Composición corporal y análisis jaulas metabólico en ratones de reserva grasa alta

El objetivo de este procedimiento es recopilar la composición corporal y las mediciones metabólicas de los ratones, como los porcentajes de grasa y masa magra y el gasto energético. Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas importantes sobre el metabolismo de los ratones, como por ejemplo, ¿qué tan gordos están mis ratones? ¿Y por qué mis ratones están tan gordos?

La principal ventaja de estas técnicas es que se pueden completar en ratones vivos conscientes y, por lo tanto, se pueden repetir numerosas veces a lo largo de un estudio. Antes de escanear ratones, realice una prueba del sistema en la máquina analizadora de composición corporal una vez que la máquina se haya calentado durante unas horas. Utilice los estándares llamados Muestra de prueba del sistema de aceite de canola o COSTOS.

Abra el software del sistema y, a continuación, haga clic en el botón de la barra de herramientas Prueba del sistema o presione Alt+Y en el teclado. Antes de comenzar la prueba, coloque el estándar correcto dentro del pórtico del sistema. A continuación, ejecute la prueba de diagnóstico siguiendo las indicaciones del sistema según sea necesario.

Una vez que el sistema haya pasado la prueba, proceda con el diagnóstico de un mouse. Ahora coloque el mouse en un soporte. Un soporte opaco rojo es el menos estresante.

Coloque el soporte en un ángulo de 45 grados e inserte el ratón. A continuación, levante lenta y cuidadosamente el soporte hasta que quede vertical. A continuación, inserte un delimitador en el soporte para limitar el movimiento del ratón.

En algunas circunstancias, con ratones extremadamente activos, puede ser necesario asegurar manualmente el delimitador. Ahora, dentro del software, seleccione una carpeta para guardar los datos y cree un nombre de archivo. A continuación, si es necesario, reduzca la cantidad de ruido aleatorio en las mediciones de grasa y magro aumentando el número de acumulaciones primarias de la exploración.

Sin embargo, por lo general, la configuración predeterminada proporcionará el nivel necesario de precisión. Si no se necesitan los datos de agua libre y agua total, apague la etapa de agua mediante el botón de alternancia adecuado. Esto acelerará significativamente el escaneo.

Ahora inicie el escaneo seleccionando Iniciar escaneo o presionando F5 en el teclado. Introduzca todos los datos relevantes sobre el animal y pulse OK o F5 para comenzar el escaneo, que durará aproximadamente un minuto. Después de recopilar los datos, devuelva el animal a su jaula.

Limpie siempre de forma segura el soporte acrílico entre usos, por ejemplo, con agua tibia y jabón. Más tarde, una vez que se hayan escaneado todos los animales, exporte los datos para su posterior análisis y recopilación. Antes de comenzar, asegúrese de que la máquina haya estado encendida durante más de dos horas.

En el Sistema de Monitoreo de Animales, abra el programa de control y seleccione la opción de utilidad Oxymax en el menú de herramientas para iniciar las bombas. Luego revise el desecante y reemplácelo con material seco nuevo si es necesario. Además, verifique el estado de la trampa de amoníaco y cal sodada y reemplácela si es necesario.

A continuación, conecte el tanque de gas de calibración al sistema mediante un regulador y una manguera. Luego abra la válvula y emita de cinco a 10 PSI de gas. A continuación, en el software, seleccione Calibración en el menú Herramientas y compruebe que los caudales de muestra y referencia estén exactamente a 0,4 litros por minuto.

Luego verifique que el sensor de oxígeno de zirconio se caliente a 725 grados Celsius más o menos un grado Celsius. A continuación, asegúrese de que el secador de muestras y de referencia y las bombas de aire estén encendidos y vuelva a verificar que el gas de calibración esté conectado y ajustado. Ahora proceda con la calibración y, según sea necesario, ajuste ligeramente el control OFFSET en la parte frontal del sensor de oxígeno de circonio para lograr un valor de relación de oxígeno dentro de límites aceptables.

Después de calibrar con éxito los sensores de oxígeno y dióxido de carbono, separe el patrón de gas y lea los niveles de oxígeno del gas atmosférico, que deben ser de aproximadamente 20,92. Si mide la ingesta de alimentos, considere usar una dieta de ratón en polvo. A continuación, cargue la tolva de alimentos presionando la plataforma accionada por resorte.

A continuación, llene las botellas de agua y organice la comida. Ahora pesa e inspecciona la salud de los ratones antes de proceder a ensamblar las cámaras. A continuación, coloque la tolva de alimentos en la balanza.

Encima de ella, coloque la cámara con la plataforma perforada. A continuación, coloque con cuidado el ratón en la cámara y fije una tapa con los clips delantero y trasero. A continuación, sujete la botella de agua para completar la configuración.

Ahora configure el próximo mouse y después de que todos los ratones estén listos, verifique dos veces las tapas de la cámara, los ratones y el agua. Para ejecutar el experimento, seleccione Abrir archivo experimental en el menú. A continuación, seleccione la plantilla adecuada.

A continuación, en Configuración, defina los parámetros del experimento que se deben registrar y anule la selección de las cámaras que no estén en uso. A continuación, seleccione la ubicación en la que se va a guardar el experimento. Si se va a medir la ingesta de alimentos, tara la balanza.

A continuación, inicie la captura de datos seleccionando Ejecutar en el menú Experimento. Las primeras 24 horas se pueden utilizar como fase de aclamación y las siguientes más de 24 horas, se utilizan para el análisis de datos. Al menos dos veces al día, controle los animales y la recopilación de datos.

Asegúrese de que cada uno tenga acceso a alimentos y agua y busque signos de angustia, como la excavación del piso perforado. En el software, verifique la recopilación de datos en tiempo real. Vaya a la pestaña Metabólica para ver el consumo de oxígeno, el RER y el gasto de energía.

El O2In debe leerse entre 20,90 y 20,94, el CO2IN debe leer aproximadamente 0,04, el RER debe leer entre 0,7 y uno, el caudal debe estar en una constante de 0,5 a 0,6 litros por minuto. En la pestaña Actividad, se muestran datos en tiempo real sobre las roturas de haz. En las pestañas Alimentación, se muestran datos en tiempo real sobre el consumo de alimentos.

Para finalizar el experimento, seleccione Detener en el menú Experimento y exporte los resultados como archivos CSV para su análisis. Luego inspeccione la salud de los ratones, péselos y luego devuélvalos a sus jaulas de origen. En los siguientes gráficos, los cuadrados negros representan a los ratones alimentados con la dieta alta en grasas y los círculos negros representan a los ratones alimentados con la dieta chow estándar.

Los cambios en los parámetros de composición corporal causados por la alimentación con alto contenido de grasa se midieron mediante EchoMRI utilizando los procedimientos descritos. Después de una semana en la dieta alta en grasas, hubo un aumento de peso significativo que aumentó en tres semanas. El cambio de peso podría atribuirse claramente a un cambio en la masa grasa.

No se debió a un cambio en la masa magra, el contenido de agua libre o el contenido total de agua. En los siguientes gráficos de barras, las columnas blancas representan a los ratones alimentados con comida y las columnas negras representan a los ratones alimentados con alto contenido de grasa. Las mediciones de V02, cuando se normalizaron a la masa animal, no mostraron cambios después del período de tres semanas.

Del mismo modo, las mediciones del gasto energético, cuando se normalizaron a la masa animal, no mostraron cambios. La actividad física, medida por las pausas del haz, varió según la hora del día, pero fue la misma para ambos grupos. La ingesta de alimentos no fue diferente cuando se normalizó a la masa corporal.

Esta cantidad es significativamente mayor ingesta de energía con la dieta alta en grasas. Una vez establecido, al no ser invasivo, el análisis de la composición corporal se puede realizar a diario si es necesario. Si bien las sesiones prolongadas de monitoreo metabólico animal pueden considerarse más estresantes para los ratones debido al aislamiento social, estos análisis también se pueden realizar numerosas veces dentro de un Las implicaciones de estas técnicas se extienden hacia la identificación de objetivos terapéuticos para la obesidad y los trastornos metabólicos, como la diabetes tipo dos, mediante el fenotipado metabólico cuidadoso de ratones en lo que respecta a manipulaciones genéticas o tratamientos farmacológicos.

En última instancia, estos métodos no solo pueden proporcionar información sobre la obesidad, sino también sobre otras afecciones, como modelos masivos de sarcopenia, cáncer, caquexia, distrofia muscular o distrofia de Widi.