comparado con animales trasplantados, la incidencia de abscesos anastomóticos y la salida fue mayor en los animales control. En nuestro modelo, el trasplante de hojas ASC después de anastomosis colorrectal era acertado y asociado con una menor tasa de salida.

Un diagrama de flujo de este estudio que representa el cultivo de hoja ASC y el procedimiento de resección del colon y la anastomosis se muestra en la figura 1. La figura 2 muestra la morfología microscópica de la hoja ASC y el aspecto macroscópico de la hoja ASC durante y después de la separación. La figura 3 muestra los diferentes pasos de desprendimiento de la hoja ASC y trasplante. <strong class=...

Se presenta la preparación y el trasplante de tejido adiposo derivado de la célula de vástago (ASC) hojas en anastomosis colorrectales suficientemente suturadas en un modelo de rata. Esta aplicación novedosa muestra que hojas ASC pueden reducir la fuga de la anastomosis colorrectal.

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Debido a que asumen un efecto positivo en la cicatrización de los tejidos, las láminas de ASC se han probado en muchos modelos de enfermedad, como el infarto de miocardio. Este experimento muestra que las láminas de ASC se pueden usar intraabdominalmente y aplicar en el intestino. La principal ventaja de las láminas ASC es que no se necesitan materiales sintéticos.Además, el trasplante de láminas de ASC es relativamente fácil de realizar, con solo una pequeña cantidad de práctica. Esta novedosa aplicación del trasplante de lámina de ASC se desarrolló para prevenir las fugas después de la resección intestinal, y ofrece un primer paso para una nueva estrategia terapéutica. Se ha demostrado que las láminas de ASC aplicadas a la anastomosis intestinal son prometedoras para prevenir las fugas.Las láminas de ASC también se pueden aplicar a otros órganos intraabdominales, como el tracto urinario. Comience por diseccionar el tejido adiposo abdominal subcutáneo humano en trozos de 0,5 cm, con una cuchilla quirúrgica estéril de tamaño 10, pinzas de tejido Adson-Brown y tijeras Metzenbaum. Pesa la cantidad total de tejido diseccionado en un frasco de vidrio estéril.Añadir 30 ml de medio aisla

transplantation-adipose-tissue-derived-stem-cell-sheet-to-reduce

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Este video demuestra una técnica para aislar y cultivar células madre adiposas (ADSC) derivadas de la cresta neural marcadas con fluorescencia a partir de tejido adiposo del arco periaórtico murino. Tras el aislamiento, las NCADSC se detectan, se clasifican mediante la clasificación celular activada por fluorescencia y, posteriormente, se cultivan en una placa, lo que promueve la proliferación celular.

Aislamiento de células madre derivadas del tejido adiposo periaórtico murino

En 2001, investigadores de la UCLA describen el aislamiento de una población de células madre adultas, denominada células madre o las ASC derivadas de tejido adiposo, a partir de tejido adiposo. En este artículo se describe el aislamiento de las ASC de lipoaspirates utilizando un protocolo de digestión manual, enzimática utilizando colagenasa.

Aislamiento Manual de células madre derivadas de tejido adiposo de Lipoaspirates Humanos

Células madre procedentes de adiposo (ASCs) son fácilmente aisladas y extraídas de la grasa de las ratas normales. Hojas de ASC pueden crearse utilizando ingeniería hoja de la célula y pueden ser transplantadas en Zucker ratas diabéticas grasosas exhibiendo espesor total defectos con hueso expuesto de la piel y luego se cubrieron con una bicapa de piel artificial.

Creación y el transplante de una hoja de células madre derivadas de adiposo (ASC) en un modelo de curación de herida diabética

El estudio muestra un método endoscópico exitoso de células estromales derivadas de tejido adiposo (ADSC)-hoja de trasplante para la prevención de la estenosis esofágica después de una disección endoscópica submucosa extendida (ESD) en un modelo porcino.

ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa

Aquí, presentamos un protocolo para desarrollar un modelo de cáncer en vivo utilizando la tecnología de hoja de la célula. Tal modelo podría ser muy útil para la evaluación de la terapéutica contra el cáncer.

Explorar el potencial de la hoja de células madre mesenquimales en el desarrollo de Carcinoma Hepatocelular en Vivo

Este artículo describe un método de trasplante para injertar células epiteliales mamarias de ratas de donantes en la almohadilla de grasa blanca interescapular de los animales receptores. Este método se puede utilizar para examinar los efectos del huésped y/o del donante en el desarrollo del epitelio mamario y elimina la necesidad de pre-clearing, extendiendo así la utilidad de esta técnica.

Trasplante de células epiteliales de rata mamaria en la almohadilla de grasa blanca interescapular

Este método de trasplante de islotes cubiertos de grasa es adecuado para la detección de islotes injertados en la cavidad intraperitoneal. En particular, no requiere el uso de agentes bioaglutinantes o suturas.

Trasplante de islotes cubiertos de grasa utilizando tejido adiposo blanco epididimario

Este protocolo describe el método para establecer un modelo de pouchitis en ratas. El modelo de bolsa ileal se creó mediante la realización de una cirugía de anastomosis ileal-anal (IPAA) mediante técnicas microquirúrgicas. Después de la cirugía, la rata fue tratada con sulfato de dextrano sódico (DSS) al 4% durante 4 días.

Un modelo de pouchitis en ratas después de proctocolectomía y anastomosis anal con bolsa ileal y anastomosis con sulfato de dextrano sódico

Aquí presentamos un protocolo de trasplante de tejido adiposo blanco y marrón que ofrece una estrategia prometedora para revertir la subfertilidad, la obesidad y la hiperglucemia, al tiempo que mejora la función renal en ratones BTBR diabéticos y obesos.

Injertos adiposos blancos y marrones: un enfoque para corregir los déficits reproductivos, metabólicos y renales en ratones obesos negros y tostados (BTBR)

Aquí presentamos un método estándar para aislar de forma eficiente células madre y adipocitos derivados del adiposo, caracterizado por una reducción del &gt; del 90% en el tiempo de procesamiento, alta viabilidad celular y amplia compatibilidad.

Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

Aprende a trasplantar láminas de células madre derivadas de tejido adiposo para reducir fugas en anastomosis colorrectal usando un modelo de rata. Este método promueve la cicatrización tisular sin materiales sintéticos.

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata (Video) | JoVE Journal

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

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