Name: Estrategias de muestreo y procesamiento de las muestras de tejido de Biobanco de porcinos modelos biomédicos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Aprende las técnicas de sumersión y orientador para muestrear tejidos de modelos porcinos en biobancos. Estos métodos permiten estimar volúmenes y generar secciones isotrópicas para análisis morfológico cuantitativo sin sesgos.

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Los autores agradecen a Lisa Pichl excelente asistencia técnica.

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Generación de colecciones de muestras Biobanco de modelos animales porcinos requiere técnicas robustas y protocolos para la determinación de volúmenes de órganos y tejidos, la generación reproducible de representante, las muestras de tejido redundante apto para una amplia gama de métodos de análisis diferentes y por la aleatorización de la orientación de las secciones de la muestra para los análisis cuantitativos de estereológicos. Los métodos descritos en el presente artículo se adaptan a los tamaños de porcinos órganos...

En la medicina traslacional, los cerdos son cada vez más común para el uso como modelos de animales grandes1,2,3,4,5, debido a varias ventajas similitudes el porcino y anatomía humana y fisiología y la disponibilidad de métodos biológicos moleculares establecidos permitiendo generación de adaptados, modificados genéticamente modelos de cerdo para una amplia gama de condiciones de enfermedad1,4.
Sin embargo, en comparación con modelos de roedores, se limita el número de animales de un modelo de cerdo respectivo que puede prestarse para experimentos en cualquier momento. Esto es debido al intervalo de generación porcina de aproximadamente un año y los esfuerzos financieros y tiempo necesarios para la generación de modelos porcinos y cría de animales. Por lo tanto, los individuos de un modelo porcino, así como las muestras que se pueden generar de estos cerdos, son muy valiosos, especialmente si genéticamente modelos porcinos o cuestiones experimentales a largo plazo (por ejemplo, las complicaciones tardías de enfermedades crónicas) se examinan en individuos de2,6,7.
En el curso de cualquier estudio, realización de análisis adicionales que no había sido previsto en el diseño experimental inicial del estudio puede más tarde resultan para ser relevantes, por ejemplo, distintas preguntas que surgen de previamente descubiertos por dirección resultados inesperados. Si las muestras adecuadas para tales experimentos adicionales no están disponibles, desproporcionadamente elevado costo y gastos de tiempo podrían ser necesarios generar cerdos adicionales y muestras de tejido. Para estar preparado para tales eventualidades, generación de colecciones de Biobanco de conservado muestras de respaldo de diferentes órganos, tejidos o bio-líquidos, cuantitativa y cualitativamente adecuados para una amplia gama de análisis posteriores, se considera un importante enfoque2,6,7. Derivando beneficios óptima de un modelo animal porcino, la disponibilidad de muestras adecuada Biobanco también ofrece la posibilidad única para efectuar un amplio espectro de métodos de análisis diferentes sobre los materiales idénticos a nivel de órganos múltiples en la misma cada animal, por ejemplo, por la distribución de las muestras a los científicos de diferentes grupos de trabajo organizados en una red de investigación2,6,7. Además, la estrategia de muestreo '' progresista '' en biobancos también contribuye a una reducción del número de animales necesarios en un estudio. Las ventajas del modelo porcino biobancos han demostrado recientemente en un órgano múltiple, multiomics estudio, examen de órganos diafonía en un modelo porcino genéticamente modificado de la diabetes a largo plazo, utilizando muestras del Biobanco cerdo Munich MIDY 2.
Hay algunos requisitos obligatorios Biobanco de muestras generalmente deben cumplir para establecer la fiabilidad y la interpretabilidad de los resultados de los análisis realizados posteriormente. Las muestras deben generarse reproducible, y deben ser adecuadamente representante, es decir, que reflejan las características morfológicas y moleculares interesadas del tejido/órgano las muestras fueron tomadas de7. Para ser conveniente para una amplia gama de tipos de análisis posteriores, las muestras deberán tomadas en cantidades suficientes y procesadas según las demandas (incluyendo las condiciones de tiempo y temperatura) de los diferentes métodos analíticos, incluyendo descriptivo Análisis histopatológicos, como cryohistology, parafina plástico histología, inmunohistoquímica, hibridación en situ , análisis microscópico ultraestructural de electrón y diagnóstico análisis de laboratorio clínico, así como moleculares Análisis de DNA, RNA, proteínas y metabolitos.
Para permitir la evaluación de una amplia gama de distintos parámetros morfológicos cuantitativos tales como números, volúmenes, longitudes o superficies de las estructuras tisulares distintos análisis estereológicos cuantitativa, planos de sección al azar de la las muestras histológicas de los respectivos órganos/tejidos necesitan ser preparado7,8,9,10,11. En estudios morfológicos cuantitativos, la determinación precisa del volumen total del tejido, órgano o compartimiento del órgano, las muestras fueron tomadas de (es decir, el espacio de referencia) es de crucial importancia7,9 , 12 para calcular las cantidades absolutas de los parámetros de interés en el respectivo órgano, tejido u organismo. Finalmente, el efecto de la contracción relacionada con la inclusión del tejido durante la preparación de secciones histológicas tiene que ser determinada y tener en cuenta13. Por lo tanto, cuantitativos análisis estereológicos, especialmente de muestras archivadas (fijada bloques de tejido embebido, cortes histológicos, las muestras de tejido, etc.) de los estudios anteriores son a veces severamente limitada o incluso imposible12, particularmente si la volumetría de los respectivos órganos/tejidos no se realizó, si no hay diseños de muestreo adecuado se aplicaron para garantizar muestras representativas, si los números y cantidades de muestras individuales disponibles no son suficientes, o si el procesamiento de la muestras es incompatible con la estimación de los parámetros morfológicos cuantitativos de interés. Debido a los múltiples posibles factores que influyen en la adecuación de los materiales de archivo-muestra para los análisis de distintos parámetros morfológicos cuantitativos inequívocamente no puede ser respondida, pero depende de la cuidadosa evaluación de cada caso individual.
Así, como la ubicación, tamaño, número, proceso, dirección de ajuste y orientación de muestras potencialmente afectarán los resultados de los análisis posteriores, estos factores son de gran importancia y deben ser considerados en el diseño experimental de cualquier estudio. En cuanto a estos aspectos y las particularidades de la anatomía porcina, directrices de muestreo completa, detallada, a gran escala recientemente se han establecido modelos animales adaptados al porcino, proporcionando una sólida referencia estandarizados, reproducibles y la eficiente generación de muestras redundantes, adecuadamente procesadas, alta calidad de más de 50 diferentes porcino órganos y tejidos6,7.
Las descripciones metodológicas y el video tutorial se muestra en el presente artículo proporcionan detallada, ilustrativo, comprensible, instrucciones paso a paso para el funcionamiento práctico de una variedad de técnicas de volumetría, toma de muestras de tejidos porcinos y órganos y procesamiento de las muestras de tejido para métodos de diferente análisis aguas abajo. Las técnicas recomendadas incluyen métodos para determinación de densidades basadas en los principios de Arquímedes y Cavalieri9y volúmenes de órganos y tejidos, incluyendo la determinación de las dimensiones de la contracción tridimensional de tejidos relacionados con la incrustación en diferentes inclusión media14 durante el proceso de la examinación histológica, acerca de la aplicación del muestreo aleatorio sistemático ponderado de volumen posible, procesamiento de muestras de tejido muestreado para diferentes posterior Análisis7,8,9,15y generación de apropiadamente orientan y procesaron muestras para posibles análisis estereológicos cuantitativa7,8, 9,10,11. Junto a su aplicación en proyectos de Biobanco porcino, los métodos demostrados son generalmente apropiados para examinar propiedades cuantitativas histo-morfológico de órganos/tejidos todos los estudios. Además, diseños de muestreo al azar sistemático son particularmente beneficios para la generación de muestras representativas en experimentos utilizando métodos de análisis molecular para detectar alteraciones de la abundancia de, por ejemplo, ARN, proteínas o metabolitos en distintos órganos y tejidos.
Los párrafos siguientes proporcionan una breve introducción a estos métodos, mientras que su rendimiento práctico se describe en la sección de protocolo.
Determinación de volúmenes de órganos y tejidos Determinación de volúmenes y pesos de órganos es importante en varios parámetros experimentales, como estos factores podrían indicar cambios, potencialmente relacionados a experimentalmente examinan factores de interés. El volumen total de un órgano, tejido también es necesaria para calcular parámetros cuantitativos absolutos (por ejemplo, el número total de células), de densidades de volumen stereologically Estimado numérico(es decir, el número de células por unidad de volumen del tejido)7,12. Aparte de técnicas de uso de equipo técnico complejo, tales como tomography de la computadora, hay básicamente tres métodos prácticos utilizados para determinar el volumen absoluto de un órgano o tejido. El volumen de un órgano puede determinarse "volumétrica medida directa" según el principio de Arquímedes, es decir, medición del volumen de agua o solución salina desplazados por la estructura cuando completamente sumergida. Sin embargo, de órganos porcinos comparable grandes, estos enfoques son imprácticos y propensas a la imprecisión, ya que requieren matraces volumétricos/medición muy grande. Más convenientemente, se puede calcular el volumen de un órgano/tejido de su peso y densidad7,12,16, que eficientemente puede ser determinado mediante el «método de inmersión»7,12 ,16 (paso protocolo 1.1.). Volúmenes de órganos y tejidos se pueden calcular también mediante volumetría enfoques basados en el "principio de Cavalieri" (1598-1647). En términos simples, se establece el principio de Cavalieri, que si dos objetos son seccionados en planos paralelos a un plano de tierra, y los perfiles de las secciones de cortan a través de los dos objetos en la correspondiente Distancias desde el plano de tierra tienen las mismas áreas, los dos objetos tienen el mismo volumen. Así, el volumen de los objetos forma arbitrariamente puede estimarse como el producto de sus áreas de Perfil de sección en planos paralelos, igualmente distante de la sección y la distancia entre los planos de sección. Esto es comprensible con la siguiente analogía: considere dos pilas que consiste en el mismo número de monedas idénticas se colocan lado a lado, una pila con la ordenada de monedas apilado uno encima del otro dando forma cilíndrica de la pila de monedas y el otro pila de monedas con el centro coloca monedas (Figura 3A). Aunque las formas de las dos pilas de moneda son diferentes, sus volúmenes son los mismos, desde las áreas de las monedas en los niveles correspondientes de ambas pilas (es decir, las áreas de los perfiles de secciones paralelas de cortan a través de dos pilas de moneda en distancias iguales desde el de tierra) son idénticos. Estimación de los volúmenes de órganos porcinos y tejidos utilizando el principio de Cavalieri7,12,15 se describe en el paso 1.2.
Determinación del grado de contracción de tejidos relacionados con la inclusión histológica En el análisis de varios parámetros morfológicos cuantitativos medidos en las secciones histológicas del tejido, el efecto de la contracción relacionada con la inclusión del tejido que ocurre durante el proceso de la histología del tejido debe ser determinado y tomado en cuenta. El grado de contracción de tejidos relacionados con la inclusión puede ser variable y depende tanto en el tejido, su procesamiento y el medio empotrar8,13,17,18,19. Generalmente, se producen cambios relacionados con la inclusión del volumen de una muestra de tejido (es decir, principalmente la contracción) en las tres dimensiones del espacio y, por tanto, afecta a todos los parámetros dimensionales estimados por análisis cuantitativos estereológicos8 . Básicamente, se puede estimar el grado de contracción de tejidos relacionados con la inclusión, expresado como el factor de contracción de tejido lineal (fS), como se muestra en el paso 1.3. y se utiliza para la corrección de parámetros morfológicos cuantitativos (sensible a la contracción)14.
Muestreo aleatorio sistemático ponderado por el volumen de órganos/tejidos Para el establecimiento de una colección de Biobanco de muestras de órganos y tejidos porcinos, enfoques de muestreo al azar sistemático ponderado por el volumen como se describe en el paso 2 han demostrado para ser técnicas prácticas, ahorro de tiempo y eficientes para la generación de representante, tejido de usos múltiples muestras7,8,9,15.
Generación de secciones isotrópico aleatorio uniforme y Vertical uniforme aleatoria secciones para cuantitativos análisis estereológicos Las muestras de tejido de Biobanco deben ser conveniente para una amplia variedad de métodos diferentes análisis estereológicos cuantitativa para la estimación de un máximo de parámetros que no se pudo determinar sin una muestra adecuadamente preparada. Casi todos los parámetros estereológicos cuantitativos pueden determinarse, utilizando «isotrópico (independiente) uniforme aleatorio (IUR) las secciones»8,9. En las secciones IUR, la orientación tridimensional del plano de sección de la muestra de tejido es al azar. Esto puede lograrse por asignación al azar de la posición de la muestra de tejido en relación con la posición del plano de sección, como se aplica en el método de "Isector"11 (paso 3.1 del Protocolo), o por asignación al azar de la orientación del plano de sección relativa a la muestra de tejido, como en el método de "Orientadores"10 (paso 3.2 del Protocolo). En muestras de tejido, como piel o mucosa muestra mostrar un eje vertical presente de forma natural, o definido y bien identificable, preparación de "uniforme aleatorio (VUR) las secciones verticales" (paso de protocolo 3.3.) estrictamente seccionado en el plano de su eje vertical es ventajoso8,20. Para un discurso completo de los fundamentos teóricos del muestreo de IUR/VUR y una discusión amplia de posibles análisis estereológicos cuantitativas aguas abajo, el lector interesado se refiere a los libros de texto de estereología cuantitativa en la vida Ciencias8,9.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, Alemania</td><td>Agar (polvo), Cat.: 5210.3</td><td>Disolver aproximadamente 1 g de agar en 10 ml de agua fría en un vaso de vidrio o plástico, calentar en horno microondas a 700 W, hervir la solución dos veces agitando rigurosamente. Echa en el molde mientras aún está caliente y deja que se solidifique. Precaución: Mientras manipula con agar líquido caliente, use gafas protectoras y guantes.</td></tr><tr><td>Pinza</td><td>Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Alemania</td><td>Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat.: 3664902</td><td>Cualquier tipo de pinza (mecánica o electrónica) también servirá.</td></tr><tr><td>Moldes de fundición (metal)</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; ECM, Alemania</td><td>Einbettsch&auml; lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Cat.: 14302b</td><td>Cualquier otro tipo de molde de fundición de metal utilizado para la inclusión en parafina también servirá.</td></tr><tr><td>Plantillas de copia de cuadrículas cruzadas (5 mm - 6 cm)</td><td>n.a.n.a.Las</td><td></td> <td>plantillas de copia de cuadrículas cruzadas (5 mm - 6 cm) se proporcionan en el archivo de datos complementario de Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)</td></tr><tr><td>Plantillas de copia de círculos equiangulares y ponderados por coseno</td><td>n.a.n.a.Las</td><td></td> <td>plantillas de copia de círculos equiangulares y ponderados por coseno se proporcionan en Nyengaard & Gundersen</fuerte>. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) y en Gundersen et al. Principios estereológicos y procedimientos de muestreo para patólogos toxicológicos. En: Haschek y Rousseaux&agudo; s Manual de Patología Toxicológica. 3ª ed., 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).</td></tr><tr><td>Abrazaderas plegables (clips de carpeta YIHAI, 15 mm y 19 mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., China</td><td>Y10006 e Y10005</td><td>Cualquier otro tipo de abrazaderas plegables estándar para oficinas también servirá.</td></tr><tr><td>Pinzas (anatómicas)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Alemania</td><td>neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811</td><td>Cualquier tipo de pinza anatómica servirá.</td></tr><tr><td>Solución de formaldehído al 4%</td><td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Alemania</td><td>Formaldehído 37/40 %, Cat.: 1000411525005</td><td>Diluido al 4% a partir de una solución concentrada. Tampón a pH neutro. Use protección adecuada para los ojos, las manos y las vías respiratorias. Procese muestras de tejido fijadas en solución de formaldehído debajo de una campana extractora y use gafas protectoras y guantes de laboratorio.</td></tr><tr><td>Papel cuadriculado (para calibración)</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Alemania. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514</td><td>Cualquier tipo de papel cuadriculado (a escala milimétrica) servirá.</td></tr><tr><td>Vasos de precipitados de laboratorio (5 ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Alemania</td><td>Becherglas SIMAX&reg; , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036</td><td>Cualquier tipo de vasos de vidrio o plástico de 5 y 100 ml de volumen servirá.</td></tr><tr><td>Báscula</td> de <td>laboratorioMettler Toledo GmbH, Gie&szlig; es, Alemania</td><td>PM6000</td><td>Cualquier báscula de laboratorio estándar con rangos de medición entre 0,1 mg y aproximadamente 20 g, respectivamente entre 100 mg y aproximadamente 500 g hará</td></tr><tr>Sartorius<td></td><td>AG, G&ouml; ttingen, Alemania</td><td>BP61S Cuchillas</td><td></td></tr><tr><td>de micrótomo</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, Alemania</td><td>FEATHER Microtomo blasdes S35, Cat.:14700</td><td>Cualquier tipo de hojas de micrótomo de un solo uso servirá.</td></tr><tr><td>Morfometría/planimetría software/sistema</td><td>National Institute of Health (NIH)</td><td>ImageJ</td><td>Descargar de https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Alemania</td> Sistema <td>de análisis de</td><td></td><td>imágenes VideoplanTM</td> Agotado</tr><tr><td>Cámara</td> fotográfica <td>Nikon</td><td>D40</td><td>Cualquier tipo de cámara fotográfica digital que se pueda montar en un trípode servirá.</td></tr><tr><td>Transparencias de plástico</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Alemania</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Cat.:&nbsp; 3562</td><td>Cualquier transparencia de plástico imprimible (láser) servirá.</td></tr><tr><td>Tablas de números aleatorios</td><td>n.a.n.a.Las</td><td></td> <td>tablas de números aleatorios se pueden generar cómodamente (con números definidos de números aleatorios y dentro de intervalos definidos), utilizando generadores de números aleatorios, como: https://www.random.org/</td></tr> <tr><td>Hojas de afeitar</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Alemania</td><td>T5016</td><td>Cualquier tipo de hojas de afeitar servirá.</td></tr><tr><td>Regla</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, Jena, Alemania. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, transparente, Cat.: ln30</td><td>Cualquier tipo de regla a escala de cm-mm servirá también.</td></tr><tr><td>Solución salina (0,9%)</td><td>Carl Roth GmbH, Alemania</td><td>Cloruro de Natrium, >99% Cat.: 0601.1</td><td>Para preparar solución salina al 0,9%, disuelva 9 g de NaCl en 1000 ml de agua destilada a 20 °C.</td></tr><tr><td>Hojas de bisturí</td><td>Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Alemania</td><td>BRAUN Cuchillas quirúrgicas N&deg; 22</td><td>Cualquier tipo de hojas de bisturí servirá.</td></tr><tr><td>Escáner</td><td>Hewlett-Packard</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>Cualquier tipo de escáner de oficina estándar capaz de escanear con resoluciones de 150-600 ppp servirá.</td></tr><tr><td>Dispositivos de corte</td><td>n.a.n.a.Los</td><td></td> <td>ejemplos de dispositivos de corte autoconstruidos se pueden encontrar en Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) y en el archivo de datos complementario de Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).</td></tr><tr><td>Moldes de fundición esférica (por ejemplo, de 25,5 mm de diámetro)</td><td>Pralinen-Zutaten.de, Windach, Alemania</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mm</td><td>Los moldes de fundición esférica también pueden ser de construcción propia u obtenerse de otros proveedores de confitería (para bombones). Los moldes de fundición indicados aquí son en realidad el paquete/envoltura de cuerpos de pralinés huecos (primero coma los bombones y luego use el paquete para la generación de secciones del sector i)</td></tr><tr><td>Alambre fino</td><td>Basteln & Hobby Schobes, Stra&szlig; lejana, Alemania. www,bastel-welt.de</td><td>Messingdraht (0.3 mm) Cat.: 216464742</td><td>Cualquier otro tipo de alambre delgado también servirá.</td></tr><tr><td>Papel de seda</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Alemania</td><td>Toallitas de trabajo Declcate-Blanco, Cat.: 1-5305</td><td>Cualquier otro tipo de papel de papel de papel de laboratorio también servirá.</td></tr><tr><td>Bolígrafo resistente al agua</td><td>Staedler Mars GmbH & Co KG, N&uuml; rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor permanente 313, 0,4 mm, S, negro, Cat.: 313-2</td><td>Cualquier otro tipo de bolígrafo resistente al agua también servirá.</td></tr></tbody></table>

estrategias de muestreo y procesamiento de las muestras de tejido de biobanco de porcinos modelos biomédicos

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

En la investigación médica aplicada, modelos porcinos constantemente han vuelto más populares. Considerando el alto valor de cada animal, particularmente de cerdos genéticamente modificados modelos y a menudo limitado número de animales disponibles de estos modelos, establecimiento de colecciones (Biobanco) de muestras de tejido adecuadamente procesado adecuado para un amplio espectro de métodos de análisis posteriores, incluyendo análisis no especificados en el momento del muestreo, representan enfoques significativos para aprovechar al máximo el valor traslacional del modelo. Con respecto a las peculiaridades de la anatomía porcina, recientemente han establecido directrices amplias para generación estandarizado de representante, muestras de alta calidad de diferentes órganos porcinos y tejidos. Estas directrices son indispensables para la reproducibilidad de los resultados y su comparabilidad entre diferentes estudios e investigadores. La grabación de los datos básicos, como el órgano pesos y volúmenes, la determinación de los lugares de muestreo y de los números de las muestras de tejido que se generen, así como su orientación, tamaño, proceso y direcciones de ajuste, es factores relevantes determinar la generalización y la utilización de la muestra para análisis morfológicos moleculares, cualitativas y cuantitativas. Aquí, se presenta una demostración ilustrativa, práctica, paso a paso de las técnicas más importantes para la generación de representante, espécimen multiuso Biobanco de tejidos porcinos. Los métodos aquí descritos incluyen la determinación de volúmenes de órganos y tejidos y densidades, la aplicación de un procedimiento de muestreo al azar sistemático ponderado por el volumen de órganos parenquimales por punto de conteo, la determinación del grado de contracción de tejido relacionadas con la fijación histológica de las muestras y la generación de muestras aleatoriamente orientadas para análisis estereológicos cuantitativos, como isotrópica uniforme aleatorio (IUR) las secciones generadas por los métodos de "Orientador" y "Isector" y vertical uniforme aleatorias secciones (VUR).

Técnica de inmersión para la determinación de la densidad del tejido/órgano
Figura 12A -B muestra la representación determinación de la densidad y el volumen de un riñón porcino utilizando la técnica de inmersión que se describe en el paso 1.1 (figura 1, figura 2). Resultados más representativos de las mediciones de densidad d...

La aplicación práctica y el rendimiento de métodos para la generación de muestras de tejido representativo de modelos animales porcinos para un amplio espectro de análisis aguas abajo en el Banco de proyectos se demuestran, incluyendo volumetría, muestreo al azar sistemático, y procesamiento de muestras de tejido de tipo cualitativo y cuantitativo análisis morfológicos y moleculares de diagnóstico.

Estrategias de muestreo y procesamiento de las muestras de tejido de Biobanco de porcinos modelos biomédicos

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Este video muestra dos técnicas clave para muestrear y procesar muestras de tejido porcino de biobancos. La técnica de inmersión estima de forma fiable el volumen total de órganos y tejidos, y la técnica del orientador genera secciones aleatorias de tejido isotrópico para una estimación no sesgada de los parámetros morfológicos cuantitativos. La principal ventaja de la técnica de inmersión para la determinación de la densidad tisular es que se puede aplicar a cualquier tipo de tejido y que produce resultados fiables tanto para muestras pequeñas como grandes.Las ventajas de la técnica del orientador son que es altamente eficiente y también trabaja con grandes muestras de tejido. Para comenzar la volumetría de un órgano grande, extirpe un trozo de tejido del tamaño adecuado del órgano. Frote cuidadosamente la muestra con una toalla de papel para eliminar el exceso de sangre y líquido tisular.A continuación, pese la muestra en una báscula de precisión y registre el peso de la muestra. Añadir 0,9% de solución salina a un vaso de precipitados de tamaño adecuado. No llene completamente el vaso de precipitados para evitar que se desborde durante la inmersión del tejido.Coloque el vaso de

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Investigación

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Medicine

Medicina

Este es un protocolo para la preparación óptima del tejido para análisis genómicos, transcriptómicos y proteómicos de murciélagos atrapados en la naturaleza. Incluye protocolos para la captura y disección de murciélagos, la preservación de tejidos y el cultivo celular del tejido murciélago.

Colección de tejidos de murciélagos para análisis de émica y cultivo celular primario

En este protocolo, se diseñaron imprimaciones específicas porcinas, se construyeron fragmentos de ADN específicos de plásmidos específicos que contienen porcinos y se establecieron curvas estándar para la cuantificación. Utilizando imprimaciones específicas de especies, cpsDNA fue cuantificado por qPCR en modelos de trasplante de células de cerdo a ratón y modelos de trasplante de parches de arteria de cerdo a mono.

Cuantificación del ADN específico de la porcino circulante en la sangre de un modelo de trasplante

Este protocolo detalla la técnica para la extirpación del cerebro del cerdo en su totalidad y la disección de varias regiones cerebrales comúnmente estudiadas en neurociencia.

Extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado

En el siguiente trabajo, describimos los pasos consecutivos necesarios para el establecimiento de un gran biobanco de cáncer colorrectal y pancreático.

Creación y mantenimiento de un biobanco vivo - Cómo lo hacemos

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

Caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina

Los biobancos son recursos cruciales para la investigación biomédica y el Biobanco de Medicina Traslacional y Digital del Instituto Europeo de Oncología es un modelo en este campo. Aquí, proporcionamos una descripción detallada de los procedimientos operativos estándar de los biobancos para la gestión de diferentes tipos de muestras biológicas humanas.

Biobanco para Medicina Traslacional: Procedimientos Operativos Estándar para el Manejo Óptimo de Muestras

Este protocolo describe un método para facilitar la recolección de muestras de prostatectomía radical. El objetivo es mapear, caracterizar y micro-macro diseccionar muestras de tejido de los especímenes en base a criterios anatomopatológicos antes de almacenarlas en un Biobanco.

Mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas

Este protocolo describe la realización de una craniectomía utilizando un taladro neumático de alta velocidad en un cerdo Landrace danés de 3 meses de edad. El acceso se realiza a través del hueso frontal y revela la duramadre ventral y los hemisferios cerebrales subyacentes. Este procedimiento permite acceder a una gran parte del cerebro del cerdo.

Acceso al cerebro porcino a través de una craneectomía con taladro neumático de alta velocidad

Aquí presentamos un método estándar para aislar de forma eficiente células madre y adipocitos derivados del adiposo, caracterizado por una reducción del &gt; del 90% en el tiempo de procesamiento, alta viabilidad celular y amplia compatibilidad.

Aislamiento eficiente de células madre y adipocitos derivados del adiposo a partir de tejido adiposo porcino

En las secciones siguientes, se describen procedimientos para la preparación de microesferas de alginato para su uso en aplicaciones biomédicas. En especial, ilustran una técnica para la creación de múltiples capas de alginato microesferas para el doble propósito de la celda y la encapsulación de proteínas como un posible tratamiento para la diabetes tipo 1.

Generación de microesferas de alginato para aplicaciones biomédicas

Aprende las técnicas de sumersión y orientador para muestrear tejidos de modelos porcinos en biobancos. Estos métodos permiten estimar volúmenes y generar secciones isotrópicas para análisis morfológico cuantitativo sin sesgos.

Estrategias de muestreo y procesamiento de las muestras de tejido de Biobanco de porcinos modelos biomédicos

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