Estrategias de muestreo y procesamiento de las muestras de tejido de Biobanco de porcinos modelos biomédicos

Este video muestra dos técnicas clave para muestrear y procesar muestras de tejido porcino de biobancos. La técnica de inmersión estima de forma fiable el volumen total de órganos y tejidos, y la técnica del orientador genera secciones aleatorias de tejido isotrópico para una estimación no sesgada de los parámetros morfológicos cuantitativos. La principal ventaja de la técnica de inmersión para la determinación de la densidad tisular es que se puede aplicar a cualquier tipo de tejido y que produce resultados fiables tanto para muestras pequeñas como grandes.

Las ventajas de la técnica del orientador son que es altamente eficiente y también trabaja con grandes muestras de tejido. Para comenzar la volumetría de un órgano grande, extirpe un trozo de tejido del tamaño adecuado del órgano. Frote cuidadosamente la muestra con una toalla de papel para eliminar el exceso de sangre y líquido tisular.

A continuación, pese la muestra en una báscula de precisión y registre el peso de la muestra. Añadir 0,9% de solución salina a un vaso de precipitados de tamaño adecuado. No llene completamente el vaso de precipitados para evitar que se desborde durante la inmersión del tejido.

Coloque el vaso de precipitados en la báscula y, a continuación, sumerja una pinza o un portamuestras de construcción propia en la solución salina hasta que la marca en las pinzas o en el portamuestras alcance el líquido. A continuación, restablezca la visualización de la escala a cero. Fije con cuidado la muestra de tejido a las pinzas o al portamuestras y sumerja completamente la muestra en la solución salina hasta alcanzar la posición marcada.

Para registrar mediciones de densidad fiables, es importante asegurarse de que la muestra esté completamente sumergida y evitar cualquier contacto de la muestra sumergida con las paredes internas o el fondo del vaso de precipitados. Mientras sostiene la muestra en su posición, registre el peso que se muestra en la báscula. Utilice esta medición y la densidad de solución salina a temperatura ambiente para calcular el volumen de la muestra.

A continuación, calcule la densidad de la muestra de tejido a partir del peso de la muestra y su volumen. En el caso de órganos y tejidos grandes, como este riñón, realice mediciones repetidas con varias muestras y calcule la densidad media a partir de las mediciones individuales. En el caso de muestras pequeñas y órganos pequeños medidos en total, como la glándula pituitaria, repita la medición tres veces antes de calcular la densidad media de los órganos a partir de los valores de medición únicos.

Por último, calcule el volumen total del órgano, tejido o compartimento del órgano a partir de su peso y densidad. Coloque una muestra de tejido fijo en una impresión de un círculo equiangular con un borde paralelo a la dirección de cero a 180 grados. A continuación, utiliza una tabla de números aleatorios para determinar un ángulo aleatorio.

Encuentra las marcas correspondientes en la escala del círculo equiangular. Usando estas marcas, corte una sección a través de la muestra con el plano de sección orientado paralelo a la dirección del ángulo aleatorio indicado en la escala del círculo equiangular y una vertical a la superficie en reposo de la muestra. Coloque el bloque de tejido con la superficie de la sección hacia abajo en un círculo ponderado por coseno.

Con el borde de la superficie de reposo colocado paralelo a la dirección uno a uno. Ahora corte una nueva sección a través de la muestra en un ángulo aleatorio determinado usando la tabla de números aleatorios. El plano de sección resultante es una sección aleatoria uniforme isótropa.

Esta tabla muestra las densidades representativas de varios tejidos y órganos porcinos determinadas mediante la técnica de inmersión. La mayoría de los tejidos porcinos muestran valores de densidad ligeramente superiores a uno que se refiere a la densidad del agua. Mientras que los tejidos que nadan en solución salina, como el tejido adiposo, por ejemplo, muestran densidades inferiores a uno.

En esta figura se muestran cuatro secciones representativas de IUR del miocardio ventricular izquierdo porcino preparadas con la técnica del orientador. Obsérvese los ángulos de corte modificados en las diferentes secciones IUR. Una vez dominada, la técnica de inmersión para la determinación de la densidad tisular se puede realizar en pocos minutos.

Si se realiza correctamente. Las secciones isotrópicas uniformes de tejido aleatorio generadas con la técnica del orientador son adecuadas para la estimación de cualquier parámetro morfológico cuantitativo utilizando métodos de análisis estereológico apropiados. Música digital.